【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤细胞，尤其涉及一种肝癌细胞的干性转化方法。
技术介绍
1、肝癌(肝癌)即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。肝癌的治疗包括手术根除、放化疗、介入、靶向药物、免疫治疗等多种手段。肝癌的死亡率位居世界及我国前列，我国每年肝癌的新发病例数和死亡病例数约占全球总数的一半。2021年nccn指南指出，手术仍是肝癌的主要治疗手段，而肝癌根治性切除术后5年转移复发率高达50～70％以上，肝癌的防治形势依旧十分严峻。
2、临床研究发现对肝癌患者行手术根除后，患者者均会经历一个无瘤生存阶段，此阶段患者体内存在微量肿瘤细胞，无法被常规手段检测到，在一定时间范围内既没有被机体清除，也没有增殖生长；但这些肿瘤细胞仍具有增殖潜能，可在数年乃至数十年后再次增殖，导致肿瘤的复发或远处转移，而这个过程有研究表明术后复发的主要根源是肝癌细胞有潜在的干性能力。在肿瘤生长的早期，肿瘤细胞就有转移的倾向，这些脱落于原发灶的弥散性肿瘤细胞与机体微环境之间形成了“种子”和“土壤”的互作模式，在机体多步骤复杂的相互作用过程下，逐步发育成具有致病潜能的干性肿瘤细胞，成为肝癌术后复发的隐患。因此，构建稳定的肝癌干细胞株对研究肝癌术后复发的机制具有重大意义。目前尚没有成熟
技术实现思路
1、为了解决上述问题，在现有癌细胞干性转化的基础上，本专利技术提供了一种肝癌细胞干性转化方法。
2、一方面，本专利技术提供一种肝癌细胞干性转化方法，包括以下步骤：
3、(1)配置polyhema工作液：称量polyhema，用无水乙醇配置8～12mg/ml polyhema工作液，恒温水浴；
4、(2)制备培养板：将步骤(1)配置得到的polyhema工作液均匀铺入多孔板，风干，制得polyhema包被板备用；
5、(3)细胞接种：将处于对数生长期的常规培养的肝癌细胞进行胰酶消化、离心、收集，然后用完全培养基重悬细胞，并配置为5～6×105的单细胞悬液，接种于步骤(2)制得的polyhema包被板中，置于培养箱中继续培养；
6、(4)转化培养：继续培养2～4天，收集悬浮细胞，离心，胰酶作用2～3min后，用含有fbs的完全培养基终止消化过程，再次离心后，调整细胞密度为5～6×105，得到肝癌干细胞的单细胞悬液。
7、进一步地，培养的条件为37℃，5％co2。
8、进一步地，步骤(1)恒温水浴温度为35～40℃；和/或，恒温水浴的时间为10～14h。
9、进一步地，步骤(2)多孔板为6孔板。
10、进一步地，步骤(2)风干的时间为10～14h。
11、进一步地，步骤(3)常规培养的肝癌细胞包括常规培养的hcc-lm3与mhcc-97h。
12、本专利技术还提供上述的肝癌细胞的干性转化方法在构建肝癌干细胞模型中的应用。
13、另一方面，本专利技术还提供一种肝癌干细胞，由上述转化方法转化得到。
14、进一步地，本专利技术还提供上述肝癌干细胞在构建肝癌干细胞模型中的应用。
15、进一步地，本专利技术还提供上述肝癌干细胞在开发抗肝癌药物中的应用。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
17、1.本专利技术提供的一种肝癌细胞干性转化方法，采用poly-hema调控体外培养环境的机械硬度，改变肝癌细胞生长环境的物理和力学特性；同时影响肝癌细胞的降解和溶胀，模拟生物体内微环境。当肝癌细胞处于polyhema水凝胶包被的培养环境中时，受到特定的基质刚度、剪切力的环境影响，细胞通过力学转导机制，将其转变为胞内生化信号，对组织功能产生一系列作用，从而调节肝癌细胞增殖、迁移，促进其表达干细胞标志分子，使肝癌细胞向肝癌干细胞诱导并且聚集，最终完成向肝癌干细胞的稳定转变。
18、2.本专利技术提供的一种肝癌细胞干性转化方法转化得到的肝癌干细胞，表现稳定，为肝癌的研究提供了稳定可靠的体外细胞实验模型，对于研究肝癌疾病、肝癌术后复发的机制、研究抗肝癌复发药物有重要意义。
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1.一种肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，所述培养的条件为37℃，5％CO2。
3.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(1)所述恒温水浴温度为35～40℃；和/或，所述恒温水浴的时间为10～14h。
4.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(2)所述多孔板为6孔板。
5.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(2)所述风干的时间为10～14h。
6.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(3)所述常规培养的肝癌细胞包括常规培养的HCC-LM3与MHCC-97H。
7.根据权利要求1-6任一项所述的肝癌细胞的干性转化方法在构建肝癌干细胞模型中的应用。
8.一种肝癌干细胞，其特征在于，由权利要求1-6任一项所述的转化方法转化得到。
9.根据权利要求8所述的肝癌干细胞在构建肝癌干细胞模型中的应用。
10.根据权
...【技术特征摘要】
1.一种肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，所述培养的条件为37℃，5％co2。
3.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(1)所述恒温水浴温度为35～40℃；和/或，所述恒温水浴的时间为10～14h。
4.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(2)所述多孔板为6孔板。
5.根据权利要求1所述的肝癌细胞的干性转化方法，其特征在于，步骤(2)所述风干...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈汉锐，林丽珠，郭苇，刘珊，姚晓辉，李寒寒，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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