苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术属于天然药物技术领域，提供了苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用，本发明专利技术利用苦丁茶制备洋刀豆脲酶抑制剂，苦丁茶抑制洋刀豆脲酶活性的半数抑制浓度(IC

【技术实现步骤摘要】
苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用


[0001]本专利技术涉及天然药物
，更具体地，涉及苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]脲酶(Urease，EC 3.5.1.5)又称尿素酶或尿素酰胺水解酶。脲酶中的洋刀豆脲酶是首次被发现含有镍离子的金属酶，在生物化学发展史上具有里程碑意义。脲酶广泛存在于生态系统中，其在自然界氮素的代谢循环过程中有着不可缺少的调节作用。脲酶可催化尿素水解为氨，因此对氮的新陈代谢过程起着重要作用。然而，脲酶活性过高会使尿素的催化水解速度过快，大量地释放出氨气，从而给农业、畜牧业、环境甚至人体健康带来各种危害。在农业方面，脲酶过快地催化水解尿素成氨，会导致氨的挥发以及土壤中的硝酸根离子、铵根离子蓄积过多，从而降低氨的利用率，污染大气，水体，土壤等环境；在畜牧业方面，非蛋白氮在反刍动物瘤胃脲酶的作用下过快分解，产生过量的氨会在反刍动物的血液中蓄积，增加家禽血氨中毒的可能性。此外，禽舍内氨含量过高会诱导反刍动物发生多种疾病，还会污染空气质量。在医药领域，人体内的脲酶会再次分解残存的尿素代谢产物，同时被身体再吸收，从而破坏人体的酸碱平衡，导致局部pH值升高，进而引发泌尿系统和其它器官的各种疾病发生。
[0003]目前公认使用脲酶抑制剂是解决由脲酶引起的经济与环境双重问题最有效途径。目前，脲酶抑制剂的研究主要包括重金属盐、有机小分子和植物提取物三大类。其中，由于重金属的高毒性，其使用受到限制。近年来，脲酶抑制剂在国内外的应用越来越广泛，因此，开发安全、高效、环保的脲酶抑制剂已成为当今研究的热点。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用，苦丁茶能够显著抑制洋刀豆脲酶的活性，苦丁茶抑制洋刀豆脲酶活性的半数抑制浓度(IC
50
)可达5.68
±
0.26mg/mL，且苦丁茶为天然药物，可用于制备安全、高效、环保的脲酶抑制剂。
[0005]本专利技术的第一方面提供苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用。
[0006]具体地，苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用，所述苦丁茶来源于木犀科女贞属粗壮女贞。
[0007]苦丁茶，来源于木犀科女贞属粗壮女贞，是贵州、四川等地区的一种药食同源的药材，其味苦、微甘，性微寒；归肝、胆、胃经；具有清热解毒等功效；传统上常用于目赤、咽喉炎、口腔炎、乳痈和肿毒等症；现代药理学研究表明，苦丁茶具有降血压、降血脂、抗氧化、抑菌和镇痛等多种药理作用。本专利技术首次发现苦丁茶具有抑制洋刀豆脲酶活性的作用，效果显著，且具有原料易得、安全无毒、环保等优点，可用于制备高效的洋刀豆脲酶抑制剂。
[0008]优选地，所述苦丁茶为苦丁茶的水提取物或醇提取物。
[0009]优选地，所述醇的体积分数为60％
‑
80％。
[0010]更优选地，所述醇的体积分数为70％。
[0011]优选地，所述苦丁茶的制备方法为取干燥的苦丁茶，打粉，加入水或醇类溶剂中浸泡，提取，滤过，收集滤液，药渣按同样操作再提取一次，合并两次滤液，浓缩，得浸膏。
[0012]优选地，所述醇类溶剂为乙醇。
[0013]优选地，所述醇类溶剂的用量为苦丁茶质量的5
‑
15倍。
[0014]优选地，所述浸泡的时间为0.5
‑
1小时。
[0015]优选地，所述提取的时间为1
‑
3小时。
[0016]本专利技术的第二方面提供一种洋刀豆脲酶抑制剂。
[0017]本专利技术保护一种洋刀豆脲酶抑制剂，包括上述苦丁茶。
[0018]优选地，还包括药学上可接受的载体和/或辅料。
[0019]本专利技术的第三方面提供一种洋刀豆脲酶抑制剂的应用。
[0020]本专利技术保护上述洋刀豆脲酶抑制剂在制备动物饲料添加剂中的应用。
[0021]优选地，所述动物为反刍动物或单胃动物。
[0022]将洋刀豆脲酶抑制剂作为动物饲料添加剂添加至饲料中，可以减慢尿素在奶牛、肉牛、肉羊以及肉鸡等反刍动物或单胃动物体内的分解速度，提高尿素的利用率，并降低禽舍和畜舍内空气中氨气含量。
[0023]本专利技术保护上述洋刀豆脲酶抑制剂在制备植物肥料中的应用。
[0024]优选地，所述植物肥料为氮肥。
[0025]将洋刀豆脲酶抑制剂添加于氮肥中，提高尿素利用率，增加农作物产量，提高生产性能。
[0026]相对于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
[0027](1)本专利技术利用苦丁茶制备洋刀豆脲酶抑制剂，苦丁茶抑制洋刀豆脲酶活性的半数抑制浓度(IC
50
)可达5.68
±
0.26mg/mL，苦丁茶抑制洋刀豆脲酶活性显著，原料易得、安全无毒，对环境无危害，环保，且丰富了现有洋刀豆脲酶抑制剂的可选种类；
[0028](2)本专利技术利用苦丁茶制备洋刀豆脲酶抑制剂，然后进一步将洋刀豆脲酶抑制剂应用于制备植物肥料、动物饲料添加剂中，有助于减少药物的耐药性，同时，由于苦丁茶本身为天然来源的中药材，具有高效无毒的特点，因此具备良好的应用价值与开发前景。
附图说明
[0029]图1为苦丁茶水提取物和苦丁茶醇提取物对洋刀豆脲酶的抑制活性图；
[0030]图2为苦丁茶对洋刀豆脲酶的抑制类型研究图；
[0031]图3为苦丁茶与洋刀豆脲酶作用的反应进度曲线图。
具体实施方式
[0032]为了让本领域技术人员更加清楚明白本专利技术所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本专利技术要求的保护范围不构成限制作用。
[0033]以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
[0034]1、实验材料
[0035]受试药物
[0036]洋刀豆脲酶(Type III，40.3U/mg)，购自美国西格玛奥德里奇公司；尿素，二硫苏糖醇、半胱氨酸均购自索莱宝；谷胱甘肽购自美仑生物；氟化钠、硼酸均购自麦克林。羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、水杨酸钠、硝普钠、氢氧化钠、次氯酸钠、丙三醇，均购自广州化学试剂厂，均为分析纯。
[0037]2、洋刀豆脲酶的配制
[0038]称取适量洋刀豆脲酶，溶于20mM的HEPES缓冲液(pH值为7.5)中，配制成10U/mL的洋刀豆脲酶溶液，置于4℃冰箱中保存，备用。
[0039]3、尿素的配制
[0040]称取尿素适量，溶解于20mM的HEPES缓冲液(pH值为7.5)中，配制成150mM的尿素溶液，放于4℃冰箱中保存，备用。
[0041]4、Berthelot显色液的配制
[0042]A液：分别称取适量的硝普钠和水杨酸钠粉末，溶解于20mM的HEPES缓冲液(pH值为7.5)中，配制成含9.73mM亚硝基铁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.苦丁茶在制备洋刀豆脲酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述苦丁茶来源于木犀科女贞属粗壮女贞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述苦丁茶为苦丁茶的水提取物或醇提取物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述醇的体积分数为60％
‑
80％。4.一种洋刀豆脲酶抑制剂，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彩兰，鲁强，
申请(专利权)人：遵义医科大学珠海校区，
类型：发明
国别省市：