一种蛋白磷脂纳米制剂、应用及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种蛋白磷脂纳米制剂、应用及其制备方法。其中，所述蛋白磷脂纳米制剂为基于ApoA1蛋白和磷脂相结合的蛋白磷脂复合物；所述ApoA1蛋白为不含有如SEQ ID No.1所示的保守序列或所述保守序列的同源序列的ApoA1蛋白。本发明专利技术所提供的蛋白磷脂复合物可作为抗CNS疾病的药物，又可作为脑部靶向递送体系，成为一套针对中枢神经系统CNS疾病预防和治疗的脑部药物递送系统解决方案。脑部药物递送系统解决方案。脑部药物递送系统解决方案。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白磷脂纳米制剂、应用及其制备方法


[0001]本专利技术属于基因检测
，尤其涉及一种蛋白磷脂纳米制剂、应用及其制备方法。

技术介绍

[0002]中枢神经系统(CNS)疾病严重影响着人类健康，例如，神经退行性疾病(如阿兹海默病、帕金森疾病)、脑膜炎、脑部肿瘤(如胶质母神经瘤、中枢神经淋巴瘤等)。
[0003]阿尔茨海默病(AD)是一种最常见的神经退行性疾病，大约10
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12％的65岁及以上人口被AD影响着。2021年召开的AAIC国际会议发布多项报告数据(World Alzheimer Report 2021)，预计到2050年痴呆患者总数将达1.52亿人，其中约60
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70％为阿尔茨海默病患者。我国目前有1000万阿尔茨海默病患者，数量已居全球之首，预计到2050年还可能爆发至4000万人。随着中国人口老龄化，阿尔茨海默病以及其他形式的痴呆症和主要神经认知障碍正在急剧增加。并且目前中国65岁以上的帕金森疾病(PD)患病率大约为1.7％。
[0004]血脑屏障(BBB)严重限制了中枢神经系统(CNS)疾病(例如，神经退行性疾病、脑瘤、脑部感染和中风)的治疗，因为它阻止了98％的小分子药物和大分子(例如，肽、基因药物和蛋白质药物)进入大脑。
[0005]因此针对目前中枢神经系统(CNS)疾病的瓶颈，亟需开发一种能高效通过血脑屏障、且兼具高脑靶向性、安全无毒、有效防治早期神经退行性疾病等功能的蛋白体系。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一种蛋白磷脂纳米制剂，为基于ApoA1蛋白和磷脂相结合的蛋白磷脂复合物；
[0007]其中，所述ApoA1蛋白为不含有如SEQ ID No.1所示的保守序列或所述保守序列的同源序列的ApoA1蛋白。
[0008]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列包括：
[0009]如SEQ ID No.2所示的第1氨基酸序列和如SEQ ID No.3所示的第2氨基酸序列中的一种或两种组合。
[0010]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列还包括：
[0011]如SEQ ID No.3所示的第3氨基酸序列。
[0012]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列的排列顺序为所述第1氨基酸序列、所述第2氨基酸序列和所述第3氨基酸序列依次排列。
[0013]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂的每个纳米颗粒的直径为5
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130nm。
[0014]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂的每个纳米颗粒的内部嵌入的磷脂数量为100
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1000个。
[0015]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂在制备用于预防和/或治疗早期神经退行性疾病的产品中的应用。
[0016]优选地，所述蛋白磷脂纳米制剂在制备针对中枢神经系统CNS疾病的治疗和/或预防的产品中的应用。
[0017]此外，为解决上述问题，本申请还提供一种脑部药物递送系统，包括如上述所述蛋白磷脂纳米制剂。
[0018]此外，为解决上述问题，本申请还提供一种如上述所述蛋白磷脂纳米制剂的制备方法，包括：
[0019]取ApoA1蛋白质，经诱导表达后，获得粗蛋白样本；
[0020]纯化所述粗蛋白样本，得到纯化蛋白；
[0021]将所述纯化蛋白与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱进行组装，得到所述蛋白磷脂纳米制剂。
[0022]本专利技术提供一种蛋白磷脂纳米制剂、应用及其制备方法。其中，所述蛋白磷脂纳米制剂，是一种运用基因工程设计的基于ApoA1蛋白和磷脂相结合的蛋白磷脂复合物，该蛋白磷脂纳米制剂具有如下有益效果：
[0023]1、蛋白磷脂纳米制剂一方面能够有效穿越血脑屏障，另一方面其自身能够明显表现出对早期神经退行性疾病(包括AD疾病)显著治疗效果。
[0024]2、蛋白磷脂纳米制剂中的磷脂属天然磷脂，且ApoA1蛋白又具有良好的生物兼容性，从而能够使蛋白磷脂纳米制剂在体内达到更好的稳定性；
[0025]3、该蛋白磷脂纳米制剂自身可负载相应小分子，可作为药物载体应用。
[0026]综上，该蛋白磷脂纳米制剂可作为抗CNS疾病的药物，又可作为脑部靶向递送体系，成为一套针对中枢神经系统CNS疾病预防和治疗的脑部药物递送系统解决方案。
附图说明
[0027]图1为含有保守序列的ApoA1蛋白的带状结构图；
[0028]图2为ApoA1蛋白纯化后的SDS
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PAGE图；
[0029]图3a为ApoA1
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ND的尺寸排阻(SEC)图；
[0030]图3(b
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1)为大尺寸颗粒(125nm)的ApoA1
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ND的透射电子显微镜(TEM)图；
[0031]图3(b
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2)为中尺寸颗粒(38nm)的ApoA1
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ND的透射电子显微镜(TEM)图；
[0032]图3(b
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3)为小尺寸颗粒(4.6nm)的ApoA1
‑
ND的透射电子显微镜(TEM)图；
[0033]图3(c
‑
1)为原子力显微镜纳米颗粒形貌图；
[0034]图3(c
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2)为原子力显微镜纳米颗粒高度图；
[0035]图4为Bodipy标记的ApoA1
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ND静脉给药后的脑分布图；
[0036]图5为ApoA1
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ND经静脉注射后在Aβ聚集体周围积累图；
[0037]图6ApoA1
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ND减少Aβ沉积的大脑组织切片图；
[0038]图6(a)为ApoA1
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ND减少了APP/PS1小鼠大脑皮质和海马体中的淀粉样蛋白沉积；
[0039]图6(b)为APP/PS1小鼠大脑皮质中的淀粉样蛋白沉积定量分析统计图；
[0040]图6(c)为APP/PS1小鼠海马体中的淀粉样蛋白沉积定量分析统计图；
[0041]图7ApoA1
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ND减少小胶质细胞增生的大脑组织切片图；
[0042]图7(a)为ApoA1
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ND减少了APP/PS1小鼠大脑皮质和海马体中的减弱的小胶质细胞增生；
[0043]图7(b)为ApoA1
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ND减少了APP/PS1小鼠大脑皮质中的小胶质细胞增生的定量分析统计图；
[0044]图7(c)为ApoA1
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ND减少了APP/PS1小鼠海马体中的小胶质细胞增生的定量分析统计图；
[0045]图8组织切片的尼氏染色结果图；
[0046]图9(a)为阿尔兹海默症模型小鼠的行为轨迹分析(莫尔斯水迷宫实验)治疗、病理监测和治疗评估的时间表；
[0047]图9(b)为不同时间点的逃避潜伏时间图；
[0048本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白磷脂纳米制剂，其特征在于，为基于ApoA1蛋白和磷脂相结合的蛋白磷脂复合物；其中，所述ApoA1蛋白为不含有如SEQ ID No.1所示的保守序列或所述保守序列的同源序列的ApoA1蛋白。2.如权利要求1所述蛋白磷脂纳米制剂，其特征在于，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列包括：如SEQ ID No.2所示的第1氨基酸序列和如SEQ ID No.3所示的第2氨基酸序列中的一种或两种组合。3.如权利要求2所述蛋白磷脂纳米制剂，其特征在于，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列还包括：如SEQ ID No.3所示的第3氨基酸序列。4.如权利要求3所述蛋白磷脂纳米制剂，其特征在于，所述蛋白磷脂纳米制剂的氨基酸序列的排列顺序为所述第1氨基酸序列、所述第2氨基酸序列和所述第3氨基酸序列依次排列。5.如权利要求1所述蛋白磷脂纳米制剂，其特征在于，所述蛋白磷脂纳米制剂的每个纳米颗粒的直径为5
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130...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚震辉，沈鑫，葛岩，蔡钟琪，董保锐，岳正东，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：