抗人IgGFc自组装蛋白在免疫分析中的应用制造技术

本发明专利技术属于纳米技术，免疫学和医学检测的交叉领域，具体涉及抗Fc自组装蛋白在免疫分析中的应用。本发明专利技术通过制备抗人IgG Fc自组装蛋白，并将其应用到酶联免疫法(Elisa)中作为酶标二抗检测病人血清中的抗体。实验表明，本发明专利技术制备的重组铁蛋白αFc

【技术实现步骤摘要】
抗人IgG Fc自组装蛋白在免疫分析中的应用


[0001]本专利技术属于纳米技术，免疫学和医学检测的交叉领域，具体涉及抗人IgG Fc自组装蛋白在免疫分析中的应用。

技术介绍

[0002]免疫分析是通过“抗体
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抗原特异性结合”的原理，对样品内蛋白生物标记进行检测的方法。免疫分析具有有效灵敏度、特异性、快速和低成本的优点，可对大量样本进行分析，能够用于样本的定性筛选，也能对样本进行定量测定等优点。常用的免疫分析技术有酶联免疫分析、荧光免疫分析、放射免疫分析、胶体金免疫技术、化学发光免疫技术、免疫扩散和免疫电泳等。酶标二抗是抗体识别靶标，再通过显色反应，实现免疫技术的可视化。免疫分析检测微量或超微量待测物质往往需要借助一种放大系统把抗原和抗体的结合反应信息予以展现和放大。
[0003]酶标二抗是将单个二抗抗体和HRP酶进行化学偶联，简单“酶标二抗”的免疫检测原理。由于抗体表面面积和官能团数量的限制，该方法仅能在一个抗体上标记最多三个HRP酶。由于该复合物的聚合度低下，灵敏度不足。目前国内销售的二抗产品大多是进口分包装，国内的二抗产品由于低HRP标记效率和低亲和力，灵敏度较低。
[0004]有研究发现抗Fc片段的功能肽段可以很好的识别人IgG(专利 WO2001045746A2)。与人免疫球蛋白IgG Fc片段结合的13个氨基酸，与Fc的结合能力很强，仅比protein A和protein G弱两倍。用多聚二抗代替传统的二抗，通过提高标记效率和亲和力，提高灵敏度和特异性。
[0005]铁蛋白是一种广泛存在于生物体的储铁蛋白。铁蛋白可自组装，具有中空的、24个亚基组装的笼状纳米结构，外直径12nm，内腔直径8nm；每个亚基都有一个4螺旋束(螺旋A
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D)和一个倾斜的第五个短α螺旋(螺旋E)。具有尺寸均一，热稳定，易制备等优点。铁蛋白多基因与功能性分子融合，可以将特定功能的生物分子展示在铁蛋白的外表面和空腔。在自然界中，铁蛋白的主要功能是负载铁，目前铁蛋白广泛应用于仿生合成、生物医学检测领域，但是有关采用重组铁蛋白通过免疫分析捕获病人血清中的IgG并未有任何报道。

技术实现思路

[0006]为了克服上述现有技术的不足，本专利技术将抗Fc功能片段与铁蛋白融合表达，利用铁蛋白多聚立体展示的特点起到放大增强检测信号的作用。抗体结合蛋白，可以通过结合抗体的Fc段特异性结合，抗 Fc功能肽段构建在铁蛋白平台上，可以定向、稳定展示在蛋白质纳米平台上。
[0007]第一方面，本专利技术提供了抗人IgG Fc自组装蛋白在以下任意一项中的应用，所述应用为
[0008]A)免疫分析；
[0009]B)制备用于免疫分析检测的试剂；
[0010]C)制备用于免疫分析检测的试剂盒；
[0011]D)制备用于免疫分析的检测系统或装置。
[0012]进一步地，所述免疫分析为酶联免疫分析。
[0013]进一步地，所述抗人IgG Fc自组装蛋白作为酶联免疫反应中酶标二抗使用。
[0014]进一步地，所述抗人IgG Fc与所述自组装蛋白融合表达并展示在所述自组装蛋白的表面。
[0015]进一步地，所述自组装蛋白为热激蛋白(Hsp)、病毒样颗粒(vi rus
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like particle)、封装蛋白(encapsulin)、铁蛋白(ferritin)中任一种。
[0016]进一步地，所述自组装蛋白优选铁蛋白，更优选激烈火球菌铁蛋白。
[0017]进一步地，所述融合表达为在铁蛋白4
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5loop之间展示或在铁蛋白N端展示。
[0018]进一步地，所有识别人和鼠IgG Fc的肽段，优选所述抗人IgGFc氨基酸序列为DCAWHLGELVWCT(SEQ ID NO.1)。
[0019]第二方面，本专利技术还提供了含有一种含有抗人IgG Fc自组装蛋白的产品，其特征为以下任一种，
[0020]B1)检测试剂；
[0021]B2)检测试剂盒；
[0022]B2)检测系统；
[0023]B4)检测装置。
[0024]进一步地，所述抗人IgG Fc自组装蛋白为抗人IgG Fc重组铁蛋白。
[0025]本专利技术相对于现有技术，首次将抗Fc功能片段与铁蛋白融合表达，利用铁蛋白多聚立体展示的特点起到放大增强检测信号的作用，通过实验证明本专利技术制备的重组铁蛋白αFc
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pFn的亲和力高于抗体结合蛋白的亲和力，且比羊抗人IgG高一个数量级，同时，灵敏度检测证明αFc
‑
pFn HRP检测极限是100ug/ml，羊抗人IgG HRP的检测极限是100 0g/ml。酶标多聚二抗比羊抗人IgG HRP检测灵敏度提高一个数量级。可见，本专利技术的抗人IgG Fc重组铁蛋白能够解决目前二抗灵敏度低，多依赖于进口的问题，提供基于铁蛋白展示的酶标二抗检测平台及系统。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0027]图1重组铁蛋白示意图。图1A为激烈火球菌铁蛋白二级结构，以及4
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5之间展示抗Fc(AntiFc
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pFn)和N端展示抗Fc(αFc
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pFn) 重组铁蛋白示意图。图1B为AntiFc
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pFn和αFc
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pFn结构模拟，包括亚基和聚体。其中，linker为序列GGGGS。
[0028]图2重组铁蛋白表征。图2A为pFn，AntiFc
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pFn和αFc
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pFn分子排阻色谱。图2B为pFn，AntiFc
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pFn和αFc
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pFn透射电镜表征图。图2C为pFn，AntiFc
‑
pFn和αFc
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pFn动态光散射粒径分布图。
[0029]图3AntiFc
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pFn和αFc
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pFn纯化方法与表达量。图3A为AntiFc
‑ꢀ
pFn纯化工艺。图3B为αFc
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pFn纯化工艺。图3C为AntiFc
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pFn SEC组装稳定性。图3D为αFc
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pFn QFF SEC组装稳定性。
[0030]图4αFc
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pFn表达量优化。图4A优化产量。图4B为优化后蛋白表达量。图4C为αFc
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pFn热处理后通过阴离子纯化蛋白。
[0031]图5二抗标记效率和亲和力。图5A为羊抗人IgG HRP和αFc
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p Fn HRP的标记效率。图5B为羊抗人IgG的亲和力。图5C为αFc
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p Fn的亲和力。图5D为pFn对照。
[0032]图6E本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗人IgG Fc自组装蛋白在以下任意一项中的应用，其特征在于，所述应用为A)免疫分析；B)制备用于免疫分析检测的试剂；C)制备用于免疫分析检测的试剂盒；D)制备用于免疫分析的检测系统或装置。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述免疫分析为酶联免疫分析。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗人IgG Fc自组装蛋白作为酶联免疫反应中酶标二抗使用。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗人IgG Fc与所述自组装蛋白融合表达并展示在所述自组装蛋白的表面。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述自组装蛋白为热激蛋白(Hsp)、病毒样颗粒(virus
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like particle)、封装蛋白(encaps ulin)、...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙国明，尹雨芳，陈向茹，
申请(专利权)人：北京纳么美科技有限公司，
类型：发明
国别省市：