异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用制造技术

本公开主要涉及了异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)药物中的应用，属于抗病毒应用领域。利用该药物能够在Vero E6细胞上有效抑制PEDV的复制，能够在仔猪体内抑制PEDV的感染，有效保护感染PEDV仔猪、降低仔猪死亡率、减轻仔猪临床病理损伤以及抑制PEDV在仔猪体内的复制，证实了异甘草素在体内外具有抗病毒作用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用


[0001]本公开涉及抗病毒应用领域，具体涉及异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。

技术介绍

[0002]猪腹泻病是当前养猪业最常发生的三大类疾病之一，是仔猪死亡的“第一杀手”，严重影响集约化猪场年断奶仔猪数，给生猪养殖业带来沉重打击。猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性猪肠道传染病，对哺乳仔猪致死率高达80～100％，PEDV已然成为我国哺乳仔猪腹泻的主要病原微生物。自2010年以来，多种PEDV毒株大规模暴发，给养猪业造成巨大经济损失。PEDV是一种有囊膜的单股正链的RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirale)、冠状病毒科(Coronaviridae)和冠状病毒属(Coronavirus)。因其基因组和病毒复制等特性易出现变异，导致由于现有疫苗毒株与流行毒株不匹配而出现的疫苗效果不佳，外加流行毒株疫苗研发或疫苗毒株更新滞后，导致猪流行性腹泻病频繁发生，已经成为临床防控中一个瓶颈问题，基于非疫苗策略的PEDV新型防控技术亟需建立。
[0003]抗病毒药物是该类疾病防控的最后一道防线，是替代和补充疫苗效果不佳最有效的途径之一。近年来，抗PEDV药物的研究快速发展，大量的生物类药物、化学合成药物以及天然药物被报道具有抗PEDV作用，然而由于冠状病毒易变异特性，导致因病毒的药物靶点突变而降低了抗病毒药物效果，限制了抗病毒药物的临床应用。另外，有些抗病毒药物能够有效抑制病毒感染，但具有严重的副作用，因此尚没有一种针对PEDV的抗病毒药物在临床应用，开发一种新型、安全、高效的抗PEDV药物成为了一个亟待解决的问题之一。
[0004]异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)是一种存在于甘草等植物中含有查尔酮结构的黄酮类化合物，具有提取方便、价格低廉、绿色安全等特点。在医学研究中是一种重要的药用活性成分，具有多种药理活性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、心脏保护、神经保护、抑制细菌生长、抗血小板聚合等作用，也被用作食品添加剂和化妆品添加剂。目前，异甘草素作为先导化合物尚未被用于抗冠状病毒药物研究，是否具有抗PEDV活性尚未清楚，本研究通过体内外试验探讨异甘草素作为一种抗PEDV药物的应用前景，开发异甘草素的一种新用途。

技术实现思路

[0005]本公开的目的在于提供异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的作用及一种抗猪流行性腹泻病毒的药物，利用该药物能够在Vero E6细胞上有效抑制PEDV病毒的复制。该药物在仔猪体内具有抗PEDV感染的作用，能够有效保护感染PEDV仔猪、降低仔猪死亡率、减轻仔猪临床病理损伤以及抑制PEDV在仔猪体内的复制。
[0006]为了实现上述目的，一方面，本公开提供了异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。
[0007]根据本公开，其中，所述药物中还包括药学上可接受的载体。
[0008]根据本公开，其中，所述药学上可接受的载体包括卵磷脂和聚乙二醇中的至少一种。
[0009]另一方面，本公开提供了一种抗猪流行性腹泻病毒的药物，其中，所述药物中包括有效量的异甘草素和药学上可接受的载体。
[0010]根据本公开，其中，所述药学上可接受的载体包括卵磷脂和聚乙二醇中的至少一种。
[0011]根据本公开，其中，所述药物的剂型包括混悬剂和口服溶液中的至少一种。
[0012]根据本公开，其中，所述药物中，所述异甘草素的含量为1
‑
50μM。
[0013]通过上述技术方案，本公开提供了异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用及一种抗猪流行性腹泻病毒的药物，利用该药物能够在Vero E6细胞上有效抑制PEDV病毒的复制，能够在仔猪体内抑制PEDV感染、降低仔猪死亡率、减轻临床病理损伤以及抑制PEDV在仔猪体内的复制。
[0014]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0015]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
[0016]图1为MTT法检测异甘草素对Vero E6细胞的毒性。
[0017]图2为Western blot检测异甘草素在Vero E6细胞上抑制PEDV病毒的复制。
[0018]图3为TCID
50
检测异甘草素在Vero E6细胞上抑制PEDV病毒的复制。
[0019]图4为异甘草素对感染PEDV仔猪存活率的影响。
[0020]图5为感染PEDV仔猪口服异甘草素的病理检测结果。
[0021]图6为荧光定量PCR检测异甘草素在仔猪体内抑制PEDV的感染。
具体实施方式
[0022]以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
[0023]一方面，本公开提供了异甘草素在制备抗猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。
[0024]可选地，其中，所述药物中还包括药学上可接受的载体。
[0025]可选地，其中，所述药学上可接受的载体包括卵磷脂和聚乙二醇中的至少一种。
[0026]另一方面，本公开提供一种抗猪流行性腹泻病毒的药物，其中，所述药物中包括有效量的异甘草素和药学上可接受的载体。
[0027]可选地，其中，所述药学上可接受的载体包括卵磷脂和聚乙二醇中的至少一种。
[0028]可选地，其中，所述药物的剂型包括混悬剂和口服溶液中的至少一种。
[0029]可选地，其中，所述药物中，所述异甘草素的含量为1
‑
50μM。
[0030]以下通过实施例进一步详细说明本公开。实施例中所用到的原材料均可通过商购途径获得。
[0031]病毒、细胞、血清及蛋白：PEDV HM2017毒株(GenBank：MK690502)由本实验室保存
于
‑
80℃；PEDV N蛋白单克隆抗体由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供；非洲绿猴肾细胞(Vero E6)由本实验保存于液氮。
[0032]主要试剂：MTT试剂盒、SDS
‑
PAGE凝胶制备试剂盒购自于北京索莱宝科技有限公司；总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、胶体金快速检测试剂盒购自于天根生化科技有限公司；高糖DMEM培养基购自于海克隆生物制品有限公司；1
×
PBS缓冲液、细胞裂解液购自碧云天生物技术有限公司；异甘草素购自于上海鼎瑞化工(生物)有限公司，CAS号：961
‑
29
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5，结构式如下式所示：
[0033][0034]实施例1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.异甘草素在制备抗PEDV的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述药物中还包括药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述药学上可接受的载体包括卵磷脂和聚乙二醇中的至少一种。4.一种抗猪流行性腹泻病毒的药物，其特征在于，所述药物中包括有效量的异甘草素和药学上可接受的载...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东波，邢晓旭，苏明俊，李璐，李梓键，郭东华，朱庆贺，李春秋，王俊，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：