一种耐盐固氮固体菌肥及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种耐盐固氮固体菌肥及其制备方法，其解决了现有技术中固氮菌的发酵和剂型常温难以保存的技术问题，其包括如下步骤：(1)耐盐固氮菌的活化、复壮；(2)耐盐固氮菌的种子培养；(3)耐盐固氮菌的发酵生产；(4)耐盐固氮菌固体菌肥的制备。本发明专利技术可用于耐盐固氮固体菌肥的制备。固体菌肥的制备。固体菌肥的制备。

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐固氮固体菌肥及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种菌肥及其制备方法，具体地说，涉及一种耐盐固氮固体菌肥及其制备方法。

技术介绍

[0002]自然界中存在一些微生物能将空气中的氮气还原为氨，为微生物和植物提供氮源，这种现象被称为生物固氮。固氮菌每年从空气中约固定1.5亿吨氮肥，是全世界生产氮肥总量的几倍。据估算，非共生生物固氮提供了作物氮素总量24％的氮素来源。接种非共生固氮菌是提高土壤生物固氮能力，从而降低氮肥施用量的最可行方案之一。固氮菌的发酵和常温保存，一直是行业的难题，导致商品中活菌数低，制约了是固氮菌类菌剂的应用和推广。耐盐固氮菌作为农业生产用细菌类的一个新菌种，马鸣超等认为耐盐固氮菌普遍存在于土壤环境中，未见致病性报道，属于风险一级(马鸣超，姜昕，曹凤明，李俊。生物有机肥生产菌种安全分析及管控对策研究[J].农产品质量与安全，2019(6):57
‑
61.)，因此耐盐碱的耐盐固氮菌的开发和应用具有重要意义。能在盐渍化的土壤中生存的固氮菌，具备了在盐碱地上的应用潜力。
[0003]目前固氮菌的发酵和剂型常温保存问题是行业的一个难点，特别是耐盐固氮菌的发酵和生产报道相对较少。

技术实现思路

[0004]本专利技术就是为了解决现有技术中固氮菌的发酵和剂型常温难以保存的技术问题，提供一种可以常温保存且活菌数较多的耐盐固氮固体菌肥及其制备方法。
[0005]为此，本专利技术提供一种耐盐固氮固体菌肥的制备方法，其包括如下步骤：(1)耐盐固氮菌的活化、复壮：将耐盐固氮菌菌种从
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80℃冰箱取出，接种Ashby固体培养基，30℃培养48h,连续传代2次后；继续在改良无氮培养基传代1次,30℃培养48h；(2)耐盐固氮菌的种子培养：从改良无氮培养基挑取单菌落，接种于装液量为200mL液体Ashby培养基，并带有20颗玻璃珠的500mL三角瓶，进行摇床培养，200rpm,28℃培养32～48h；转接种子培养基，200rpm,28℃培养48h，即得到一级种子培养液；将一级种子培养液转接至装液量100L发酵罐，28℃培养32h，得到二级种子液；(3)耐盐固氮菌的发酵生产：将一级种子培养液转接至发酵培养基装液量1吨发酵罐，控制温度为28℃
±
2℃；培养30h～40h，结合残糖剩余量和活菌计数，判定发酵的终止；(4)耐盐固氮菌固体菌肥的制备：将上述耐盐固氮菌发酵液与吸附剂按1:5的比例混合，充分搅拌均匀，混合后含水率控制30％～35％；25℃浅层堆放，保藏通风，适当抛翻，3～5天后80～100目过筛，制得耐盐固氮菌固体菌肥。
[0006]优选的，所述步骤(1)中改良无氮培养基配方：甘露醇10g/L，葡萄糖5g/L，KH2PO
4 0.2g/L，MgSO4·
7H2O 0.2g/L，NaCl 30.0g/L，CaSO4·
2H2O 0.2g/L，CaCO
3 5g/L。
[0007]优选的，所述步骤(2)中种子培养基配方：葡萄糖10～20g/L，KH2PO
4 1.0g/L，MgSO4·
7H2O 0.2g/L，CaCO
3 0.5g/L，FeCl
3 0.3g/L,NaMoO4·
2H2O 0.4g/L。
[0008]优选的，所述步骤(3)中所述发酵培养基配方为：葡萄糖15～30g/L，甘油1～5g/L，KH2PO
4 1～2g/L，MgSO4·
7H2O 0.2～0.4g/L，FeCl
3 0.2～0.3g/L，NaMoO4·
2H2O 0.1～0.5g/L，CaCO
3 0.5～1.0g/L，CaSO4·
2H2O 0.1～1g/L。
[0009]优选的，所述步骤(4)中吸附剂配方重量份为：褐煤粉70～80份，米糠粉5～10份，过磷酸钙5～10份，Ph7.3～7.5。
[0010]优选的，所述步骤(3)中发酵罐发酵参数控制温度为28℃
±
2℃；前16h，发酵罐搅拌速度为180rpm～200rpm，通气量控制0.5v/v
·
m；16h后,发酵罐搅拌速度为200rpm～220rpm，通气量控制1.0v/v
·
m；培养30h～40h。
[0011]本专利技术还提供一种按照上述方法制得的耐盐固氮菌固体菌肥。
[0012]本专利技术具有以下有益效果：
[0013]本专利技术中制得耐盐固氮菌肥，30℃活菌数前期1个月略高于20℃条件，与利用吸附剂的配方营养物质继续生长有关；但2个月后30℃、20℃条件下的活菌数都开始呈现下降趋势，其中30℃条件下的活菌数下降速率大于20℃，但都稳定在5亿/g以上，高于《固氮菌肥料(NY411
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2000)》固体剂型的有效期6个月，1亿/g的指标要求。
附图说明
[0014]图1是本专利技术中温度对耐盐固氮菌生长的影响示意图；
[0015]图2本专利技术中pH对耐盐固氮菌生长的影响示意图；
[0016]图3本专利技术中盐度对耐盐固氮菌生长的影响示意图；
[0017]图4本专利技术中转速对耐盐固氮菌的影响示意图；
[0018]图5本专利技术中耐盐菌发酵过程残糖检测和活菌计数示意图；
[0019]图6本专利技术中耐盐固氮菌菌肥储藏活菌计数示意图。
具体实施方式
[0020]下面结合实施例对本专利技术做进一步描述。
[0021]本专利技术记载的耐盐固氮菌，属于自生固氮菌—耐盐固氮菌(Azotobacter salinestris)，从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心购买；该菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1.2391。
[0022]实施例1
[0023]耐盐固氮菌的活化、复壮
[0024]将购买的耐盐固氮菌菌种从
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80℃冰箱取出，接种1环到Ashby固体培养基，30℃培养48h,连续传代2次后；继续在改良无氮培养基传代1次,30℃培养48h。所述培养基由如下物质构成：
[0025]Ashby培养基：甘露醇10g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·
2H2O 0.2g，CaCO
3 5g；
[0026]改良无氮培养基：甘露醇10g，葡萄糖5g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 30.0g，CaSO4·
2H2O 0.2g，CaCO
3 5g；
[0027]称好上述物质后用蒸馏水定容至1L，pH7.2，115℃，30min灭菌；上述培养基添加20g琼脂，即固体培养基。
[0028]实施例2
[0029]耐盐固氮菌的主要发酵环境因素研究
[0030]从改良无氮培养基挑取单菌落，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐盐固氮固体菌肥的制备方法，其特征是，包括如下步骤：(1)耐盐固氮菌的活化、复壮：将耐盐固氮菌菌种接种于Ashby固体培养基，培养,连续传代2次后；继续在改良无氮培养基传代1次,培养；(2)耐盐固氮菌的种子培养：从改良无氮培养基挑取单菌落，接种于Ashby培养基，并于带有玻璃珠的三角瓶，进行摇床培养，转接种子培养基，培养，即得到一级种子培养液；将一级种子培养液转接至发酵罐，培养，得到二级种子液；(3)耐盐固氮菌的发酵生产：将一级种子培养液转接至发酵培养基发酵罐，培养，得到耐盐固氮菌发酵液；(4)耐盐固氮菌固体菌肥的制备：将上述耐盐固氮菌发酵液与吸附剂混合，充分搅拌均匀，浅层堆放，制得耐盐固氮菌固体菌肥。2.根据权利要求1所述的耐盐固氮菌肥的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的改良无氮培养基配方：甘露醇10g/L，葡萄糖5g/L，KH2PO
4 0.2g/L，MgSO4·
7H2O 0.2g/L，NaCl 30.0g/L，CaSO4·
2H2O 0.2g/L，CaCO
3 5g/L。3.根据权利要求1所述的耐盐固氮菌肥的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的种子培养基配方：葡萄糖10～20g/L，KH2PO
4 1.0g/L，MgSO4·
7H2O 0.2g/L，CaCO
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【专利技术属性】
技术研发人员：岳国磊，徐兴锋，郝宁宁，
申请(专利权)人：山东鼎创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：