一种改良型的夹心法免疫层析试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种改良型的夹心法免疫层析试纸条，该试纸条的第一层结合物垫上包被有生物素结合物，生物素结合物是由抗体1或抗原1与生物素结合而成，第二层结合物垫上包被有示踪结合物，示踪结合物是由抗体2或抗原2与微球颗粒结合而成，检测线上包被有聚合链酶亲和素。本实用新型专利技术的试纸条解决了原来夹心法空间位阻、结合力不强、夹心结构的复合物在固相载体上反应时间短、吸附附着量不足的弱点，从而提高待检测抗原的检测灵敏度和特异性水平。平。平。

【技术实现步骤摘要】
一种改良型的夹心法免疫层析试纸条


[0001]本技术涉及免疫层析检测
，特别涉及一种改良型的夹心法免疫层析试纸条。

技术介绍

[0002]免疫层析检测技术，通常是利用抗原和抗体的免疫学特异性反应和层析反应的特点，达到快速、准确地显色以检测待测物的目的。目前较为普及的是胶体金免疫层析法，该方法利用硝酸纤维素膜(NC)等为固相载体，通过层析或渗滤的手段促使以胶体金标记的抗原或抗体与特异配体的反应在膜上进行，实现反应结果的示踪显色，从而进行定性检测。
[0003]在胶体金免疫层析法中，常见的检测方法是夹心法，其利用连接于固相载体上的抗体或抗原和标记指示剂的抗体或抗原，分别与样品中待测特异性抗原或抗体进行两个位点的结合，形成固相抗体或抗原—待测抗原或抗体—标记指示剂抗体或抗原的免疫复合物，从而将待测物质特异性地包裹形成夹心式的复合结构。但该方法存在灵敏度不足和难以定量化的局限，主要是受如下影响因素：1、可逆性：如果抗原或抗体存在尺寸比例不协调、结合的位点不足、位置相近等情况，抗原抗体结合的位阻较大，双抗体夹心的结构就难以稳定实现，可能出现解离或脱落的情况；2、空间吸附性：固相载体上要包被上对应的抗原或抗体，对应的抗原或抗体既需要有和固相载体物理吸附的结合力，还要保留和抗体或抗原结合的位点，由于固相载体的空间体积限制，能抓取的夹心结构的复合物的数量就会受空间或吸附力的影响，造成结合数量和效果的不足；3、比例性：抗原和抗体的比例相对较窄，受比例性的限制，在固相载体有限的空间上难以兼容过饱和状态，限制了被测抗原或抗体的浓度范围，导致检测范围不足；以上三种情况都最终表现为检测结果的灵敏度不足和特异性难以控制。因此，需要一种新的方法以解决上述存在的问题。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本技术提供了一种改良型的夹心法免疫层析试纸条及其制备方法和应用。
[0005]本技术采用以下技术方案：
[0006]一种改良型的夹心法免疫层析试纸条，所述试纸条包括层析基板，在所述层析基板上从前往后依次粘贴样品垫、第一层结合物垫、第二层结合物垫、固相载体和吸水垫，所述第一层结合物垫上包被有生物素结合物，所述生物素结合物是由抗体1或抗原1与生物素结合而成，所述第二层结合物垫上包被有示踪结合物，所述示踪结合物是由抗体2或抗原2与微球颗粒结合而成，所述抗体1和抗体2均能与待测物的抗原特异性结合，所述抗原1和抗原2 均能与待测物的抗体特异性结合，所述固相载体上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有聚合链酶亲和素，所述质控线上包被有羊抗兔IgG抗体。
[0007]进一步地，所述层析基板为聚酯板。
[0008]进一步地，所述第一层结合物垫和第二层结合物垫均采用玻璃纤维膜。
[0009]进一步地，所述固相载体采用硝酸纤维素膜。
[0010]进一步地，所述微球颗粒采用有带有颜色的乳胶微球颗粒或胶体金颗粒。
[0011]进一步地，所述乳胶微球颗粒的直径为100～400nm，所述胶体金颗粒的直径为20
‑
80nm。
[0012]采用上述技术方案后，本技术与
技术介绍
相比，具有如下优点：
[0013]1、本技术的试纸条是在固相载体上包被聚合琏酶亲和素，通过生物素和聚合琏酶亲和素的超强非共价结合的特异性来抓取已经标记好示踪物质
‑ꢀ
特异性抗体
‑
待测抗原
‑
聚合琏酶亲和素的物质，待测抗原首先和聚合琏酶亲和素进行结合，标记好特异性抗体和示踪物质(乳胶微球颗粒)在待测抗原和生物素结合后进行特异性的抗原抗体结合，最后在固相载体上的聚合链酶亲和素和前面的复合物进行非共价结合，形成示踪物质—特异性抗体—待测抗原—特异性抗体—生物素—聚合链酶亲和素—固相载体的结合方式；
[0014]2、本技术针对常规夹心法检测技术中检测灵敏度不足和特异性难以控制的问题，将原来的双抗体或双抗原同步结合，改为双抗原或双抗体分步结合，通过区分结合反应的位点，增加双抗原或双抗体结合的反应时间，提高结合效率和结合量；并且在此基础上引入聚合链酶生物素与生物素相结合，替代常规的利用抗原和双抗体夹心结合的方式，解决原来夹心法空间位阻、结合力不强、夹心结构的复合物在固相载体上反应时间短、吸附附着量不足的弱点，从而提高待检测抗原的检测灵敏度和特异性水平。
附图说明
[0015]图1为本技术试纸条的结构示意图；
[0016]图2为实施例一的试纸条使用前的标记和包被物质示意图；
[0017]图3为实施例一的试纸条层析过程中的标记和包被物质示意图。
[0018]附图标记说明：
[0019]100、层析基板；200、样品垫；300、第一层结合物垫；400、第二层结合物垫；500、固相载体；510、检测线；520、质控线；600、吸水垫。
具体实施方式
[0020]为了使本技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。
[0021]实施例一
[0022]如图1所示，本实施例以检测HIV
‑
P24抗原为例进行详细说明。
[0023]一种改良型的夹心法免疫层析试纸条，所述试纸条包括层析基板，在所述层析基板上从前往后依次粘贴样品垫、第一层结合物垫、第二层结合物垫、固相载体和吸水垫，所述第一层结合物垫上包被有生物素结合物，所述生物素结合物是由HIV
‑
P24抗体与生物素结合而成，所述第二层结合物垫上包被有示踪结合物，所述示踪结合物是由HIV
‑
P24抗体与微球颗粒结合而成，所述HIV
‑
P24抗体能与待测HIV
‑
P24抗原特异性结合，所述固相载体上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有聚合链酶亲和素，所述质控线上包被有羊抗兔IgG抗体。
[0024]所述层析基板为聚酯板。所述第一层结合物垫和第二层结合物垫均采用玻璃纤维膜。所述固相载体采用硝酸纤维素膜。所述微球颗粒采用有带有颜色的乳胶微球颗粒，所述乳胶微球颗粒的直径为300nm。
[0025]如图2所示，使用前，试纸条的第一层结合物垫上包被有Ab1
‑
Bio，即 HIV
‑
P24抗体
‑
生物素的结合物，第二层结合物垫上包被有Mb
‑
Ab2，即乳胶微球颗粒
‑
HIV
‑
P24抗体的结合物，检测线上包被有poly
‑
SA，即聚合链酶亲和素；其中，Ab1表示抗体1，Ab2表示抗体2，Bio表示生物素，Mb表示乳胶微球颗粒，poly
‑
SA表示聚合链酶亲和素。这里的乳胶微球也可以使用胶体金颗粒进行替换。
[0026]使用时，用正常人血浆配制不同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改良型的夹心法免疫层析试纸条，其特征在于：所述试纸条包括层析基板，在所述层析基板上从前往后依次粘贴样品垫、第一层结合物垫、第二层结合物垫、固相载体和吸水垫，所述第一层结合物垫上包被有生物素结合物，所述生物素结合物是由抗体1或抗原1与生物素结合而成，所述第二层结合物垫上包被有示踪结合物，所述示踪结合物是由抗体2或抗原2与微球颗粒结合而成，所述抗体1和抗体2均能与待测物的抗原特异性结合，所述抗原1和抗原2均能与待测物的抗体特异性结合，所述固相载体上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有聚合链酶亲和素，所述质控线上包被有羊抗兔IgG抗体。2.如权利要求1所述的一种改良型的夹心...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，周旻，李智彪，林惠福，游永灏，刘景龄，秦荣，
申请(专利权)人：英科新创厦门科技股份有限公司，
类型：新型
国别省市：