一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1（CHI3L1）的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，属于试剂盒技术领域。本发明专利技术公开了一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：浓度为0.2

【技术实现步骤摘要】
一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒


[0001]本专利技术属于试剂盒
，涉及一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒。

技术介绍

[0002]壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase 3
‑
like protein 1，CHI3L1)是最早在人成骨细胞中发现的相对分子质量为40000的糖蛋白，在炎症、纤维化、肿瘤等许多病理情况下表达增加，参与炎症期间组织重塑、介导巨噬细胞浸润、分化和成熟以及血管生成等过程。CHI3L1具有几丁质结合能力但缺乏几丁质酶活性，有研究显示CHI3L1分子C端富含KR(残基334
‑
345)的结构域是负责肝素结合和CHI3L1生物学功能的功能域，并且该结构域对于CHI3L1的促血管生成特性是必需的，CHI3L1可激活TGF
‑
β1、MAPK、ERK、PI3K/AKT等信号通路发挥作用，但其作用机制仍未完全明确。大量研究证实CHI3L1在各类炎症性疾病、纤维化疾病中表达增加，慢性肝脏疾病中酒精性肝病、非酒精性肝病、慢性肝纤维化、肝硬化均发现CHI3L1水平较正常人群高。2019年版《慢性乙型肝炎防治指南》指出，CHI3L1可预测ALT正常或轻度升高患者的中、重度肝脏纤维化，提示外周血CHI3L1水平与肝纤维化密切相关。但是目前检测CHI3L1的试剂盒存在稳定性差、制备过程繁琐等问题。
[0003]中国专利申请文件(公开号：CN112782156A)公开了一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒及其制备方法，包括固相试剂、发光试剂、校准品及质控品，该专利技术采用CHI3L1抗体与带有羧基官能团的磁性微粒直接包被，羧基官能团的磁性微粒标记抗体需要经过EDC/sulfo
‑
NHS两步法进行活化，成本较高，标记过程繁琐，活化剂的使用方法对标记效率影响较大，且标记量对标记效果影响也较大，导致批间差异明显，不易转化生产；试剂盒的热加速稳定性试验中RLU降低了6％。因此，为了使试剂保持稳定，需要加入稳定剂，目前多采用常规组成的稳定剂。如中国专利申请文件(公开号：CN102115737A)公开了一种应用于碱性磷酸酶或其标记物的稳定剂，该稳定剂包括蛋白、激活剂、锌离子、钠离子、缓冲剂、防腐剂，其中激活剂含有镁离子和/或钙离子，采用该稳定剂能提高碱性磷酸酶对温度的稳定性，加速反应后两周后酶损失率在7％，但是组分较为复杂。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术存在的上述问题，提出了一种高稳定性的磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒。
[0005]本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：
[0006]一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
[0007]浓度为0.2
‑
1.0mg/mL鼠抗人CHI3L1抗体包被的磁性微粒；
[0008]和浓度为0.2
‑
2ug/ml碱性磷酸酶标记的鼠抗人CHI3L1抗体，其所用的稀释液包括
1
‑
5％的酶稳定剂，酶稳定剂包括DL
‑
β
‑
(3
‑
吲哚基)
‑
α
‑
氨基丙酸(DL
‑
色氨酸)；
[0009]以及校准品。
[0010]作为优选，所述酶稳定剂还包括1
‑
5％海藻糖、5
‑
10％甘油、0.5
‑
5％BSA中的一种或多种。
[0011]常规的酶稳定剂为海藻糖、甘露醇、多糖等，而本专利技术选择了L
‑
β
‑
(3
‑
吲哚基)
‑
α
‑
氨基丙酸(DL
‑
色氨酸)作为酶稳定剂的重要组分，由于其具有丰富的氨基和羟基，可有效阻止该体系中的非特异性物质对复合物的破坏，有效提高试剂的热稳定性和效期稳定性，还可以提高试剂重复性，延长定标周期。
[0012]进一步优选，所述酶稳定剂为质量比为1：1的DL
‑
β
‑
(3
‑
吲哚基)
‑
α
‑
氨基丙酸(DL
‑
色氨酸)、BSA。
[0013]DL
‑
色氨酸可有效阻止碱性磷酸酶和抗体之间的连接键断裂导致信号值降低，从而提高试剂的稳定性，BSA阻止标记抗体的吸附从而提高稳定性，两者结合能够实现更好的稳定性。
[0014]作为优选，所述稀释液包括10
‑
50mM缓冲体系、1
‑
5％酶稳定剂、0.1
‑
0.5％表面活性剂、0.1
‑
1mM金属离子、50ug/ml阻断剂、0.1
‑
0.5％防腐剂。
[0015]作为优选，所述阻断剂包括RF和HAMA结合蛋白、鼠IgG、鼠IgM中的一种或多种。
[0016]进一步优选，所述阻断剂浓度为50ug/ml的MAK33。
[0017]作为优选，所述缓冲体系包括HEPES、Tris
‑
HCl、PB、PBS缓冲液中的一种或多种，pH 6.5
‑
7.4。
[0018]作为优选，所述表面活性剂包括0.1
‑
0.5％吐温20，0.1
‑
0.5％曲拉通X
‑
100，0.1
‑
0.5％Brij35中的一种或多种。
[0019]作为优选，所述金属离子包括氯化钠，氯化锌，氯化钙，氯化镁中的一种或多种。
[0020]作为优选，所述防腐剂包括0.1
‑
0.5％Proclin300。
[0021]作为优选，所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人CHI3L1抗体的制备方法按照常规方法进行，如中国专利申请文本(公开号：CN112730839A)所述，可以包括：将活化后的鼠抗人CHI3L1抗体与活化后的碱性磷酸酶混合，再加入氯化镁溶液反应、纯化后备用。
[0022]作为优选，所述鼠抗人CHI3L1抗体包被的磁性微粒的制备方法包括：采用二硫苏糖醇(DTT)还原浓缩后的鼠抗人CHI3L1抗体，再与采用含有硫酸铵的硼酸盐缓冲液稀释后的磁性颗粒混悬反应、磁分离，封闭液混悬、稀释后获得。
[0023]本专利技术将抗体FC端还原后的巯基与磁性颗粒相连，可使抗体Fab端的特异性结合区域充分暴露在外，从而提高抗原和抗体的结合效率。
[0024]进一步优选，所述磁性颗粒、鼠抗人CHI3L1抗体的质量比为10：(0.1
‑
0.2)。进一步优选，所述磁性微粒为甲苯磺酰基磁珠，且粒径为0.2
‑
2μm。
[0025]甲苯磺酰基磁珠表面覆有亲水性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：浓度为0.2
‑
1.0mg/mL鼠抗人CHI3L1抗体包被的磁性微粒；和浓度为0.2
‑
2ug/ml碱性磷酸酶标记的鼠抗人CHI3L1抗体，其所用的稀释液包括1
‑
5％的酶稳定剂，酶稳定剂包括DL
‑
β
‑
(3
‑
吲哚基)
‑
α
‑
氨基丙酸(DL
‑
色氨酸)；以及校准品。2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述酶稳定剂还包括1
‑
5％海藻糖、5
‑
10％甘油、0.5
‑
5％BSA中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述稀释液包括10
‑
50mM缓冲体系、1
‑
5％酶稳定剂、0.1
‑
0.5％表面活性剂、0.1
‑
1mM金属离子、30
‑
60ug/ml阻断剂、0.1
‑
0.5％防腐剂。4.根据权利要求3所述的磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)的试剂盒，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宾，郭俊美，汪云峰，贺率，柳建敏，
申请(专利权)人：宁波海尔施智造有限公司，
类型：发明
国别省市：