制备弹性蛋白肽的方法、由其制备的弹性蛋白肽及其用途技术

本发明专利技术提供一种制备能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽的方法、由其制备的弹性蛋白肽及其用途。所述方法包括如下步骤：1)取动物的韧带或动脉管为原料，在预处理后进行匀浆化得到总蛋白粗提物；2)将步骤1)得到的总蛋白粗提物先后以木瓜蛋白酶和胶原酶进行酶解，经离心后取沉淀，得到弹性蛋白粗提物；3)将步骤2)得到的弹性蛋白粗提物以弹性蛋白酶进行酶解，灭酶后进行离心并取上清液，得到弹性蛋白肽粗酶解物；4)将步骤3)得到的弹性蛋白肽粗酶解物进行过滤得到弹性蛋白肽，然后将该得到的弹性蛋白肽依次经离子交换树脂层析和凝胶柱层析进行纯化，得到能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽。得到能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽。

【技术实现步骤摘要】
制备弹性蛋白肽的方法、由其制备的弹性蛋白肽及其用途


[0001]本专利技术涉及一种制备能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽的方法、由其制备的弹性蛋白肽及其用途。

技术介绍

[0002]心脑血管疾病以其高发病率、高致残率、高死亡率和高复发率，极大地危害着人类的健康。随着世界人口的老龄化，每年因心脑血管病死亡的人数占居首位。因此，对脑血管疾病的研究越来越受重视，而其中的主要环节之一就是研究心脑血管在生理或/和病理条件下的结构、功能特征及其增龄变化。研究发现，在心脑动脉瘤、心脑动脉粥样硬化等多种心脑血管疾病中都伴有弹性蛋白的变化，提示弹性蛋白在心脑血管疾病过程中可能具有重要作用。
[0003]弹性蛋白(Elastin)是人体组织器官(如动脉、皮肤等)中重要的结构蛋白，是构成动脉壁的主要成分之一，以它为主(占90％)构成的弹性膜或弹性纤维，使动脉具有伸缩性，在正常压力下支撑血管壁拮抗管壁塌陷，抵制因平滑肌收缩所致的血管闭合倾向。弹性蛋白还可以缓冲血流对管壁的冲击力，在弹性动脉中将血流转化为常流；完整的内弹性膜是防止能导致动脉粥样硬化的大分子物质(如低密度脂蛋白)通过的屏障。此外弹性蛋白还具有调控平滑肌细胞增生和稳定动脉构筑的功能。随着年龄增长，人体中的弹性蛋白降解，造成血管壁弹性降低。另一方面，弹性蛋白是一种既耐酸又耐碱的细胞外高分子基质蛋白，富含甘氨酸(33％)和脯氨酸(1％～13％)，极难溶于水，不易为人体吸收利用。
[0004]文献“The role of elastin
‑
derived peptides in human physiology and diseases,Aur
é
lie Le Page等,Matrix Biology，2019年11月，第84卷，第81～96页”报道，由弹性蛋白降解制得的弹性蛋白肽能够引发与全长弹性蛋白大致相同的细胞应答；该制得的弹性蛋白肽在组成上并非完全相同，但是已确定大部分为X
‑
Gly
‑
X
‑
X
‑
Pro
‑
Gly生物活性序列。
[0005]相应地，为解决弹性蛋白难以吸收的问题，现有技术中已有制备成小分子弹性蛋白肽的教导。
[0006]例如，CN106381323A中公开了一种弹性蛋白肽及其制备方法、应用，所述方法以牛颈韧带预处理后，与水混合、调节pH值，然后与蛋白酶混合后酶解，灭酶、离心、过滤收集滤液；然后将收集的滤液浓缩、干燥而制得弹性蛋白肽。
[0007]CN109680031A公开了一种弹性蛋白肽的提取方法，所述方法以鱼软骨为原料，经95％乙醇溶液和蒸馏水预处理后在缓冲液中进行超声波处理，然后加入弹性蛋白酶进行酶解，灭酶后将酶解液抽滤，收集滤液进行几次超滤，将所得超滤液进行透析除盐、旋转蒸发和冷冻干燥而得弹性蛋白肽。
[0008]CN108586603A公开了一种制备含多种特有氨基酸的弹性蛋白肽的方法，所述方法以牛筋为原料利用碱性蛋白酶进行水解，然后通过高温灭酶、超滤浓缩、离子交换树脂吸附、超声波辅助亲和反胶束提纯，得到含多种特有氨基酸的弹性蛋白肽。
[0009]但是，现有技术中所制得的弹性蛋白肽均为用于改善皮肤弹性的目的，并不能起到改善血管壁弹性的作用。截至目前为止，尚未见改善血管壁弹性的弹性蛋白肽及其制备方法的相关报告。

技术实现思路

[0010]本专利技术是为解决上述现有技术的问题而作出的。本专利技术的一个目的是提供一种制备能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽的方法、以及由其制备的弹性蛋白肽及其用途。根据本专利技术的方法制备的弹性蛋白肽能够有效改善血管壁弹性、且还能有效降低血脂水平。
[0011]本专利技术的一个实施方式提供一种制备所述能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽的方法。所述方法包括如下步骤：
[0012]1)取动物的韧带或动脉管为原料，在预处理后进行匀浆化得到总蛋白粗提物；
[0013]2)将步骤1)得到的总蛋白粗提物先后以木瓜蛋白酶和胶原酶进行酶解，经离心后取沉淀，得到弹性蛋白粗提物；
[0014]3)将步骤2)得到的弹性蛋白粗提物以弹性蛋白酶进行酶解，灭酶后进行离心并取上清液，得到弹性蛋白肽粗酶解物；
[0015]4)将步骤3)得到的弹性蛋白肽粗酶解物进行过滤得到弹性蛋白肽，然后将该得到的弹性蛋白肽依次经离子交换树脂层析和凝胶柱层析进行纯化，得到能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽。
[0016]在一个优选实施方式中，在所述步骤1)中，所述动物的韧带或动脉管来自于牛肩韧带或牛主动脉管。
[0017]在一个优选实施方式中，在所述步骤1)中，所述预处理包括以0.1～1.0质量％、优选0.5质量％的氢氧化钠水溶液将所述动物的韧带或动脉管浸泡2～4小时。
[0018]在一个优选实施方式中，在所述步骤1)中，在以所述氢氧化钠水溶液进行浸泡结束之后，以去离子水进行清洗，然后加入适量软化水，并在研磨机中匀浆化至糊状。
[0019]在一个优选实施方式中，在所述步骤2)中，所述木瓜蛋白酶的加入量为所述总蛋白粗提物的2～3重量％，所用木瓜蛋白酶的酶活力为2
×
105～6
×
105U/g、优选为4
×
105U/g。
[0020]在一个优选实施方式中，在所述步骤2)中，所述木瓜蛋白酶的酶解在50℃和pH 6～8的条件下进行3～5小时。
[0021]在一个优选实施方式中，在所述步骤2)中，所述胶原酶的加入量为所述总蛋白粗提物的0.1～0.3重量％，所用胶原酶的酶活力为100～300cdu/mg、优选为150cdu/mg。
[0022]在一个优选实施方式中，在所述步骤2)中，所述胶原酶的酶解在35℃、pH 7～7.8的条件下进行2～4小时。
[0023]在一个优选实施方式中，在所述步骤3)中，所述弹性蛋白酶的加入量为所述弹性蛋白粗提物的0.1～0.3重量
‰
，所用弹性蛋白酶的酶活力为10～50u/mg、优选为30u/mg。
[0024]在一个优选实施方式中，在所述步骤3)中，所述弹性蛋白酶的酶解在35℃和pH 7～7.8的条件下进行5～8小时。
[0025]在一个优选实施方式中，在所述步骤3)中，所述灭酶是在90℃进行10分钟加热而进行的。
[0026]在一个优选实施方式中，在所述步骤4)中，所述过滤是如下进行的：先采用2KD超滤膜进行过滤，再通过纳滤去除无机盐和水溶性游离氨基酸，且在该过滤之后进行喷物干燥而得到弹性蛋白肽。
[0027]在一个优选实施方式中，在所述步骤4)中，所述离子交换树脂层析是如下进行的：将所述弹性蛋白肽溶于双蒸水中配成浓度为20～40mg/mL的溶液，以20～30m/小时的流速通过弱酸性阳离子交换树脂从而去除带负电荷的肽和离子，再以15
‑
20m/小时的流速通过弱碱性阴离子交换树脂从而去除带正电荷的肽和离子。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)取动物的韧带或动脉管为原料，在预处理后进行匀浆化得到总蛋白粗提物；2)将步骤1)得到的总蛋白粗提物先后以木瓜蛋白酶和胶原酶进行酶解，经离心后取沉淀，得到弹性蛋白粗提物；3)将步骤2)得到的弹性蛋白粗提物以弹性蛋白酶进行酶解，灭酶后进行离心并取上清液，得到弹性蛋白肽粗酶解物；4)将步骤3)得到的弹性蛋白肽粗酶解物进行过滤得到弹性蛋白肽，然后将该得到的弹性蛋白肽依次经离子交换树脂层析和凝胶柱层析进行纯化，得到能够改善血管壁弹性的弹性蛋白肽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1)中，所述动物的韧带或动脉管来自于牛肩韧带或牛主动脉管。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述步骤1)中，所述预处理包括以0.1～1.0质量％、优选0.5质量％的氢氧化钠水溶液将所述动物的韧带或动脉管浸泡2～4小时。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤1)中，在以所述氢氧化钠水溶液进行浸泡结束之后，以去离子水进行清洗，然后加入适量软化水，并在研磨机中匀浆化至糊状。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述木瓜蛋白酶的加入量为所述总蛋白粗提物的2～3重量％，所用木瓜蛋白酶的酶活力为2
×
105～6
×
105U/g、优选为4
×
105U/g。6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述木瓜蛋白酶的酶解在50℃和pH 6～8的条件下进行3～5小时。7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述胶原酶的加入量为所述总蛋白粗提物的0.1～0.3重量％，所用胶原酶的酶活力为100～300cdu/mg、优选为150cdu/mg。8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述胶原酶的酶解在35℃和pH 7～7.8的条件下进行2～4小时。9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海燕，刘爱青，闫征，刘利格，
申请(专利权)人：安徽盛美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：