一种液相色谱-电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法技术

本发明专利技术公开了一种液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法


[0001]本专利技术涉及检测
，尤其涉及一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法。

技术介绍

[0002]中药材三七为五加科植物三七的干燥根。具有化瘀止血，活血定痛的功效。三七属于市场消费频次较高，消费总量较大的一种中草药。
[0003]中药材三七在存储过程中有被黄曲霉毒素B1污染的风险，而黄曲霉毒素B1是一种剧毒的致肝癌物质，对人体有较大伤害。
[0004]所以对于的检测有很高的技术要求。而所有检测结果都会产生不确定度，不确定度是检测实验室对检测结果进行合格性评判的一项重要参数。对中药材三七中黄曲霉毒素B1检测结果进行不确定度的测定是检测实验室需要进行的一项重要工作。
[0005]现有的不确定度的测定方法需要通过实验人员根据CNAS
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GL006
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2019《不确定度化学分析中不确定度的评估指南》及所操作的实验步骤进行数学建模及推导，没有固定的方案，缺少标准化流程，并且没有具体的算法。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法，是一种用于中药材检测结果不确定度的测定方法，可以快速计算出中药材三七中黄曲霉毒素B1检测过程中的不确定度，本专利技术的具体内容如下：
[0007]本专利技术的目的在于提供一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法，其技术点在于，包括以下步骤：
[0008]步骤一，构建标准曲线：通过液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定黄曲霉素B1标准溶液，以其浓度为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，得到黄曲霉素B1标准曲线性回归方程；
[0009]步骤二，样品的处理：称取5g三七于50mL离心管中，加入70％甲醇水溶液涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min，在6000r/min下离心10min后取4mL上清液加入23mL 1％TritonX
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100的PBS，混匀；将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，再将免疫亲和柱内的液体弃去后，将上述样液移至50mL注射器筒中，调节下滴速度，控制样液以1mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后，往注射器筒内加入2
×
10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱，待水滴完后，用真空泵抽干亲和柱，脱离真空系统，在免疫亲和柱下部放置10mL刻度试管，取下50mL的注射器筒，2mL甲醇洗脱免疫亲和柱，控制1.0mL/min的速度下滴，再用真空泵抽干免疫亲和柱，收集全部洗脱液至试管中，在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中；
[0010]步骤三，样品中黄曲霉素B1的测定：采用与步骤一相同的方法测定步骤二中过滤后的样液中黄曲霉素B1的含量，将所述样品重复测定6次；
[0011]步骤四，回收率及精密度的测定：取6份不含黄曲霉毒素B1的阴性样品，分别向这6份样品中加入0.0900μg/kg的黄曲霉毒素B1标准物质，依照步骤一的检测方法操作，得到回收率及精密度；
[0012]步骤五，三七中黄曲霉素B1含量不确定度的测定：采用以下公式测试：
[0013]，其中，
[0014]u
rel(p)
为三七样品精密度分量的标准不确定度；
[0015]u
rel(R)
为三七样品回收率分量的标准不确定度；
[0016]为标准曲线分量的标准不确定度；
[0017]为黄曲霉素B1标准品分量的标准不确定度；
[0018]为三七样品体积分量的标准不确定度；
[0019]为三七样品质量分量的标准不确定度；
[0020]u
rel(I)
为仪器分量的标准不确定度。
[0021]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
‑
电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤一中准曲线的构建方法为：
[0022]步骤一，制备0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL的黄曲霉素B1系列标准溶液；
[0023]步骤二，使用液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定上述系列标准溶液的峰面积；
[0024]步骤三，以黄曲霉素B1的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作黄曲霉素B1标准曲线性回归方程。
[0025]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中其中RSD为标准偏差，m为实际测试重复次数。
[0026]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中为回收率的标准偏差，n为回收率实验重复次数，为平均回收率。
[0027]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
‑
电化学衍生荧光检测器测定三七中
黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中其中R为标准曲线各浓度点残差平方之和，n为标准曲线点数，P为同一个溶液重复读数次数，B为标准曲线斜率，P为同一个溶液重复读数次数，n为曲线点数，C
x
为曲线各浓度点中间点浓度，C为曲线各浓度点平均浓度，Ci为曲线各浓度的浓度。
[0028]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中u
std
＝a/k，k＝2，a为标准物质证书上登记的该标准物质浓度的不确定度。
[0029]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中量器的标准不确定度V
a
为量器的体积偏差，体积膨胀引起的标准不确定度T为温度变化范围，a为液体的体积膨胀系数，Vi为试样定容体积。
[0030]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中公式中u
balance
为天平的检定证书上所标准的不确定度，Ws为样品质量。
[0031]在本专利技术的有的实施例中，上述的液相色谱
‑
电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法的步骤五的公式中u
仪器
为液相色谱
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电化学衍生荧光检测器的检定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，构建标准曲线：通过液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定黄曲霉素B1标准溶液，以其浓度为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，得到黄曲霉素B1标准曲线性回归方程；步骤二，样品的处理：称取5g三七于50mL离心管中，加入70％甲醇水溶液涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min，在6000r/min下离心10min后取4mL上清液加入23mL 1％TritonX
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100的PBS，混匀；将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，再将免疫亲和柱内的液体弃去后，将上述样液移至50mL注射器筒中，调节下滴速度，控制样液以1mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后，往注射器筒内加入2
×
10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱，待水滴完后，用真空泵抽干亲和柱，脱离真空系统，在免疫亲和柱下部放置10mL刻度试管，取下50mL的注射器筒，2mL甲醇洗脱免疫亲和柱，控制1.0mL/min的速度下滴，再用真空泵抽干免疫亲和柱，收集全部洗脱液至试管中，在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中；步骤三，样品中黄曲霉素B1的测定：采用与步骤一相同的方法测定步骤二中滤中黄曲霉素B1的含量，将所述样品重复测定6次；步骤四，回收率及精密度的测定：取6份不含黄曲霉毒素B1的阴性样品，分别向这6份样品中加入0.0900μg/kg的黄曲霉毒素B1标准物质，依照步骤一的检测方法操作，得到回收率及精密度；步骤五，三七中黄曲霉素B1含量不确定度的测定：采用以下公式测试：步骤五，三七中黄曲霉素B1含量不确定度的测定：采用以下公式测试：其中，u
rel(p)
为三七样品精密度分量的标准不确定度；u
rel(R)
为三七样品回收率分量的标准不确定度；为标准曲线分量的标准不确定度；为黄曲霉素B1标准品分量的标准不确定度；为三七样品体积分量的标准不确定度；为三七样品质量分量的标准不确定度；u
rel(I)
为仪器分量的标准不确定度。2.根据权利要求1所述的一种液相色谱
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电化学衍生荧光检测器测定三七中黄曲霉素B1含量不确定度的方法，其特征在于，所述步骤一中准曲线的构建方法为：步骤一，制备0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5...

【专利技术属性】
技术研发人员：周大卫，赵红，杨红，潘正姿，张冰雪，刘子畅，畅晓荣，黄丙楠，陈斌，
申请(专利权)人：北京捷安特技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：