一种双色微球的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种双色微球的制备方法，步骤为：S1荧光染料的制备：按比例分别配制DBM与乙醇混合溶液、Phen与乙醇混合溶液和稀土离子与乙醇混合溶液，再通过DBM与乙醇混合溶液和Phen与乙醇混合溶液与稀土离子与乙醇混合溶液进行反应，抽滤干燥得到荧光染料粉末；S2聚苯乙烯微球的制备：通过无皂乳液聚合法制备聚苯乙烯微球得聚苯乙烯微球液；S3聚苯乙烯彩色微球的制备：将彩色染料与聚苯乙烯微球液混合并进行乳化，再离心后去上层清液得聚苯乙烯彩色微球；S4聚苯乙烯PS双色微球的制备：将步骤S1制得的荧光染料粉末与步骤S3中制得聚苯乙烯彩色微球混合并进行乳化，再离心去上层清液后得聚苯乙烯PS双色微球。后得聚苯乙烯PS双色微球。后得聚苯乙烯PS双色微球。

【技术实现步骤摘要】
一种双色微球的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及荧光免疫检测
，涉及一种双色微球的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]聚合物微球因其形态结构稳定、粒径分布窄、比表面积大、表面吸附性强等特点在生命科学、生物医学等领域得到广泛的应用，如细胞表面抗原检测，血流分析，吞噬功能检测，凝集试验为代表的诊断检测，药物筛选等。
[0003]聚合物微球本身为白色，对比度不强，不易被检测，但对微球进行染料和荧光标记，成为带有色彩和荧光信号的微球时，易于检测。尤其是对基于聚苯乙烯微球的胶乳凝集试验，有色微球更易于观察，从而大大提高检测的灵敏度。
[0004]中国专利文献(申请号：202110934220.1)公开了一种单分散聚合物彩色微球及其制备方法和用途，制备方法包括下列步骤：(1)采用无皂乳液聚合法制备羧基聚苯乙烯微球；(2)提供溶有染料的溶胀介质体系；(3)通过种子溶胀法将染料渗透入羧基微球内部，得到染料包裹于微球内部的彩色羧基聚苯乙烯微球。本专利技术采用的是一步溶胀法获得包埋有彩色染料的功能微球，所用于溶胀的种子微球来源于无皂乳液聚合方式得到的羧基乳胶微球，操作简单，所得微球尺寸均一可控，表面规整；可用于免疫层析检测试纸条应用。但该方法制备的染料彩色微球。
[0005]中国专利文献(申请号：202010433079.2)公开了一种羧基化聚苯乙烯荧光微球的制备方法，具体包括如下步骤：制备荧光物质
‑
铕配合物：将溶有EuCl3·
6H2O的乙醇溶液加入到溶有TPPO的乙醇溶液中进行配位反应，反应后，将去质子化的BTFA乙醇溶液加入到Eu(TPPO)4的乙醇溶液中，于高温下进行配位反应，将反应后的产物进行抽滤、挥发结晶处理，得到的晶体为铕配合物Eu(BTFA)(TPPO)3；利用制得的铕配合物Eu(BTFA)(TPPO)3制备聚苯乙烯荧光微球，并对制得的聚苯乙烯荧光微球表面进行羧基化处理，得到表面含有羧基单体的聚苯乙烯荧光微球。但该方法制备的是单一荧光微球。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种双色微球的制备方法，通过荧光染料和彩色染料同时染色微球，在免疫层析检测分析时既可以用眼睛定性看，又可以用仪器检测荧光信号，检测更灵活，适用范围更广，大大提高检测的灵敏度。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是，该双色微球的制备方法，双色微球的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1荧光染料的制备：按比例分别配制DBM(二苯甲酰甲烷)与乙醇混合溶液和Phen(邻菲罗啉)与乙醇混合溶液，以及稀土离子与乙醇混合溶液，再通过DBM与乙醇混合溶液和Phen与乙醇混合溶液与稀土离子与乙醇混合溶液进行反应，抽滤干燥得到荧光染料粉末；
[0009]S2聚苯乙烯微球的制备：通过无皂乳液聚合法制备聚苯乙烯微球，获得白色乳液即为聚苯乙烯微球液(PSt)；
[0010]S3聚苯乙烯彩色微球的制备：通过彩色染料与所述步骤S2获得的聚苯乙烯微球液混合并进行乳化，再离心去上层清液后获得聚苯乙烯彩色微球；
[0011]S4聚苯乙烯PS双色微球的制备：将所述步骤S1制得的荧光染料粉末与所述步骤S3中制得聚苯乙烯彩色微球混合并进行乳化，再离心去上层清液后获得聚苯乙烯PS双色微球。
[0012]作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S1的具体步骤包括：
[0013]S11：称取原材料，包括Eu
3+
盐、DBM、Phen，待用；
[0014]S12：将DBM和Phen分别溶于在无水乙醇中，获得DBM与乙醇混合溶液和Phen与乙醇混合溶液，将Eu
3+
盐溶于无水乙醇中获得稀土离子的无水乙醇混合溶液；
[0015]S13：将DBM与乙醇混合溶液加入稀土离子的无水乙醇溶液中，置于三口烧瓶中，在60～70℃加热并回流搅拌反应后，用恒压滴液漏斗将Phen与乙醇混合溶液逐滴加入到三口烧瓶中，继续反应，并调节反应液的pH值，再继续回流搅拌反应直至反应结束；
[0016]S14：将反应液转移到干净的敞口容器里，室温下静置后用冰水浴冷却，再进行抽滤、干燥，获得Eu(DBM)3Phen荧光染料粉末。
[0017]作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S2具体步骤包括：
[0018]S21：在三口瓶中加入200mL水和10mL精制苯乙烯，通入氮气并水浴加热搅拌；
[0019]S22：水浴升温至70～80℃时，加入引发剂过硫酸铵(APS)，继续搅拌反应20h，得到均一的白色乳液即为聚苯乙烯微球液(PSt)。过硫酸铵的配制为100mg过硫酸铵溶于5mL纯水中。
[0020]作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S3具体步骤包括：
[0021]S31：取步骤S2中获得的聚苯乙烯微球液分散于溶胀介质中；将油溶黄R染料溶于溶胀介质中，获得染料溶胀介质混合溶液；
[0022]S32：混合步骤S31中的微球溶液和染料溶胀介质混合溶液后进行乳化，即室温下振荡反应1～3h；
[0023]S33：通过旋转蒸发仪旋转蒸发去除溶胀介质，再进行超声处理，后再将剩余的液体逐步稀释后离心，观察离心后的沉淀是否完全以及上清的荧光强度；弃去上清液，下层固体沉淀物用纯水清洗多次，去除溶胀介质溶液，再用纯水洗涤数次直至离心后上清液中无颜色残留，去除未进入到微球内部的油溶黄R染料，所得沉淀最后溶于500μL纯水中，即得到PS彩色微球液。其中溶胀介质使用的是50％丙酮水溶液。
[0024]作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S4具体步骤包括：
[0025]S41：取步骤S3中获得的PS彩色微球液(即为5mg～10mg)分散于500μL溶胀介质中；将Eu(DBM)3Phen荧光染料粉末溶于溶胀介质中，获得荧光染料溶胀介质混合溶液；
[0026]S42：混合步骤S541中的微球溶液和荧光染料溶胀介质混合溶液后进行乳化，即室温下振荡反应，
[0027]S43：通过旋转蒸发仪旋转蒸发去除溶胀介质，再进行超声处理，后再剩余的液体逐步稀释后离心，观察离心后的沉淀是否完全以及上清的荧光强度；弃去上清液，下层固体沉淀物用纯水清洗多次，去除溶胀介质溶液，再用纯水洗涤数次直至离心后上清液中无荧光，去除未进入到微球内部的Eu(DBM)3Phen，所得沉淀最后溶于500μL纯水中，得到PS双色微球液。其中溶胀介质使用的是50％丙酮水溶液。
[0028]作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S11中按物质的量之比为：Eu
3+
:DBM:Phen＝1:3:1称取原材料；所述步骤S13中首先在60～70℃加热并回流搅拌反应0.5～1.5h后，再用恒压滴液漏斗将Phen与乙醇混合溶液逐滴加入到三口烧瓶中，继续反应20～40min后，并调节反应液的pH值6～7，再继续加热并回流搅拌反应3～5h至反应结束；所述步骤S14中将反应液转移到干净的敞口容器里，室温下静置24h后用冰水浴冷却20～40min，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双色微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1荧光染料的制备：按比例分别配制DBM与乙醇混合溶液、Phen与乙醇混合溶液和稀土离子与乙醇混合溶液，再通过DBM与乙醇混合溶液和Phen与乙醇混合溶液与稀土离子与乙醇混合溶液进行反应，抽滤干燥得到荧光染料粉末；S2聚苯乙烯微球的制备：通过无皂乳液聚合法制备聚苯乙烯微球，获得白色乳液即为聚苯乙烯微球液；S3聚苯乙烯彩色微球的制备：通过彩色染料与所述步骤S2获得的聚苯乙烯微球液混合并进行乳化，再离心去上层清液后获得聚苯乙烯彩色微球；S4聚苯乙烯PS双色微球的制备：将所述步骤S1制得的荧光染料粉末与所述步骤S3中制得聚苯乙烯彩色微球混合并进行乳化，再离心去上层清液后获得聚苯乙烯PS双色微球。2.根据权利要求1所述的双色微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤包括：S11：称取原材料，包括Eu
3+
盐、DBM、Phen，待用；S12：将DBM和Phen分别溶于在无水乙醇中，获得DBM与乙醇混合溶液和Phen与乙醇混合溶液；将Eu
3+
盐溶于无水乙醇中获得稀土离子的无水乙醇混合溶液；S13：将DBM与乙醇混合溶液加入稀土离子的无水乙醇溶液中，置于三口烧瓶中，在60～70℃加热并回流搅拌反应后，用恒压滴液漏斗将Phen与乙醇混合溶液逐滴加入到三口烧瓶中，继续反应，并调节反应液的pH值，再继续回流搅拌反应直至反应结束；S14：将反应液转移到干净的敞口容器里，室温下静置后用冰水浴冷却，再进行抽滤、干燥，获得Eu(DBM)3Phen荧光染料粉末。3.根据权利要求2所述的双色微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体步骤包括：S21：在三口瓶中加入200mL水和10mL精制苯乙烯，通入氮气并水浴加热搅拌；S22：水浴升温至70～80℃时，加入引发剂过硫酸铵，继续搅拌反应，得到均一的白色乳液即为聚苯乙烯微球液。4.根据权利要求3所述的双色微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S3具体步骤包括：S31：取步骤S2中获得的聚苯乙烯微球液分散于溶胀介质中；将油溶黄R染料溶于溶胀介质中，获得染料溶胀介质混合溶液；S32：混合步骤S31中的微球溶液和染料溶胀介质混合溶液后进行乳化，即室温下振荡反应1～3h；S33：旋转蒸发去除溶胀介质，再进行超声处理，后再将剩余的液体逐步稀释后离心，弃去上清液，下层固体沉淀物用纯水清洗多次，所得沉淀最后溶于纯水，即得到PS彩色微球液。5.根据权利要求4所述的双色微球的制备方法，其特征在于，所述步骤S4具体步骤包括：S4...

【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，杰弗瑞，
申请(专利权)人：南京岚煜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：