一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽及其制备方法和用途，苦杏仁肽是苦杏仁蛋白酶解后采用凝胶过滤层析法分离，收集到的92

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及活性苦杏仁肽制备
具体地说是一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]多肽是一类由2
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16个通过肽键连接的氨基酸序列组成，也可以将由2
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5个氨基酸组成的肽链称为短肽，6
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16个氨基酸组成的肽链称为多肽。已有大量研究表明，各种生物体的各种细胞中许多重要的生物活性功能都与多肽有关，比如细胞分化、免疫调节以及激素调节等。另外，多肽还具有抗氧化、抗衰老、抗炎抗癌以及抑菌等多种生理功效，在食品、药品、保健品以及化妆品等多种领域都有广阔的应用前景。正是由于多肽这种既具有调节生理功能的作用又能为机体提供营养的特殊优点，目前国内外对多肽的开发和研究越来越广泛。
[0003]苦杏仁作为一种中药材，具有很高的药用价值。苦杏仁多肽是苦杏仁经干燥、粉碎、脱脂后，经蛋白酶水解得到的多肽试剂，由于杏仁多肽具有提高免疫功能、抗氧化、抗衰老、预防心脑血管疾病、抗炎抗癌以及有助于减轻体重和控制血糖等多种作用，在保健品开发和食品领域中具有广泛的应用。但目前，已有的苦杏仁多肽产品多为经蛋白酶水解后制备而成的成分较复杂的混合多肽，因而导致苦杏仁多肽的生物活性并不具有针对性，比如，目前并没有专门用于抗氧化功能的苦杏仁肽，且现有的苦杏仁肽的抗氧化活性并不高，从而限制了苦杏仁多肽的应用。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽及其制备方法和用途，以将苦杏仁中具有高抗氧化活性的多肽纯化、富集起来，弥补现有苦杏仁混合肽抗氧化活性不高的缺陷，扩大苦杏仁肽的应用范围。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，苦杏仁蛋白酶解后采用凝胶过滤层析法分离，收集到的92
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100min洗脱组分Mx
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1、104
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132min洗脱组分Mx
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2、133
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144min洗脱组分Mx
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3、146
‑
172min洗脱组分Mx
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4、173
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192min洗脱组分Mx
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5或196
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264min洗脱组分Mx
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6即为具有抗氧化活性的苦杏仁肽。
[0007]上述一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，凝胶过滤层析法为：以GE AKTA pure作为纯化系统，采用Sephadex G
‑
15凝胶过滤层析柱进行分离，以超纯水为洗脱液，洗脱液的流速为0.5mL/min。
[0008]上述一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，采用FPLC法对146
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172min洗脱组分Mx
‑
4进一步分离，收集到的21
‑
32min洗脱组分FPLC
‑
2、33
‑
46min洗脱组分FPLC
‑
3或47
‑
70min FPLC
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4即为具有抗氧化活性的苦杏仁肽。
[0009]上述一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，采用FPLC法进一步分离苦杏仁肽，
其检测方法和洗脱梯度如下；
[0010]检测方法：色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC
‑
C18；流动相A为含0.02vt％TFA的水溶液，流动相B为含0.02vt％TFA的乙腈溶液；流速为1.0mL/min；进样量为5μL；柱温为40℃；
[0011]洗脱梯度为：0
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5min，5％B；5
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25min，5
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30％B；25
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35min，30％B；35
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55min，30
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95％B；55
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65min，95％B；65
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66min，95
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5％B；66
‑
72min，5％B。
[0012]上述一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，苦杏仁蛋白的提取包括如下步骤：
[0013]步骤A
‑
1：取脱脂苦杏仁粉于碱溶液中，经超声提取得到苦杏仁提取液；所述碱溶液为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液pH为9.0；
[0014]步骤A
‑
2：将所述苦杏仁提取液离心后取上清液，将所述上清液注入酸溶液中进行酸沉，静置后离心，得到沉淀物；所述酸溶液为盐酸溶液，所述盐酸溶液的pH为5.0；
[0015]步骤A
‑
3：用超纯水洗涤所述沉淀物，并调节所述沉淀物洗涤液的pH至7.0，将洗涤后的所述沉淀物冷冻干燥，得到苦杏仁蛋白冻干粉。
[0016]上述一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，苦杏仁蛋白的酶解包括如下步骤：
[0017]步骤B
‑
1：向苦杏仁蛋白冻干粉中加入磷酸盐缓冲液，震荡溶解，得到苦杏仁蛋白溶液；
[0018]步骤B
‑
2：先将所述苦杏仁蛋白溶液置于恒温震荡水浴锅中水浴，然后加入木瓜蛋白酶进行酶解；
[0019]步骤B
‑
3：将酶解后的混合溶液进行水浴，使木瓜蛋白酶钝化；用NaOH溶液或HCl溶液调节水浴后的混合溶液的pH至7.0；
[0020]步骤B
‑
4：将步骤B
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3中pH为7.0的混合溶液进行低温离心；离心结束后取上清液，即得到苦杏仁蛋白酶解液；采用分子量截留范围为3kDa超滤管对苦杏仁蛋白酶解液进行超滤分离；超滤后得到的所述苦杏仁蛋白酶解物分为分子量小于或等于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物和分子量大于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物；
[0021]凝胶过滤层析法分离的所述苦杏仁蛋白酶解物是所述分子量小于或等于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物。
[0022]一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽的制备方法，包括如下步骤：
[0023]步骤A：苦杏仁蛋白的提取；
[0024]步骤B：苦杏仁蛋白的酶解；
[0025]步骤C：将苦杏仁蛋白酶解液超滤分离并冷冻干燥，得到苦杏仁蛋白酶解物；
[0026]步骤D：苦杏仁蛋白酶解物采用凝胶过滤层析法分离，收集到的92
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100min洗脱组分Mx
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1、104
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132min洗脱组分Mx
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2、133
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144min洗脱组分Mx
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3、146
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172min洗脱组分Mx
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4、173
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192min洗脱组分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，苦杏仁蛋白酶解后采用凝胶过滤层析法分离，收集到的92
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100min洗脱组分Mx
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1、104
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132min洗脱组分Mx
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2、133
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144min洗脱组分Mx
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3、146
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172min洗脱组分Mx
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4、173
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192min洗脱组分Mx
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5或196
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264min洗脱组分Mx
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6即为具有抗氧化活性的苦杏仁肽。2.根据权利要求1所述的一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，凝胶过滤层析法为：以GE AKTA pure作为纯化系统，采用SephadexG
‑
15凝胶过滤层析柱进行分离，以超纯水为洗脱液，洗脱液的流速为0.5mL/min。3.根据权利要求1所述的一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，采用FPLC法对146
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172min洗脱组分Mx
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4进一步分离，收集到的21
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32min洗脱组分FPLC
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2、33
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46min洗脱组分FPLC
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3或47
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70min FPLC
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4即为具有抗氧化活性的苦杏仁肽。4.根据权利要求3所述的一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，采用FPLC法进一步分离苦杏仁肽，其检测方法和洗脱梯度如下；检测方法：色谱柱为Agilent Poroshell 120EC
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C18；流动相A为含0.02vt％TFA的水溶液，流动相B为含0.02vt％TFA的乙腈溶液；流速为1.0mL/min；进样量为5μL；柱温为40℃；洗脱梯度为：0
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5min，5％B；5
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25min，5
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30％B；25
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35min，30％B；35
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55min，30
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95％B；55
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65min，95％B；65
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66min，95
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5％B；66
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72min，5％B。5.根据权利要求1所述的一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，苦杏仁蛋白的提取包括如下步骤：步骤A
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1：取脱脂苦杏仁粉于碱溶液中，经超声提取得到苦杏仁提取液；所述碱溶液为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液pH为9.0；步骤A
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2：将所述苦杏仁提取液离心后取上清液，将所述上清液注入酸溶液中进行酸沉，静置后离心，得到沉淀物；所述酸溶液为盐酸溶液，所述盐酸溶液的pH为5.0；步骤A
‑
3：用超纯水洗涤所述沉淀物，并调节所述沉淀物洗涤液的pH至7.0，将洗涤后的所述沉淀物冷冻干燥，得到苦杏仁蛋白冻干粉。6.根据权利要求1所述的一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽，其特征在于，苦杏仁蛋白的酶解包括如下步骤：步骤B
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1：向苦杏仁蛋白冻干粉中加入磷酸盐缓冲液，震荡溶解，得到苦杏仁蛋白溶液；步骤B
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2：先将所述苦杏仁蛋白溶液置于恒温震荡水浴锅中水浴，然后加入木瓜蛋白酶进行酶解；步骤B
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3：将酶解后的混合溶液进行水浴，使木瓜蛋白酶钝化；用NaOH溶液或HCl溶液调节水浴后的混合溶液的pH至7.0；步骤B
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4：将步骤B
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3中pH为7.0的混合溶液进行低温离心；离心结束后取上清液，即得到苦杏仁蛋白酶解液；采用分子量截留范围为3kDa超滤管对苦杏仁蛋白酶解液进行超滤分离；超滤后得到的所述苦杏仁蛋白酶解物分为分子量小于或等于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物和分子量大于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物；凝胶过滤层析法分离的所述苦杏仁蛋白酶解物是所述分子量小于或等于3kDa的苦杏仁蛋白酶解物。7.一种具有抗氧化及免疫活性的苦杏仁肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤A：苦杏仁蛋白的提取；
步骤B：苦杏仁蛋白的酶解；步骤C：将苦杏仁蛋白酶解液超滤分离并冷冻干燥，得到苦杏仁蛋白酶解物；步骤D：苦杏仁蛋白酶解物采用凝胶过滤层析法分离，收集到的92
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100min洗脱组分Mx
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132min洗脱组分Mx
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192min洗脱组分Mx
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5或196
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264min洗脱组分Mx
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6即为具有抗氧化活性的苦杏仁肽。8.根据权利要求7所...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌云塔娜，朱绪春，刘慧敏，黄梦真，李铁柱，尹明宇，吕祎馨，
申请(专利权)人：国家林业和草原局泡桐研究开发中心，
类型：发明
国别省市：