环状RNAcircTFDP2及其siRNA在诊断、治疗前列腺癌中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种环状RNA circTFDP2及其siRNA在诊断、治疗前列腺癌中的应用，通过荧光定量PCR法发现circTFDP2在前列腺癌组织中表达显著升高，且表达水平与Gleason评分正相关，且circTFDP2在前列腺癌患者前列腺按摩后尿液中检测到其表达水平与前列腺癌组织表达水平正相关；circTFDP2在前列腺癌细胞中的表达水平显著高于前列腺正常上皮细胞，circTFDP2过表达后能够显著促进前列腺癌的增殖、迁移、侵袭，以及体内异种移植小鼠肿瘤模型的肿瘤生长及肿瘤远端转移；采用siRNA靶向敲低circTFDP2会显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤生长及远端转移。circTFDP2在前列腺癌诊断和/或预后评估以及治疗方面具有重要的作用，可以作为前列腺癌诊断生物标志物及治疗靶点。靶点。靶点。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA circTFDP2及其siRNA在诊断、治疗前列腺癌中的应用


[0001]本专利技术属于肿瘤诊断及生物医药工程领域，涉及一种内源性环状RNA及其反义核酸的新用途，具体涉及环状RNA circTFDP2及其反义核酸在诊断和治疗前列腺癌中的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌是男性中最常见的实体器官恶性肿瘤。近年来，中国前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势，已成为影响中国中老年男性健康的重要疾病。前列腺血清抗原(PSA)的测定是目前早期筛查前列腺癌的最主要方法。然而，PSA筛查往往导致患者过度诊断和过度治疗。前列腺癌患者的临床治疗需要考虑多种因素，包括分期、组织病理学、分子特征、患者背景。对于早期局限性前列腺癌行前列腺癌根治术达到良好的治疗效果，甚至得以治愈。但中国近30％的前列腺癌患者初诊时已发生转移，内分泌治疗转移性前列腺癌能延长患者生存期，改善生活质量，但最终前列腺癌会进展为激素抵抗性前列腺癌 (CRPC)。CRPC最主要的治疗药物包括多西他赛化疗以及恩杂鲁胺、阿比特龙等新型内分泌治疗，但临床治疗费用高昂且患者受益有限。因此迫切需要发现新的前列腺癌生物标志物用于早期检测以及前列腺癌的靶向治疗，降低前列腺癌患者的死亡率，提高患者生活质量。
[0003]环状RNA是一类新的非编码RNA，由前体RNA的反向剪接形成。大量环状RNA已被发现并在各种生理和病理过程中发挥重要作用。以往研究表明环状 RNA通过吸附microRNAs(miRNAs)或与蛋白结合发挥其功能。最近的研究表明，环状RNA可以通过帽子结构非依赖性翻译或m6A依赖性翻译编码独特的多肽。在肿瘤的发生发展中，circRNA被发现参与干细胞多能性维持、细胞分化、细胞周期和凋亡、血管生成等过程影响肿瘤的进展及转移。
[0004]外泌体是由脂质双层膜包围的纳米级(30
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150nm)细胞外囊泡。外泌体是由内泌体途径产生的，可以被大多数类型的细胞释放到体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质以及功能性的DNA、mRNA、miRNA和环状RNA等，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生等生理过程，与包括肿瘤在内多种疾病的发生与进程密切相关。外泌体分布在外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中，外泌体的各个组分既可以成为疾病诊断的标志物，又可作为疾病治疗的特异性靶点。
[0005]本专利技术通过RT
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PCR技术在50对配对的前列腺癌及癌旁组织中进行筛选，发现环状RNA circTFDP2(circbase ID:hsa_circ_0008304)在前列腺癌组织显著高表达，且其表达水平与前列腺癌Gleason评分正相关。首次揭示了circTFDP2 与前列腺癌的关系。且本专利技术通过功能实验，证实了过表达circTFDP2促进前列腺癌增殖转移，干扰circTFDP2表达可以抑制前列腺癌增殖转移。而且circTFDP2 存在于前列腺癌细胞培养液及前列腺癌患者前列腺按摩后尿液外泌体中。本专利技术提供了一种前列腺癌的诊治靶点，具有重要的临床应用价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的是提供一种circTFDP2及其siRNA在前列腺癌诊治中的应用，确定了circTFDP2是前列腺癌患者癌组织及前列腺按摩后尿液外泌体中表达上调的circRNA，并将circTFDP2及其siRNA应用到前列腺癌的诊断和治疗中。
[0007]本专利技术的另一个目的在于提供一种用于诊断和/或评估前列腺癌疾病的试剂盒。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种治疗前列腺癌的药物。
[0009]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0010]circTFDP2作为诊断标志物在制备用于诊断和/或评估前列腺癌试剂中的应用，所述circTFDP2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0011]可通过检测circTFDP2在前列腺或前列腺按摩后尿液外泌体中的表达水平以诊断和/或评估前列腺癌。
[0012]一种用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒，含有特异性扩增circTFDP2的引物。所述试剂盒可采用荧光定量PCR试剂盒；进一步的，所述特异性扩展 circTFDP2的引物为：上游引物序列为SEQ ID No.2，下游引物序列为SEQ IDNo.3。
[0013]circTFDP2作为治疗靶点在制备用于治疗前列腺癌药物中的应用。
[0014]circTFDP2 siRNA在制备用于治疗前列腺癌药物中的应用，所述药物以 circTFDP2为治疗靶点，所述circTFDP2 siRNA包括如SEQ ID No.4、如SEQ IDNo.5所示核苷酸序列中的至少一种。
[0015]一种前列腺癌的治疗药物，所述药物含有具有如SEQ ID No.4、如SEQ IDNo.5所示序列中至少一种的核酸、生物活性功能片段或变体。进一步的，所述药物包括药学上可接受的载体或辅料，包括壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒等。
[0016]有益效果：
[0017]本专利技术首次发现circTFDP2在前列腺癌诊断和/或预后评估以及治疗方面具有重要的作用，可以作为前列腺癌诊断生物标志物及治疗靶点。
[0018]本专利技术通过荧光定量PCR法发现circTFDP2在前列腺癌组织中表达显著升高，且表达水平与Gleason评分正相关。并且circTFDP2在前列腺癌患者前列腺按摩后尿液中检测到其表达水平与前列腺癌组织表达水平正相关。因此通过检测前列腺按摩后尿液中circTFDP2表达水平可以实现前列腺癌无创、快速诊断。
[0019]本专利技术发现circTFDP2在前列腺癌细胞中的表达水平显著高于前列腺正常上皮细胞，circTFDP2过表达后能够显著促进前列腺癌的增殖、迁移、侵袭，以及体内异种移植小鼠肿瘤模型的肿瘤生长及肿瘤远端转移；反之，敲低circTFDP2 会显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤生长及远端转移。上述发现表明circTFDP2对肿瘤生长和转移的重要性，并提示采用siRNA靶向敲低 circTFDP2进行前列腺癌治疗的可行性。
附图说明
[0020]附图1为circTFDP2在50对前列腺癌组织和癌旁组织中的表达量比较；
[0021]附图2为circTFDP2在不同Gleason评分前列腺癌组织的相对表达量比较；
[0022]附图3为比较10例前列腺癌组织与对应的前列腺癌患者前列腺按摩后尿液外泌体中circTFDP2表达的相关性；
[0023]附图4为circTFDP2在正常前列腺上皮细胞与前列腺癌细胞系中的相对表达量；
[0024]附图5为前列腺癌细胞中转染si
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circTFDP2以及circTFDP2过表达质粒后 circTFDP2表达量。
[0025]附图6为干扰和过表达circTFDP2对前列腺癌细胞增殖能力的影响结果图；
[0026]附图7为干扰和过表达circTFDP2对前列腺癌皮下移本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.circTFDP2作为诊断标志物在制备用于诊断和/或评估前列腺癌试剂中的应用，所述circTFDP2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过检测circTFDP2在前列腺或前列腺按摩后尿液外泌体中的表达水平以诊断和/或评估前列腺癌。3.用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒，其特征在于，含有特异性扩增circTFDP2的引物。4.根据权利要求3所述的用于诊断和/或评估前列腺癌的试剂盒，其特征在于，所述特异性扩展circTFDP2的引物为：上游引物序列为SEQ ID No.2，下游引物序列为SEQ ID No.3。5.根据权利要求3所述的用于诊断和/或评估前列...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏李群，李恭会，丁理峰，薛丁玮，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：