一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统技术方案

本申请提供一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统。该系统包括病毒载体，所述病毒载体携带有能够治疗肺纤维化的RNA片段，所述病毒载体能够在宿主的器官组织中富集，并在所述宿主器官组织中内源性地自发形成含有能够治疗肺纤维化的所述RNA片段的复合结构，所述复合结构能够将所述RNA片段送入肺部，实现肺纤维化的治疗。本申请提供的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统安全性和可靠性已被充分验证，成药性非常好、通用性强，具有极好的经济效益和应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统


[0001]本申请涉及生物医学
，特别涉及一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统。

技术介绍

[0002]肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变，也就是正常的肺泡组织被损坏后经过异常修复导致结构异常(疤痕形成)。肺纤维化严重影响人体呼吸功能，表现为干咳、进行性呼吸困难(自觉气不够用)，且随着病情和肺部损伤的加重，患者呼吸功能不断恶化。特发性肺纤维化发病率和死亡率逐年增加，诊断后的平均生存期仅2.8年，死亡率高于大多数肿瘤，被称为一种“类肿瘤疾病”。
[0003]RNA干扰(RNAi)疗法自从被专利技术以来，一直被认为是治疗人类疾病的一种很有前途的策略，但在临床实践过程中遇到了许多问题，该疗法的发展进度远远落后于预期。
[0004]一般认为RNA无法在细胞外长期稳定存在，因为RNA会被细胞外富含的RNase降解成碎片，因此必须找到能够使RNA稳定存在于细胞外，并且能够靶向性地进入特定组织的方法，才能将RNAi疗法的效果凸显出来。
[0005]目前与siRNA相关的专利很多，主要聚焦在以下几个方面：1、设计具有医学效果的siRNA。2、对siRNA进行化学修饰，提高siRNA在生物体内的稳定性，提高产率。3、提高设计各种人工载体(如脂质纳米粒子、阳离子聚合物和病毒)，以提高siRNA在体内传递的效率。其中第3方面的专利很多，其根本原因是研究人员们已经意识到目前缺乏合适的siRNA传递系统，将siRNA安全地、精确地、高效地输送到目标组织，该问题已经成为制约RNAi疗法的核心问题。
[0006]病毒(Biological virus)是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒载体可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞，进行感染的分子机制，可发生于完整活体(in vivo)或是细胞培养(in vitro)中，主要应用于基础研究、基因疗法或疫苗。但是目前很少有针对将病毒作为载体利用特殊的自组装机制递送RNA，特别是siRNA的相关研究。
[0007]公开号为CN108624590A的中国专利公开了一种能够抑制DDR2基因表达的siRNA；公开号为CN108624591A的中国专利公开了一种能够沉默ARPC4基因的siRNA，并且对该siRNA进行了α
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磷
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硒修饰；公开号为CN108546702A的中国专利公开了一种靶向长链非编码RNA DDX11
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AS1的siRNA。公开号为CN106177990A的中国专利公开了一种可以用于多种肿瘤治疗的siRNA前体。这些专利均设计了特定的siRNA并且来针对某些由基因变化引起的疾病。
[0008]公开号为CN108250267A的中国专利公开了一种多肽、多肽
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siRNA诱导共组装体，使用多肽作为si RNA的载体。公开号为CN108117585A的中国专利公开了一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，同样使用多肽作为siRNA的载体。公开号为
CN108096583A的中国专利公开了一种纳米粒子载体，该载体在包含化疗药物的同时还可以装载具有乳腺癌疗效的siRNA。这些专利均为在siRNA载体方面的专利技术创造，但是其技术方案具有一个共同特征，那就是载体和siRNA均在体外预先组装，然后再引入宿主体内。事实上，目前绝大部分设计的传递技术均是如此。然而这类传递体系具有共同的问题，那就是这些人工合成的外源性传递体系很容易被宿主的循环系统清除，也有可能引起免疫原性反应，甚至可能对特定的细胞类型和组织有毒。
[0009]本专利技术的研究团队发现内源性细胞可以选择性地将miRNAs封装到外泌体(exosome)中，外泌体可以将miRNA传递到受体细胞中，其分泌的miRNA在相对较低的浓度下，即可有力阻断靶基因的表达。外泌体与宿主免疫系统生物相容，并具有在体内保护和运输miRNA跨越生物屏障的先天能力，因此成为克服与siRNA传递相关的问题的潜在解决方案。例如，公开号为CN110699382A的中国专利就公开了一种递送siRNA的外泌体的制备方法，公开了从血浆中分离外泌体，并将siRNA通过电穿孔的方式封装到外泌体中的技术。
[0010]但是这类在体外分离或制备外泌体的技术，往往需要通过细胞培养获取大量的外泌体，再加上siRN A封装的步骤，这使得大规模应用该产品的临床费用变得非常高，一般患者无法负担；更重要的是，外泌体复杂的生产/纯化过程，使其几乎不可能符合GMP标准。
[0011]到目前为止，以外泌体为有效成分的药物从未获得CFDA批准，其核心问题就是无法保证外泌体产品的一致性，而这一问题直接导致此类产品无法获得药品生产许可证。如果能解决这一问题，则对推动肺纤维化的RNAi疗法意义非凡。
[0012]因此，开发一个安全、精确和高效的siRNA传递系统是对提高肺纤维化的RNAi治疗效果，推进RN Ai疗法至关重要的一环。

技术实现思路

[0013]有鉴于此，本申请实施例提供了一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，以解决现有技术中存在的技术缺陷。
[0014]本申请的一个专利技术点为提供一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，该系统包括病毒载体，所述病毒载体携带有能够治疗肺纤维化的RNA片段，所述病毒载体能够在宿主的器官组织中富集，并在所述宿主器官组织中内源性地自发形成含有能够治疗肺纤维化的所述RNA片段的复合结构，所述复合结构能够将所述RNA片段送入肺部，实现肺纤维化的治疗。RNA片段送入目标组织肺部后，能够抑制与其相匹配的基因的表达，进而抑制肺纤维化的发展。
[0015]进一步地，所述病毒载体为腺病毒相关病毒。
[0016]进一步地，所述腺病毒相关病毒为腺病毒相关病毒5型、腺病毒相关病毒8型或腺病毒相关病毒9型。
[0017]进一步地，所述RNA片段包含1个、两个或多个具有医疗意义的具体RNA序列，所述RNA序列是具有医学意义的siRNA、shRNA或miRNA。
[0018]进一步地，所述病毒载体包括启动子和靶向标签，所述靶向标签能够在宿主的器官组织中形成所述复合结构的靶向结构，所述靶向结构位于复合结构的表面，所述复合结构能够通过所述靶向结构寻找并结合目标组织，将所述RNA片段递送进入目标组织。
[0019]进一步地，所述病毒载体中包括以下任意一种线路或几种线路的组合：启动子
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RNA片段、启动子
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靶向标签、启动子
‑
RNA片段
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靶向标签；每一个所述病毒载体中至少包括一个RNA片段和一个靶向标签，所述RNA片段和靶向标签位于相同的线路中或位于不同的线路中。
[0020]进一步地，所述病毒载体还包括能够使所述线路折叠成正确结构并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，该系统包括病毒载体，所述病毒载体携带有能够治疗肺纤维化的RNA片段，所述病毒载体能够在宿主的器官组织中富集，并在所述宿主器官组织中内源性地自发形成含有能够治疗肺纤维化的所述RNA片段的复合结构，所述复合结构能够将所述RNA片段送入肺部，实现肺纤维化的治疗。2.如权利要求1所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述病毒载体为腺病毒相关病毒。3.如权利要求2所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述腺病毒相关病毒为腺病毒相关病毒5型、腺病毒相关病毒8型或腺病毒相关病毒9型。4.如权利要求1所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述RNA片段包含1个、两个或多个具有医疗意义的具体RNA序列，所述RNA序列是具有医学意义的siRNA、shRNA或miRNA。5.如权利要求1所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述病毒载体包括启动子和靶向标签，所述靶向标签能够在宿主的器官组织中形成所述复合结构的靶向结构，所述靶向结构位于复合结构的表面，所述复合结构能够通过所述靶向结构寻找并结合目标组织，将所述RNA片段递送进入目标组织。6.如权利要求5所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述病毒载体中包括以下任意一种线路或几种线路的组合：启动子
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RNA片段、启动子
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靶向标签、启动子
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RNA片段
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靶向标签；每一个所述病毒载体中至少包括一个RNA片段和一个靶向标签，所述RNA片段和靶向标签位于相同的线路中或位于不同的线路中。7.如权利要求6所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述病毒载体还包括能够使所述线路折叠成正确结构并表达的侧翼序列、补偿序列和loop序列，所述侧翼序列包括5
’
侧翼序列和3
’
侧翼序列；所述病毒载体中包括以下任意一种线路或几种线路的组合：5'
‑
启动子
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5'侧翼序列
‑
RNA片段
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loop序列
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补偿序列
‑
3'侧翼序列、5'
‑
启动子
‑
靶向标签、5'
‑
启动子
‑
靶向标签
‑
5'侧翼序列
‑
RNA片段
‑
loop序列
‑
补偿序列
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3'侧翼序列。8.如权利要求7所述的用于治疗肺纤维化的RNA递送系统，其特征在于，所述5
’
侧翼序列为ggatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgaattc或与其同源性大于80％的序列；所述loop序列为gttttggccactgactgac或与其同源性大于80％的序列；所述3
’
侧翼序列为accggtcaggacacaaggcctgttactagcactcacatgg...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辰宇，陈熹，付正，李菁，张翔，周心妍，张丽，余梦超，郭宏源，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：