一种食管腺癌预后分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及miR

【技术实现步骤摘要】
一种食管腺癌预后分子标志物及其应用


[0001]本专利技术属于肿瘤分子生物学
，具体涉及一种食管腺癌预后分子标志物及其应用。

技术介绍

[0002]食管腺癌(EAC)是一种预后较差的消化系统恶性肿瘤，常发生于食管粘膜下或者贲门腺体，术后情况不容乐观。据报道中国的EAC患者每年的新增率大概为5％，其发病原因不详，确诊时多数已经进展为晚期，在临床上，几乎所有的EAC患者的预后都很差，平均生存期(OS)小于13个月，死亡率高，严重威胁着人类的生命健康。
[0003]EAC发病率在逐年增加，其发病原因与肥胖、吸烟、胃食管反流病和BE等多种因素有关，需要寻找到疗效更好的技术或治疗方法。岂今为止，许多研究表明异常表达的miRNA 可用于各种类型肿瘤和疾病的诊断和预后，如肺癌、肝癌、乳腺癌等。然而，只有少数研究报道了关于miRNA作为EAC诊断和预后生物标志物的意义。
[0004]EAC诊断相关的miRNA在EAC和癌旁组织中的表达具有明显差异。miR
‑
203被认为是EAC的肿瘤抑制因子，原因是与正常组织相比，它的表达在EAC中显著下调且与EAC 的进展呈负相关。miR
‑
21
‑
5p和miR
‑
25
‑
3p在EAC中扮演者肿瘤促进因子的角色。miR
‑
21
‑ꢀ
5p作为EAC诊断的生物标志物，它在EAC中的上调会促进EAC细胞凋亡和转移。miR
‑
25
‑ꢀ
3p在EAC中高表达，它可用于区分食管腺癌和健康对照组患者。
[0005]与EAC预后相关的miRNAs相比与EAC诊断用miRNAs多一些，但其研究大多都停留在实验的研究层面上，未深入研究其影响EAC的发生发展的机制，缺乏有效证据指导 miRNAs用于临床治疗。在与EAC预后相关的miRNAs中，miR
‑
145、miR
‑
203和miR
‑
221 的研究较为深入。研究显示miR
‑
145作为肿瘤的抑制剂，在癌症进展的抗失巢凋亡过程中发挥着重要作用。Derouet等研究表明miR
‑
145的表达增强了EAC细胞的侵袭和纤连蛋白的粘附以及延迟了PARP和caspase
‑
3的裂解，从而保护EAC细胞免受失巢凋亡，且不影响EAC 对化疗药物的耐药性。Saad等研究表明miR
‑
203的下调与EAC的进展和肿瘤分期显着相关。有研究表明在5
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氟尿嘧啶耐药细胞中抑制miR
‑
221的表达会导致细胞增殖能力下降和细胞凋亡增加以及化学敏感性的恢复，进而导致由DKK2的表达失调所介导的Wnt/β
‑
连环蛋白途径的激活。另外，miR
‑
221的下调会导致EMT相关基因(如E
‑
钙粘蛋白和波形蛋白)的改变，以及裸鼠异种移植瘤生长显著减慢。此外，miR
‑
221调节的且与Wnt/β
‑
连环蛋白信号传导和化学耐药相关的靶基因(CDH1、CD44、MYC和ABCG2)存在严重失调。以上研究显示miRNA的表达水平与EAC的诊断或预后相关，而且影响着EAC诊断和预后的因素具有复杂性。总体而言，以上研究中发现的miR
‑
145和miR
‑
221与EAC患者的预后显著相关，且其具体分子机制已经明确。因此在未来的EAC研究中，miR
‑
145和miR
‑
221对EAC患者的预后具有重要价值。
[0006]一些研究重点通过分析miRNAs在EAC细胞系中的作用来探索miRNAs在EAC治疗中的作用，这对未来临床相关治疗剂或生物标志物的鉴定是很有前景的，如miR
‑
221和miR
‑ꢀ
222抑制剂对EAC细胞系OE33的影响。在该研究中，miRNAs抑制剂被注射到5只老鼠的肿瘤周
的关键靶基因是ASAP3、LMF1、PRKACB和PDCD4中的至少一种；miR
‑
550a
‑
5p的关键靶基因是BCL2L2、PTPN21和RPS6KA5中的至少一种。
[0016]另一个方面，本专利技术提供靶基因PPM1L、SLC18A2、ASAP3、LMF1、PRKACB、 PDCD4、BCL2L2、PTPN21和RPS6KA5在构建食管腺癌预后模型中的应用。
[0017]另一个方面，本专利技术提供分子标志物miR
‑
421和/或miR
‑
550a
‑
1、或其成熟体miR
‑
421、 miR
‑
550a
‑
3p、miR
‑
550a
‑
5p、或基因PPM1L、SLC18A2、ASAP3、LMF1、PRKACB、 PDCD4、BCL2L2、PTPN21和RPS6KA5在制备食管腺癌诊断试剂盒中的应用。
[0018]进一步地，所述诊断试剂盒中包含以下SEQ ID No.1
‑
20所示的靶基因引物序列：
[0019]SEQ ID No.1PPM1L
‑
F GAGTTACTTCTTCCACACCGACGAG
[0020]SEQ ID No.2PPM1L
‑
R GCTACCTTGCCCTTCACCATCTTC
[0021]SEQ ID No.3SLC18A2
‑
F GTCCTTCTGCTGGTGGTGCTATTG
[0022]SEQ ID No.4SLC18A2
‑
R TTCTTCTTTGGCAGGTGGACTTCG
[0023]SEQ ID No.5ASAP3
‑
F ACAAGCAGTTTGGGACGGAGAAAG
[0024]SEQ ID No.6ASAP3
‑
R CAGCCATACTTGACTCCACACTTCC
[0025]SEQ ID No.7LMF1
‑
F TCCACTATGAGACCCAGCCGATG
[0026]SEQ ID No.8LMF1
‑
R AAGAGGAAGAAGGGCACCAGGAG
[0027]SEQ ID No.9PRKACB
‑
F GTGGATTGGTGGGCATTAGGAGTG
[0028]SEQ ID No.10PRKACB
‑
R CTGAACTGAAGTGGGATGGGAATCG
[0029]SEQ ID No.11PDCD4
‑
F CAAAGGGAAGGTTGCTGGATAGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR
‑
421和/或miR
‑
550a
‑
1作为食管腺癌预后分子标志物的应用。2.食管腺癌预后分子标志物miR
‑
421和/或miR
‑
550a
‑
1或其成熟体miR
‑
421、miR
‑
550a
‑
3p、miR
‑
550a
‑
5p在构建食管腺癌预后模型中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下特征中的一项或几项：(1)所述构建食管腺癌预后模型包括如下步骤：(a)使用多因素Cox回归分析获得mir
‑
421的回归系数和mir
‑
550a
‑
1的回归系数；根据回归系数以及mir
‑
421和mir
‑
550a
‑
1的表达值，计算患者的风险评分；(b)以风险评分中位数为阈值，将样本划分为高风险组和低风险组，从而构建miRNAs的食管腺癌预后风险模型；(c)采用受试者工作特征、一致性指数和校准曲线对预后模型进行评价；(d)构建了食管腺癌预后模型的列线图，以预测各miRNAs的表达量与EAC患者总生存率之间的关系；(2)所述miR
‑
421和/或miR
‑
550a
‑
1的高表达、或其成熟体miR
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421、miR
‑
550a
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3p和miR
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550a
‑
5p的高表达表明食管腺癌预后差。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述成熟体miR
‑
421的关键靶基因是PPM1L和SLC18A2中的至少一种。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述成熟体miR
‑
550a
‑
3p的关键靶基因是ASAP3、LMF1、PRKACB和PDCD4中的至少一种。6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述成熟体miR
‑
550a
‑
5p的关键靶基因是BCL2L2、PTPN21和RPS6KA5中的至少一种。7.分子标志物miR
‑
421和/或miR
‑
550a
‑
1、或其成熟体miR
‑
421、miR
‑
550a
‑
3p、miR
‑
550a
‑
5p、或基因PPM1L、SLC18A2、ASAP3、LMF1、PRKACB、PDCD4、BCL2L2、PTPN21和RPS6KA5在制备食管腺癌诊断试剂盒中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述食管腺癌诊断试剂盒包含以下SEQ ID No.1
‑
20任一所示的靶基因引物序列：SEQ ID No.1 PPM1L
‑
F GAGTTACTTCTTCCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽果，吉云，王璐璐，常光磊，何美霞，代丽萍，陈慧平，刘静静，赵阳，汲振余，张壮丽，裘一兵，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：