【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药学研究，具体为一种基于代谢组学评价芪葛汤协同降血脂作用配伍关系的方法。
技术介绍
1、中医方剂在长期的临床实践中积累了丰富的临床经验。中药复方制剂是由多种药物按君臣佐使配伍规则组成的，采用配伍的方法发挥协同作用。在中医理论中，配伍在最大限度地提高疗效和减少副作用方面起着重要作用，是重要的中医理论之一。中医药的配伍虽然取得了巨大的进步，但由于处方成分复杂，仍难以深入论证配伍规律的科学内涵。因此，迫切需要应用新的研究策略和方法。
2、药效组策略是新的研究中医药配伍策略之一，将某一方剂中所含的中药按其在复方中君臣佐使地位分为不同的药效组别。根据药方君臣佐使原则进行分析，明确药物之间的相互关系和交互作用，可以更好地说明中医药干预措施作用机制和疗效。此外，这种分析策略与临床应用密切相关。同时，它可以减少实验工作量。在药方中寻找各中药配伍关系，研究其体内效应物质是丰富中药理论及开发创新药物的有效途径。
3、代谢组学为研究中药配伍关系提供新的方法。代谢组学不仅在生物标志物的发现方面有实用价值，同时是系统生物学背景下揭示代谢紊乱趋势的有力工具。代谢组学被广泛用于探索潜在的病理生理机制以及评估药物的治疗效果。更重要的是，代谢组学的特征与中医的整体概念非常吻合。代谢组学引起了中医药研究的极大兴趣，包括疾病诊断、病理机制、药效评价等。应用代谢组学探索中药方剂的治疗效果、协同性及其影响相关代谢途径，为中药创新药物的研发与中药配伍研究开辟了新的途径。
4、高脂血症是一种常见的肝脏慢性代谢性疾病，主要表
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于代谢组学评价芪葛汤协同降血脂作用配伍关系的方法，采用药效组策略结合代谢组学技术，分析qg、hg和cp对高脂血症生物标记物的影响，研究qg中各药配伍作用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种基于代谢组学评价芪葛汤协同降血脂作用配伍关系的方法，包括以下步骤：
4、将大鼠分为模型组、空白组、芪葛汤配伍药效组、黄芪-葛根君臣药效组和广陈皮佐药效组，分别进行造模；
5、造模完成后，收集各组大鼠的血清样本和/或肝脏样本，对所述血清样本和/或肝脏样本进行uplc-q-tof/ms检测获得检测数据，分析所述检测数据获得高脂血症生物标记物；
6、将各药效组与模型组进行比较，分析各药效组对高脂血症生物标记物的回调情况，获得具有显著回调作用的差异代谢物，基于所述的差异代谢物分析芪葛汤方中的配伍关系以及代谢通路。
7、优选地，所述模型组适应期间喂食普通饲料，造模期间喂养高脂饲料；所述空白组喂养普通饲料；所述芪葛汤配伍药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予芪葛汤溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；所述黄芪-葛根君臣药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予黄芪-葛根药对溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；广陈皮佐药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予广陈皮溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药。
8、更优选地，所述配伍药效芪葛汤组由黄芪、葛根和广陈皮按3～8:1～3:1的比例组成；所述君臣药效黄芪-葛根组由黄芪和葛根按2～5:1的比例组成；佐药效广陈皮组只含有广陈皮。
9、更优选地，所述芪葛汤配伍药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述黄芪-葛根君臣药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述广陈皮佐药效组的灌胃给药量为2～5g/kg。
10、优选地，所述uplc-q-tof/ms检测条件包括：
11、色谱条件：采用色谱柱thermo c18，规格为2.1mm×100mm，3μm，流动相包括溶剂a和b，a为0.1％甲酸水溶液，b为乙腈；柱温38～42℃，流速设定为0.25～0.35ml/min，进样体积为2.0～3.0μl；所述洗脱条件为0～4min，流动相b体积分数由5％升至15％；4～8min，流动相b体积分数由15％升至35％；8～12min，流动相b体积分数由35％升至70％；12～18min，流动相b体积分数由70％升至100％；18～20min，流动相b体积分数由100％降至5％；
12、质谱条件：esi电喷雾离子源，毛细管电压为+3.0kv/-2.5kv，离子源温度100℃，脱溶剂气温度350℃，锥孔气流量50l·h-1，脱溶剂氮气流量550l·h-1；质量扫描范围：50～1200m/z。
13、优选地，所述数据分析的方法包括如下步骤：利用代谢组学处理软件progenesisqi对uplc-q-tof/ms的检测获得的数据进行处理，获得数据矩阵，将数据矩阵导入simca-p14.1软件，进行无监督主成分分析和监督正交偏最小二乘判别分析，基于opls-da分析的s图和变量重要性投影vip值，选择vip≥1、fc≥1.5的代谢物即为高脂血症模型的生物标记物。
14、更优选地，对于已知的生物标记物，采用unifi数据库，根据化合物的名称，分子式以及结构式信息进行鉴定；对于未知化合物，根据精确的分子量，质谱碎片和色谱保留时间，应用在线生物数据库进行结构表征。
15、优选地，分析代谢通路的方法包括如下步骤：将差异代谢物回调导入metaboanalyst、kegg数据库构建分析影响相关代谢路径。
16、优选地，所述血清样本的采集包括如下步骤：收集大鼠眼眶静脉血，静置25～30min后，离心吸取上清液。
17、优选地，所述肝脏样本的收集包括如下步骤：大鼠采集血液后，脱颈椎处死，迅速完整地摘取肝脏，生理盐水洗净残余血液，称重后于-80℃保存。
18、本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：
19、(1)本专利技术基于药效组策略结合代谢组学研究方法，旨在通过中药概念结合现代研究技术，即药效组分析策略和肝脏代谢组学，研究qg中各药配伍作用。本专利技术首先根据药效组分析策略，将qg分为黄芪-葛根药对君臣药效组(hg)和广陈皮(cp)佐药效组两个团体。其次，分析qg、hg和cp对高脂血症不同代谢产物的影响。然后进一步基于代谢组学结合多元数据分析，从差异代谢物和代谢途径的角度对方中各药作用、地位及相互本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于代谢组学评价芪葛汤协同降血脂作用配伍关系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述模型组适应期间喂食普通饲料，造模期间喂养高脂饲料；所述空白组喂养普通饲料；所述芪葛汤配伍药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予芪葛汤溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；所述黄芪-葛根君臣药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予黄芪-葛根药对溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；广陈皮佐药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予广陈皮溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述配伍药效芪葛汤组由黄芪、葛根和广陈皮按3～8:1～3:1的比例组成；所述君臣药效黄芪-葛根组由黄芪和葛根按2～5:1的比例组成；佐药效广陈皮组只含有广陈皮。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述芪葛汤配伍药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述黄芪-葛根君臣药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述广陈皮佐药效组的灌胃给药量为2～5g/kg。
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6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述数据分析的方法包括如下步骤：利用代谢组学处理软件Progenesis QI对UPLC-Q-TOF/MS的检测获得的数据进行处理，获得数据矩阵，将数据矩阵导入SIMCA-P 14.1软件，进行无监督主成分分析和监督正交偏最小二乘判别分析，基于OPLS-DA分析的S图和变量重要性投影VIP值，选择VIP≥1、FC≥1.5的代谢物即为高脂血症模型的生物标记物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，对于已知的生物标记物，采用UNIFI数据库，根据化合物的名称，分子式以及结构式信息进行鉴定，对于未知化合物，根据精确的分子量，质谱碎片和色谱保留时间，应用在线生物数据库进行结构表征。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分析代谢通路的方法包括如下步骤：将差异代谢物回调导入MetaboAnalyst、KEGG数据库构建分析影响相关代谢路径。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血清样本的采集包括如下步骤：收集大鼠眼眶静脉血，静置25～30min后，离心吸取上清液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝脏样本的收集包括如下步骤：大鼠采集血液后，脱颈椎处死，迅速完整地摘取肝脏，生理盐水洗净残余血液，称重后于-80℃保存。
...【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学评价芪葛汤协同降血脂作用配伍关系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述模型组适应期间喂食普通饲料，造模期间喂养高脂饲料；所述空白组喂养普通饲料；所述芪葛汤配伍药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予芪葛汤溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；所述黄芪-葛根君臣药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予黄芪-葛根药对溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药；广陈皮佐药效组适应期间喂食普通饲料，造模前预先灌胃给予广陈皮溶液，造模期间喂养高脂饲料，同时灌胃给药。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述配伍药效芪葛汤组由黄芪、葛根和广陈皮按3～8:1～3:1的比例组成；所述君臣药效黄芪-葛根组由黄芪和葛根按2～5:1的比例组成；佐药效广陈皮组只含有广陈皮。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述芪葛汤配伍药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述黄芪-葛根君臣药效组的灌胃给药量为2～5g/kg；所述广陈皮佐药效组的灌胃给药量为2～5g/kg。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述uplc-q-tof/ms检测条件包括：
6.根据权利要求1所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯雪红，黄可儿，唐慧，郭凯欣，陈为，于小庆，冯小权，李燕芳，凡思敏，魏浩洋，
申请(专利权)人：广州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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