检测circRFWD3表达量的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术公开了检测circRFWD3表达量的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途，属于疾病检测试剂领域。实验表明，circRFWD3在头颈鳞癌转移转移患者的肿瘤组织样本中表达量显著高于头颈鳞癌非转移转移患者的肿瘤组织样本。本发明专利技术能对头颈鳞癌的转移风险进行快速的辅助预测，进而有利于及时展开有针对性的治疗措施。有针对性的治疗措施。有针对性的治疗措施。

【技术实现步骤摘要】
检测circRFWD3表达量的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途


[0001]本专利技术属于疾病检测试剂领域。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤作为全球性的公共卫生问题，是影响人类预期寿命的主要因素之一。进入21世纪以来，恶性肿瘤的发病率和死亡率迅速增长，目前已成为全球致死率首位的非传染性疾病。头颈部鳞状细胞癌是人类常见的恶性肿瘤之一。数十年来，头颈部鳞癌的治疗手段不断进步，但患者的生存率并没有明显提高。导致患者预后不良的原因主要是由于原发肿瘤的复发与转移。研究显示，单一器官转移的头颈鳞癌患者其五年生存率约为35％。因此，探究头颈部鳞状细胞癌的转移机制，发现头颈部鳞癌转移的分子标记物，进而预防和早期阻断头颈部鳞状细胞癌的发展对于改善患者预后，提高其生活质量具有重要意义。遗憾的是，目前尚无有效预测及早期诊断头颈鳞癌转移的分子标记物。
[0003]在真核细胞中，mRNA前体可以通过反向拼接，将3
’
段与5
’
端相结合，进而产生包含外显子或内含子序列的环状RNA(circRNA)。circRNA的表达具有组织特异性和细胞特异性。因为circRNA缺乏5
’
端帽状结构及3
’
端多聚腺苷酸尾部结构，目前生物学界普遍认为相比于普通线状RNA，该RNA的稳定性更佳。目前已有大量文献报道在不同种类的人类恶性肿瘤中，不同的circRNA都发挥了重要作用。
[0004]RFWD3(ring finger and WD repeat domain 3)是一种主要表达于骨髓、睾丸的基因，其表达产物能稳定p53对DNA损伤的反应，参与复制检查点，在多发性骨髓瘤、睾丸生殖细胞瘤和肺癌的发生中起重要作用。目前尚未见RFWD3的circRNA在恶性肿瘤诊断及转移预测中的作用的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的问题是：提供检测RFWD3的circRNA(circRFWD3，即Circ
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101877，序列如SEQ ID NO.5所示)的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]检测circRFWD3表达量的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途。
[0008]进一步地，所述检测circRFWD3表达量的试剂是qPCR试剂。
[0009]进一步地，所述qPCR试剂包括序列如SEQ ID NO.1～2所述的引物。
[0010]进一步地，所述qPCR试剂还包括扩增GAPDH的引物，优选地，所述扩增GAPDH的引物的序列如SEQ ID NO.3～4所述。
[0011]进一步地，所述检测circRFWD3表达量的试剂为测序试剂、原位杂交检测试剂或核酸印迹检测试剂。
[0012]一种预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒，其特征在于：包括检测circRFWD3表达量的试剂。
[0013]进一步地，所述检测circRFWD3表达量的试剂是qPCR试剂。
[0014]进一步地，所述qPCR试剂包括序列如SEQ ID NO.1～2所述的引物。
[0015]进一步地，所述qPCR试剂还包括扩增GAPDH的引物，优选地，所述扩增GAPDH的引物的序列如SEQ ID NO.3～4所述。
[0016]进一步地，所述检测circRFWD3表达量的试剂为测序试剂、原位杂交检测试剂或核酸印迹检测试剂。
[0017]本专利技术具有如下有益效果：
[0018]实验临床检测显示，头颈鳞癌组织中circRFWD3表达量越高，其转移风险就越高。将检测circRFWD3表达量的试剂用于制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒，具有良好的应用前景。
[0019]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。本专利技术的核心精神在于借助颈鳞癌组织中circRFWD3表达量与转移风险的关系，制备头颈鳞癌转移风险试剂盒；而具体检测circRFWD3表达量的方法并不是关键。只要在在本专利技术的核心精神下，无论以何种检测circRFWD3表达量的试剂检测头颈鳞癌转移风险，均在本专利技术的保护范围内。
[0020]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0021]图1：circRFWD3拼接位点。
[0022]图2：Rnase R酶消化前后GAPDH、RFWD3和circRFWD3的qPCR扩增情况。UM1和HN31均为人类头颈鳞癌细胞系。
[0023]图3：验证circRFWD3的qPCR引物有效。
[0024]图4：circRFWD3在转移和非转移头颈鳞癌中的表达情况。N0，非转移头颈鳞癌；Nx，发生区域淋巴结转移的头颈鳞癌。
具体实施方式
[0025]实施例1预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒(qPCR试剂盒)
[0026]1.组成
[0027]试剂盒主要包括扩增circRFWD3的引物和其他常见的qPCR试剂，如表1所示。
[0028]表1试剂盒的组成
[0029][0030]引物序列如表2所示。
[0031]表2引物序列
[0032]引物序列circRFWD3正向引物TACTGTGATGCTCTGAGCTGCCTGGTG(SEQ ID NO.1)circRFWD3反向引物CCTGAACACGCCTTTGAAGC(SEQ ID NO.2)GAPDH正向引物ACATCGCTCAGACACCATG(SEQ ID NO.3)GAPDH反向引物TGTAGTTGAGGTCAATGAAGGG(SEQ ID NO.4)
[0033]2.使用方法
[0034](1)取头颈鳞癌组织样本50
‑
100mg提取总RNA；
[0035](2)使用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA；
[0036](3)进行qPCR反应，以GAPDH为内参(内参引物如SEQ ID NO.3～4所示)，体系和程序如下：
[0037]a.qPCR体系组成
[0038][0039]b.PCR反应程序：
[0040][0041](4)数据计算，按照如下规则计算相对表达量：
[0042]ΔCt＝Ct(circRFWD3)
‑
Ct(GAPDH)；
[0043]ΔΔCt＝ΔCt(样品)
‑
ΔCt(对照)；对照为qPCR体系中将cDNA模板换成水。
[0044]相对表达量即为2
‑
ΔΔCt
。
[0045]qPCR完成后，根据circRFWD3的相对表达量对头颈鳞癌转移风险进行判断，相对表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测circRFWD3表达量的试剂在制备预测头颈鳞癌转移风险的试剂盒中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测circRFWD3表达量的试剂是qPCR试剂。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述qPCR试剂包括序列如SEQ ID NO.1～2所述的引物。4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述qPCR试剂还包括扩增GAPDH的引物，优选地，所述扩增GAPDH的引物的序列如SEQ ID NO.3～4所述。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测circRFWD3表达量的试剂为测序试剂、原位杂交检测试剂或核酸印迹检测试剂。6.一种预测头颈...

【专利技术属性】
技术研发人员：李敬，魏子豪，陈谦明，王冏珂，罗小波，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：