一种三七“熟补”作用机制的分析方法及其应用技术

本发明专利技术属于中医药技术领域，具体涉及一种三七“熟补”作用机制的分析方法及其应用。所述分析方法，包括先筛选出差异化合物；然后寻找交集靶点，建立三七蒸制前后差异化合物

【技术实现步骤摘要】
一种三七“熟补”作用机制的分析方法及其应用


[0001]本专利技术属于中医药
，具体涉及一种三七“熟补”作用机制的分析方法及其应用。

技术介绍

[0002]三七含有丰富的皂苷类成分，经炮制加工后可发生水解反应和美拉德反应向稀有皂苷的转化，具有抗贫血，抗氧化、抗炎、抗肿瘤和增强免疫功能等多种生物活性。然而，2020年版《中国药典》尚未收载熟三七，同时缺乏熟三七和生三七的功效及所针对病证差异的研究，相对于生三七，熟三七饮片的流通和临床使用也较少。因此探究三七蒸制的物质基础研究、活性成分研究及其增效机制研究，可为熟三七的临床应用提供依据。
[0003]网络药理学融合多门学科，通过数据挖掘对药物进行系统分析，筛选中药有效成分及对应靶点，构建“药物
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成分
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疾病
‑
靶点”网络，从整体角度出发揭示中药与疾病之间的关联性，为深入研究其药效物质基础及分子作用机制提供参考，但目前尚缺乏适用于三七炮制前后的确切方法来获得目标差异成分及靶点、信号通路等的深入研究。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种三七“熟补”作用机制的分析方法及其应用，为怕之后活性成分研究及其增效机制研究提供了方法，为熟三七的临床应用提供依据。
[0005]为了实现本专利技术目的，采用的技术方案如下：
[0006]一种三七“熟补”作用机制的分析方法，包括如下步骤：
[0007](1)分析和鉴定生三七和熟三七的化学成分，并筛选出差异化合物；
[0008](2)挖掘差异化合物作用靶点集和抗贫血相关疾病靶点集，并寻找交集靶点；
[0009](3)建立三七蒸制前后差异化合物
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作用靶点
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疾病网络；构建蛋白质
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蛋白质相互作用网络，筛选关键蛋白；再对交集靶点分别进行GO功能和KEGG通路富集分析；
[0010](4)将关键蛋白与含量有所增加的差异化合物进行分子对接验证，得到三七“熟补”增效的具体活性成分及作用机制。
[0011]优选地，步骤(1)中所述分析的方法采用UPLC
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Q
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TOF
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MS技术分析，其中色谱条件包括：柱温35
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45℃，流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序为0.0
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5.0min：0％
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20％B，80
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100％A；5.0
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20.0min：20％
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35％B，65
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80％A；20.0
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20.5min：35％
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50％B，50
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65％A；20.5
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28.0min：50％
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55％B，45
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50％A；28.0
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30.0min：55％
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95％B，5
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45％A；30.0
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32.0min：95％B，5％A；32.0
‑
32.1min：95％
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5％B，5
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95％A；32.1
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35.0min：5％
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0％，95
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100％A，流速0.3mL
·
min
‑1。
[0012]优选地，步骤(1)中所述鉴定为通过在中国知网，ChemSpider，Web of Science，SciFinder，中药系统药理学数据库与分析平台收集三七所含的化学成分信息，所述信息包括中英文名称，CAS号，分子式及化学结构；然后用PeakView1.2.0.3软件，选择XIC Manager
导入生三七及熟三七的化学成分数据，进行成分鉴定。
[0013]优选地，步骤(1)中所述筛选的方式为将生三七、蒸三七的MS数据导入软件MarkerView中，设置参数，去除同位素离子峰，归一化处理后导出数据。将数据导入软件SIMCA中进行有监督模式的正交偏最小二乘判别分析，根据OPLS
‑
DA模型得出的VIP值>1与t检验中P<0.01取交集，对照所解成分共得出18个差异性成分。
[0014]优选地，步骤(2)中差异化合物作用靶点集的挖掘方法为采用中药系统药理学数据库与分析平台，中医药百科全书数据库，中药分子机制的生物信息学分析工具，SwissTargetPrediction和TargetNet数据库查找各个差异化合物相对应的靶点蛋白，通过UniProt数据库将靶点蛋白统一为人类基因名称，整合后去除重复值得到317个差异化合物的潜在作用靶点。
[0015]优选地，步骤(2)中疾病靶点集的挖掘方法为以“anemia or anaemia”为关键词，在OMIM和GeneCards数据库中进行疾病靶点的挖掘，合并2个数据库中靶点，删除重复值后因得到856个疾病靶点。
[0016]优选地，步骤(2)中所述交集靶点的寻找方式为将差异化合物作用靶点集和疾病靶点集导入Bioinformatics&Evolutionary Genomics进行韦恩分析得到36个交集靶点。
[0017]优选地，步骤(3)中差异化合物
‑
作用靶点
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疾病网络的建立是通过Cytoscape软件进行的；所述蛋白质
‑
蛋白质相互作用网络的构建方式包括将交集靶点导入STRING软件，选择物种为“Homo sapiens”，设定最低相互作用阈值为高等置信度0.7，最终得到互作关系，将结果导出为TSV格式文件，再导入Cytoscape软件进行可视化处理，删除无关联节点，构建蛋白质
‑
蛋白质相互作用网络。
[0018]优选地，步骤(3)中所述关键蛋白的筛选方式为采用NetworkAnalyzer插件计算网络拓扑参数，通过对网络进行拓扑分析，以度值>2倍平均度值为标准筛选，得到4个关键蛋白。
[0019]优选地，步骤(3)中所述GO功能和KEGG通路富集分析的软件为DAVID数据库，并通过微生信数据库对富集分析结果进行可视化处理。
[0020]优选地，步骤(4)中分子对接的步骤包括关键蛋白的结构处理，含量有所增加的差异化合物的结构处理和分子对接分析。
[0021]优选地，所述关键蛋白的结构处理方式包括先从PDB数据库中搜索关键蛋白的3D结构，选择最佳晶体蛋白结构，并下载pdb格式文件，然后导入PyMOL软件进行预处理，再导入AutoDock Tools软件进行加氢处理，转换成pdbqt格式；含量有所增加的差异化合物的结构处理方式包括将化合物2D结构的sdf文件进行能量最小化处理，导入Chem3D软件将其转换成mol2格式，再用Au本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三七“熟补”作用机制的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分析和鉴定生三七和熟三七的化学成分，并筛选出差异化合物；(2)挖掘差异化合物作用靶点集和抗贫血相关疾病靶点集，并寻找交集靶点；(3)建立三七蒸制前后差异化合物
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作用靶点
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疾病网络；构建蛋白质
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蛋白质相互作用网络，筛选关键蛋白；再对交集靶点分别进行GO功能和KEGG通路富集分析；(4)将关键蛋白与含量有所增加的差异化合物进行分子对接验证，得到三七“熟补”增效的具体活性成分及作用机制。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤(1)中所述分析的方法采用液质联用色谱分析，其中色谱条件包括：柱温35
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45℃，流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序为0.0
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5.0min：0％
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20％B，80
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100％A；5.0
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20.0min：20％
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35％B，65
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80％A；20.0
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20.5min：35％
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50％B，50
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32.0min：95％B，5％A；32.0
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35.0min：5％
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0％，95
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100％A，流速0.3mL
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‑1。3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤(1)中所述鉴定为通过在中国知网，ChemSpider，Web of Science，SciFinder和中药系统药理学数据库与分析平台收集三七所含的化学成分信息，所述信息包括中英文名称，CAS号，分子式及化学结构；然后用PeakView1.2.0.3软件，选择XIC Manager导入生三七及熟三七的化学成分信息数据，进行成分鉴定；步骤(1)中所述筛选的方式为将生三七、蒸三七的MS数据导入软件MarkerView中，归一化处理后导出数据；再将数据导入软件SIMCA中进行有监督模式的正交偏最小二乘判别分析，根据OPLS
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DA模型得出的VIP值>1与t检验中P&am...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，杨明，钟凌云，管咏梅，欧阳辉，高亚珍，雷星，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：