一种口服免疫的禽流感灭活疫苗制造技术

本发明专利技术提供一种口服免疫的禽流感灭活疫苗，其中抗原为灭活的禽流感病毒H9N2亚型WL

【技术实现步骤摘要】
一种口服免疫的禽流感灭活疫苗


[0001]本专利技术属于生物疫苗制品
，具体涉及一种口服免疫的禽流感灭活疫苗。
技术背景
[0002]禽流感是目前危害世界养禽业发展的重要疾病，我国自1994年报道鸡群中发生H9亚型禽流感以来，该病在我国大多数省份流行。
[0003]H9亚型禽流感病毒感染家禽后会出现产蛋下降、生长迟缓等临床症状，与其他疾病混合感染时常出现死亡现象，从而给家禽养殖业造成比较严重的经济损失，是危害我国养殖业的重要疾病之一。H9亚型禽流感病毒的致死率虽不如高致病性禽流感，但造成的经济损失并不亚于高致病性禽流感病毒，其疫病的防控具有重大的经济意义。
[0004]H9亚型禽流感一年四季均可发生，但在冬春季和气温骤冷骤热的季节多发。病毒在禽类的呼吸道和肠道内繁殖，可从呼吸道、结膜和粪便中排出。被感染禽群的粪便、饲料、水、设备、笼具、衣物、运输车辆和哺乳动物、昆虫等，都可传播疾病。
[0005]现有的禽流感疫苗均为灭活苗，仅能预防鸡的禽流感体内感染，对于鸡禽流感的呼吸道、肠道感染没有抑制作用，而消化道和呼吸道是诸多病原微生物感染的主要途径。目前临床上很难观察到禽群H9亚型禽流感的单纯感染，在临床见到更多的是与其他病原体的混合或继发感染，如与大肠杆菌、鸡毒支原体、传染性支气管炎等的混合感染，从而造成较高的死亡率。通过饮水免疫直接切断病原微生物的入侵和向外释放的途径，将有助于预防禽流感等传染性疾病。
[0006]同时，国内外禽流感及其多联多价疫苗大部分为鸡胚源灭活疫苗，其免疫方式均为注射免疫。鸡胚源疫苗在鸡胚尿囊液的收获方面存在困难，存在产品批次间不稳定、劳动需求大、污染风险高等问题。而注射免疫劳动强度大，操作时间长，动物应激反应大，对于大规模养殖局限性较大。
[0007]禽流感病毒属甲型流感病毒，流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科。病毒表面糖蛋白具有持续进化的特性，使得导致该疫病的病原每年的出现都有所差异。禽流感的这种抗原变异性是在自身的复制机制基础上使自身适应其宿主，从而获得大流行的潜力。而且，病毒变异率快，导致已有病毒株制备的疫苗免疫效果下降较快。因此，需要通过不断筛选新毒株来保证疫苗的免疫效力。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种口服免疫的禽流感灭活疫苗，用于增强鸡对禽流感疾病的免疫力。
[0009]本专利技术首先提供一株禽流感病毒，命名为禽流感病毒H9N2亚型WL
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19株，于2021年8月5日保藏在中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V202163。
[0010]本专利技术所提供的禽流感病毒H9N2亚型WL
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19株用于制备灭活疫苗。
[0011]本专利技术再一个方面提供一种口服免疫的禽流感灭活疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原为灭活的禽流感病毒H9N2亚型WL
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19株；
[0012]所述的疫苗佐剂包含有水相和油相，其中水相包含有质量百分比分别为1％～2％的壳聚糖，0.002％～0.005％的黄芪多糖，0.09～0.1％的葡萄糖；油相中包含有体积百分比分别为80～90％的角鲨烯，5～10％的聚氧乙烯蓖麻油，5～10％的聚醚；
[0013]作为实施例的具体记载，所述的水相和油相的体积比为9:1。
[0014]所述的灭活，作为实施例的一种具体记载，是使用β
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丙内酯(BPL)作为灭活剂进行灭活。
[0015]本专利技术通过所筛选的病毒株来制备疫苗，所制备的疫苗的安全性良好，接种雏鸡后，未出现因口服疫苗引起的任何局部和全身不良反应。采用抗体效价测定进行评价，结果显示本专利技术中制备的疫苗免疫后21天抗体≥1：64，说明本专利技术制备的疫苗对鸡群能够提供有效的免疫保护，具有很好的商品化开发前景。
[0016]本专利技术所制备疫苗采用流行毒株，可以解决旧有疫苗对鸡禽流感疾病保护效果下降的问题，对于鸡群有更好的保护作用，可以保护鸡群不受流行毒株感染。本专利技术疫苗采用口服免疫，其作用于鸡的鼻咽黏膜，能有效阻断禽流感病毒的感染，相较于现有的通过皮下注射的禽流感灭活苗仅仅能保护鸡群不感染，无法阻断病毒传播的现状，本疫苗可以起到净化鸡场的作用，直接阻断禽流感病毒的传播，其生物安全意义重大。
附图说明
[0017]图1为H亚型鉴定PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；其中，M为Marker DL2000，泳道1为阳性对照，泳道2为WL
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19株，泳道3为SPF鸡胚液；
[0018]图2为WL
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19株HA基因同源性分析图；
[0019]图3为WL
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19株HA基因遗传进化分析图；
[0020]图4为N亚型鉴定PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；M为Marker DL5000，泳道1为WL
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19株，泳道2为阳性对照，泳道3为SPF鸡胚液；
[0021]图5为WL
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19株NA基因同源性分析图；
[0022]图6为WL
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19株NA基因遗传进化分析图。
具体实施方式
[0023]本专利技术从山东省临沂市某肉鸡场发病鸡群中分离得到一株禽流感病毒株，与近年的H9亚型分离株同源性高、亲缘关系近，为流行性毒株。使用该分离的病毒株制备得到一种可通过口服免疫的灭活疫苗，可应用于鸡禽流感的黏膜免疫，阻断鸡禽流感病毒感染鸡呼吸道和消化道，防治鸡禽流感病毒。相比较于现有的禽流感疫苗，本专利技术所提供的口服灭活疫苗对于现在流行的病毒株的交叉免疫保护效果更好，对于鸡禽流感疾病的防治更有效。
[0024]本专利技术实施例中使用的材料及来源信息如下：
[0025]SPF鸡胚：购自北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司；
[0026]SPF鸡：自行孵化SPF鸡胚至所需日龄使用；
[0027]NDV阳性血清、EDSV阳性血清及SPF鸡血清：均购自中国兽医药品监察所；
[0028]H9亚型AIV阳性血清、H5亚型AIV阳性血清：购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究
所；
[0029]H9N2亚型禽流感病毒HN106株：青岛蔚蓝生物制品有限公司自行分离鉴定的毒株。
[0030]下面结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述。
[0031]实施例1病毒株的分离与鉴定
[0032]从山东省临沂市某肉鸡场发病鸡群中分离到有血凝活性的分离物，该分离物的血凝活性能被H9亚型AIV阳性血清所抑制，而不能被H5亚型AIV阳性血清、NDV阳性血清及EDSV阳性血清所抑制；用H亚型和N亚型禽流感鉴定引物进行RT
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PCR扩增和序列分析，结果表明该分离物为H9N2亚型禽流感病毒。HA和NA基因的全序列分析结果表明所分离的毒株与近年的H9亚型分离株同源性高、亲缘关系近，为当前流行毒株。
[0033]该分离毒株对42日龄SPF鸡的IVPI为0，属于低致病力禽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株禽流感H9N2亚型病毒，其特征在于，所述的禽流感H9N2亚型病毒的保藏编号为CCTCC No：V202163。2.权利要求1所述的禽流感H9N2亚型病毒在制备疫苗中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的疫苗为灭活疫苗。4.一种口服免疫的禽流感灭活疫苗，其特征在于，所述的灭活疫苗包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原为灭活的权利要求1所述的禽流感H9N2亚型病毒。5.如权利要求4所述的灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗佐剂包含有水相和油相，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张孝智，徐宏军，董婷婷，侯晓岚，杨杰华，李义星，赵玉惠，王麒文，高杰，张艳平，王宗祥，王少沛，张洪磊，李文华，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：