一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，所述多肽组合包含SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少一种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少一种。本发明专利技术多肽特异性高、在水中溶解度好，且相互之间不会干扰，可实现在同一检测体系中稳定高效地对烟曲霉和黄曲霉的感染进行检测，检测灵敏度高达97.58％，特异度高达85％，具有灵敏度高、特异度好和生物安全性好等优点。特异度好和生物安全性好等优点。特异度好和生物安全性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合及试剂盒


[0001]本专利技术属于医学检测
，具体涉及一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合及试剂盒。

技术介绍

[0002]曲霉菌病是由曲霉感染导致的一种疾病，临床上由曲霉引起的疾病有肺曲霉病，侵袭性曲霉病，变应性支气管肺部曲霉病以及浅表曲霉病等。曲菌病常发生在人体空腔部位，如肺部空腔，耳道或鼻窦。在鼻窦和肺内，曲霉病通常进展为由真菌菌丝缠结团块、血凝块和白细胞组成的球块状病灶。真菌球逐渐扩大，在此过程中破坏肺组织，但一般不会向其它区域播散。如果没有及时治疗，会变得非常凶险，可迅速扩散至全肺，并常经血液循环播散至脑、心、肝和肾。这种快速播散主要发生于免疫系统受损的人群。如果曲霉菌定植于气道内表面上，有些哮喘或囊性纤维化患者会出现慢性过敏反应，症状包括咳嗽、喘鸣和发烧。浅表曲霉病会在烧伤、绷带下、眼睛或鼻窦、口腔、鼻腔或耳道损伤后发生。曲霉菌病可无症状或出现咳血、发热、胸痛和呼吸困难。若真菌播散至肝或肾可导致相应器官功能障碍。
[0003]常见的可以引起曲霉病的曲霉菌有烟曲霉(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉(Aspergillus flavus)。烟曲霉是常见真菌病原体，80％与曲霉有关疾病中的病原体为烟曲霉。烟曲霉的分生孢子被人体吸入后可以在肺部定植，在人体免疫力受损时会引发多种疾病。黄曲霉是一种自然界常见的霉菌，会引起食物的霉变。它会造成肺的曲菌症，有时候也会引起角膜、耳与鼻眼框的感染。黄曲霉会产生黄曲毒素，是一种剧毒的致癌物。
[0004]检测曲霉菌感染的主要方法有血培养法，聚合酶链式反应(PCR)法，质谱法，血清学方法，半乳甘露聚糖检测(GM试验)等。血培养法的需要的时间比较长，得到培养结果往往需要数天。PCR法测试的时间比较短，可以在数小时内出结果，但是的灵敏度不及血培养法。质谱法一般需要培养完之后得到较大量的病原体细胞之后方可操作。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的在于提供一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其具有灵敏度高、特异度好和生物安全性好的优点。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
[0007]一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，所述多肽组合包含SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少一种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少一种。
[0008]在一些实施例中，所述多肽组合包含SEQ ID NO.1所示多肽和SEQ ID NO.6所示多肽。
[0009]在一些实施例中，所述多肽组合还包括如SEQ ID NO.2所示多肽和SEQ ID NO.7所示多肽。
[0010]在一些实施例中，所述多肽组合包含如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少两种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少两种。
[0011]在一些实施例中，所述多肽组合包含如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少三种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少三种。
[0012]在一些实施例中，所述多肽组合包含如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少四种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少四种。
[0013]在一些实施例中，所述多肽组合包含如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10所示的多肽。
[0014]本专利技术还提供了一种检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的试剂盒，所述试剂盒包含如上所述的多肽组合。
[0015]在一些实施例中，所述试剂盒还包括人γ干扰素(以下简称γ干扰素)含量测定试剂。
[0016]在一些实施例中，所述γ干扰素含量测定试剂为使用酶联免疫法、化学发光法、时间分辩法或放射性同位素标记免疫法测定测定γ干扰素含量的试剂。
[0017]本专利技术还提供了如上所述的多肽组合在制备检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的试剂盒中的应用。
[0018]本专利技术通过优化获得了一组可用于同时检测烟曲霉和黄曲霉感染的多肽，所述多肽可以用于构建γ干扰素释放试验体系，检测烟曲霉和黄曲霉的特异性效应T细胞的存在，从而判断待测者是否有烟曲霉或黄曲霉的感染。专利技术人结合自身经验和大量的研究，分析获得了烟曲霉特有的核糖核酸酶丝裂鳃蛋白(Ribonuclease mitogillin)和黄曲霉特有的抗原细胞壁蛋白MP1(antigenic cell wall protein MP1)序列中能够与主要组织相容性复合物Ⅱ类(MHCII)分子产生较强结合的位置(与MHCII分子有较强的结合力可以保证多肽的有效性)，并发现当多肽的序列长度为20
‑
40时可以获得好的检测效果。本专利技术多肽特异性高、在水中溶解度好，且相互之间不会干扰，可实现在同一检测体系中稳定高效地实对烟曲霉和黄曲霉的感染进行检测，检测灵敏度高达97.58％，特异度高达85％，具有灵敏度高、特异度好和生物安全性好等优点。
附图说明
[0019]图1为本专利技术多肽组合用于识别烟曲霉和黄曲霉感染的原理。
[0020]图2GM阳性患者和健康对照者的空白对照管上清的γ干扰素浓度(N值)、本专利技术多肽培养管上清的γ干扰素浓度(T值)、阳性对照管上清的γ干扰素浓度(P值)、本专利技术多肽引起的γ干扰素释放水平(T
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N值)以及阳性对照引起的γ干扰素释放水平(P
‑
N值)的分布图。
[0021]图3GM阳性患者和健康对照者的空白对照管上清的γ干扰素浓度(N值)、本专利技术多肽培养管上清的γ干扰素浓度(T值)、阳性对照管上清的γ干扰素浓度(P值)、本专利技术多肽引起的γ干扰素释放水平(T
‑
N值)以及阳性对照引起的γ干扰素释放水平(P
‑
N值)的平均值及方差分布图。
[0022]图4为用本专利技术多肽培养管上清的γ干扰素浓度(T值)作为诊断指标识别烟曲霉和黄曲霉感染的ROC曲线图。
[0023]图5为用本专利技术多肽引起的γ干扰素释放水平(T
‑
N值)作为为诊断指标识别烟曲
霉和黄曲霉感染的ROC曲线图。
[0024]图6为新型隐球菌感染者、念珠菌感染者、黑曲霉感染者、烟曲霉菌或黄曲霉感染者的多肽抗原引起的γ干扰素释放水平(T
‑
N值)的平均值。
[0025]图7为将新型隐球菌感染者、念珠菌感染者、黑曲霉感染者作为阴性样本，烟曲霉菌或黄曲霉感染者作为阳性样本，对多肽抗原引起的γ干扰素释放水平(T
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N值)作为诊断指标识别烟曲霉菌或黄曲霉感染者的性能做ROC分析的结果图。
具体实施方式
[0026]本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其特征在于，所述多肽组合包含SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少一种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少一种。2.如权利要求1所述的用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其特征在于，所述多肽组合包含SEQ ID NO.1所示多肽和SEQ ID NO.6所示多肽。3.如权利要求2所述的用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其特征在于，所述多肽组合还包括如SEQ ID NO.2所示多肽和SEQ ID NO.7所示多肽。4.如权利要求1所述的用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其特征在于，所述多肽组合包含如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示多肽中的至少两种和如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10所示多肽中的至少两种。5.如权利要求1所述的用于检测烟曲霉和/或黄曲霉感染的多肽组合，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翠，卢卫国，刘志辉，孙六娜，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：