一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法，包括以下步骤：大肠杆菌菌液和金黄色葡萄球菌菌液的制备；选择性成熟期的小鼠；向所述小鼠的腹腔注射麻醉剂，并用酒精棉球擦拭小鼠乳腺及乳腺周围的皮肤；利用手术镊将所述小鼠的第四对乳头夹起，并利用手术剪将乳尖剪去，剪除的部位长1mm；利用平头微量注射器吸取菌液20μL，将所述平头微量注射器延伸至所述第四对乳头的乳导管中，延伸深度为4

【技术实现步骤摘要】
一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法


[0001]本专利技术涉及属于生物
，具体是一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法。

技术介绍

[0002]乳腺炎被认为是世界上最常见的乳腺疾病之一，是乳腺组织的炎症，包括发红、肿胀、发热、乳房疼痛和腺体组织损伤；并且对人类和哺乳动物尤其是奶牛构成了严重威胁。对于更严重的乳腺炎，会导致腺泡分泌受损，使感染部位的泌乳功能丧失。乳腺炎也是奶农经济损失的主要来源。乳腺炎典型的临床症状是会受到不同程度的感染和炎症变化。它可由多种病原体引起，一般来说，主要发生在细菌感染中，最常见的病原体是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。大肠杆菌通过细菌细胞壁上的脂多糖(LPS)在乳腺中引发强烈的免疫反应，从而引起乳腺炎。金黄色葡萄球菌能反复感染乳腺组织，诱导乳腺炎症反应、细胞凋亡，并且释放的外毒素可引起全身症状，导致奶牛死亡。因此，寻找治疗乳腺炎的安全疗法迫在眉睫，在寻找治疗药物之前，科研工作者需要构建乳腺炎模型来进行实验，但是建立乳腺炎模型的过程中，容易导致小鼠死亡，影响模型构建进程，成模率低。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法，有效提高乳腺炎模型的成功构建概率，使得成模率搞到95％。
[0004]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法，包括以下步骤：
[0005]S1、实验菌液的制备
[0006]所述菌液包括大肠杆菌菌液和金黄色葡萄球菌菌液；
[0007]将大肠杆菌母液稀释，得到大肠杆菌菌液，所述大肠杆菌菌液的浓度为0.2mg/ml；
[0008]将金黄色葡萄球菌菌株进行摇床培养，当金黄色葡萄球菌扩增至对数期，其后重悬至2
×
108CFU/mL，得到金黄色葡萄球菌菌液；
[0009]S2、选择小鼠
[0010]选择性成熟期8
‑
10周的小鼠，所述小鼠中母鼠：公鼠的比例为2:1，在同一笼中进行饲养，妊娠期21天，哺乳期21天，纯系鼠不容易交配上，如果购买的老鼠长时间无法配种、怀孕，则需要在实验室进行实验小鼠的繁育；
[0011]S3、实验小鼠的处理
[0012]麻醉小鼠：
[0013]向所述小鼠的腹腔注射麻醉剂，待所述小鼠完全麻醉后，正面朝上仰卧保定小鼠，进行脱毛，将小鼠乳头暴露，并用酒精棉球擦拭小鼠乳腺及乳腺周围的皮肤，充分消毒，保持乳腺及乳腺周围皮肤的清洁干净；
[0014]乳腺处理：左手利用平头手术镊将所述小鼠的第四对乳头夹起，右手并利用手术剪将乳尖剪去，将乳头截面暴露出，便于后期注射菌液，剪除的部位长1mm；
[0015]注射菌液：
[0016]利用平头微量注射器吸取0.2mg/mL的LPS 50μL或2
×
108CFU/mL的金黄色葡萄球菌液20μL，将所述平头微量注射器延伸至所述第四对乳头的乳导管中，延伸深度为4
‑
5mm，所述平头微量注射器垂直进入所述乳导管中，缓慢将所述平头微量注射器中的菌液注入乳腺中，完成刺激，然后缓慢旋转所述平头微量注射器离开乳导管，可用手轻轻乳头及乳腺周围皮肤，使得菌液更好被吸收，小鼠第四对乳头的左右两只乳头均做相同处理，然后将小母鼠放置在鼠笼内，等待麻醉苏醒；
[0017]S4、一段时间后，对所述小鼠进行眼球采血后处死，制备病理切片。
[0018]进一步的，步骤S2中所述小鼠均在哺乳期第七天，所述小鼠与仔鼠至少隔离1h，停止哺乳并禁食。
[0019]进一步的，所述小鼠为BALB/c小鼠、昆明小鼠、C57小鼠任意几种。
[0020]进一步的，步骤S3中所述麻醉剂为10％的水合氯醛，所述水合氯醛的注射量为0.1mL，此计量针对体重为50g小鼠而言。
[0021]进一步的，步骤S4中，所述病理切片的制备方法为：
[0022]沿所述小鼠下腹的腹中线切开皮肤(不能切开腹膜)，向两侧拨开分离，将第四对乳腺暴露出，将所述第四对乳腺剥离下来，一侧的乳腺放入4％的多聚甲醛溶液中，制作病理切片，剩余乳腺组织放入4℃冰箱短期保存或﹣80℃冰箱冻存，用于后期实验。
[0023]进一步的，实验菌液的具体制备步骤如下：
[0024]将1mg/mL的大肠杆菌055：B5母液通过PBS溶液进行稀释，稀释至0.2mg/mL浓度，即为大肠杆菌(LPS)菌液；
[0025]将所述金黄色葡萄球菌ATCC 35556菌株接种至肉汤培养基中，在37℃、pH为7.4的摇床环境下进行扩增培养，当所述金黄色葡萄球菌扩增至对数期后，使用高压灭菌后的PBS溶液进行重悬，重悬至所述金黄色葡萄球菌的浓度为2
×
108CFU/mL，其后置于4℃下进行保存，即为金黄色葡萄球菌菌液，保证模型的建立。
[0026]本专利技术的有益效果是：本专利技术利用微量平头注射器将LPS或金黄色葡萄球菌悬液等细菌经乳导管灌注到经过处理的实验小鼠乳腺组织中，量平头注射器垂直注射，可使细菌完全进入到乳腺组织中，经肉眼观看病理变化、病理组织学变化和MPO活性的结果显示，利用实验小鼠建立的乳腺炎模型不仅成功被构建，且成模率高达95％；本方法可广泛应用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌诱发的乳腺炎预防及治疗、相关药物的筛选、研发等研究，为探究人与奶牛的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌乳腺炎的防治、血乳屏障损伤机制的研究提供很好的实验动物模型。
附图说明
[0027]图1为建模前健康小鼠乳头；
[0028]图2为去掉尖端的小鼠乳头；
[0029]图3为建模后的小鼠；
[0030]图4为建模后小鼠乳腺组织；
[0031]图5为小鼠乳腺组织建模后形态学变化图；
[0032]图6为小鼠乳腺组织建模后病理学变化图；
[0033]图7为小鼠乳腺组织建模后MPO变化图。
具体实施方式
[0034]下面结合附图进一步详细描述本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不局限于以下所述。
[0035]实施例
[0036]一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法，包括以下步骤：
[0037]S1、实验菌液的制备
[0038]所述菌液包括大肠杆菌菌液和金黄色葡萄球菌菌液；
[0039]将1mg/mL的大肠杆菌055：B5母液通过PBS溶液进行稀释，稀释至0.2mg/mL浓度，即为大肠杆菌(LPS)菌液；
[0040]将所述金黄色葡萄球菌ATCC 35556菌株接种至肉汤培养基中，在37℃、pH为7.4的摇床环境下进行扩增培养，当所述金黄色葡萄球菌扩增至对数期后，使用高压灭菌后的PBS溶液进行重悬，重悬至所述金黄色葡萄球菌的浓度为2
×
108CFU/mL，其后置于4℃下进行保存，即为金黄色葡萄球菌菌液；
[0041]S2、选择小鼠
[0042]选择性成熟期8
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10周的小鼠，所述小鼠中母鼠：公鼠的比例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、实验菌液的制备所述菌液包括大肠杆菌菌液和金黄色葡萄球菌菌液；将大肠杆菌母液稀释，得到大肠杆菌菌液，所述大肠杆菌菌液的浓度为0.2mg/ml；将金黄色葡萄球菌菌株进行摇床培养，当金黄色葡萄球菌扩增至对数期，其后重悬至2
×
108CFU/mL，得到金黄色葡萄球菌菌液；S2、选择小鼠选择性成熟期8
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10周的小鼠，所述小鼠中母鼠：公鼠的比例为2:1；S3、实验小鼠的处理麻醉小鼠：向所述小鼠的腹腔注射麻醉剂，待所述小鼠完全麻醉后，正面朝上仰卧保定小鼠，进行脱毛，将小鼠乳头暴露，并用酒精棉球擦拭小鼠乳腺及乳腺周围的皮肤，充分消毒，保持乳腺及乳腺周围皮肤的清洁干净；乳腺处理：利用手术镊将所述小鼠的第四对乳头夹起，并利用手术剪将乳尖剪去，剪除的部位长1mm；注射菌液：利用平头微量注射器吸取0.2mg/mL的LPS 50μL或2
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108CFU/mL的金黄色葡萄球菌液20μL，将所述平头微量注射器延伸至所述第四对乳头的乳导管中，延伸深度为4
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5mm，所述平头微量注射器垂直进入所述乳导管中，缓慢将所述平头微量注射器中的菌液注入乳腺中，然后缓慢旋转所述平头微量注射器离开乳导管；S4、一段时间后，对所述小鼠进行眼球采血后处死，制备病理切片。2.根据权利要求1所述的一种建立实验小鼠...

【专利技术属性】
技术研发人员：关晴，李春义，
申请(专利权)人：长春科技学院，
类型：发明
国别省市：