一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法技术

采用超高效液相色谱法测定羟基酪醇的纯度尚无文献报道。本发明专利技术公开了一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法。采用十八烷基或辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸水溶液

【技术实现步骤摘要】
一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法


[0001]本专利技术涉及一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法，属于分析检测


技术介绍

[0002]羟基酪醇(Hydroxytyrosol)是一种多酚类化合物，化学名为3,4
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二羟基苯乙醇，CAS号为10597
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60
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1。化学结构式如下：
[0003][0004]羟基酪醇主要以酯的形式存在于橄榄的果实和枝叶中，具有多种生物活性及药理活性。羟基酪醇具有很强的抗氧化活性，其在抗癌、抗血栓、调血脂和抗动脉硬化、抗病原微生物、防治视网膜黄斑变性、保护软骨和抗骨质疏松等方面已有研究，羟基酪醇已广泛应用于食品、保健品及化妆品中。
[0005]羟基酪醇的来源有多种，包括化学合成、植物提取及生物发酵等，不同来源的羟基酪醇中可能含有不同种类的杂质。羟基酪醇对光照、氧化及高温等条件均很敏感，储藏时可能产生降解杂质。准确测定羟基酪醇的纯度以及羟基酪醇在各类样品中的含量，能够保证其质量可控，对于羟基酪醇的各项研究尤为重要。文献《UPLC－UV法分离分析橄榄叶及生物样本中的羟基酪醇》采用UPLC－UV法、文献《橄榄果渣制备羟基酪醇及体外抗氧化活性研究》采用UPLC法、文献《美藤果叶提取羟基酪醇抑菌活性的研究》采用UPLC
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MS/MS法测定样品中羟基酪醇的含量，均以甲醇
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水
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甲酸作为流动相；文献《女贞子中橄榄苦苷与羟基酪醇在大鼠血浆中的药动学差异》采用UPLC
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MS/MS法测定样品中羟基酪醇的含量，以乙腈
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水
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甲酸作为流动相；文献《羟基酪醇嵌段共聚物纳米粒的药动学及细胞生物学特性研究》采用HPLC法测定体外样品中羟基酪醇的含量，以甲醇
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水作为流动相，采用UPLC法测定体内样品中羟基酪醇的含量，以乙腈
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水作为流动相。采用超高效液相色谱法测定羟基酪醇的纯度尚无文献报道。上述文献中的方法均为测定其他样品中羟基酪醇含量的方法，均未涉及羟基酪醇中杂质的测定或羟基酪醇的纯度测定。且使用甲酸作为流动相时，基线噪音较大；使用甲醇
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水及乙腈
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水作为流动相时，羟基酪醇峰形不好，会导致检测灵敏度降低、测定结果不准确等问题。综上所述，文献中的方法均不利于羟基酪醇中杂质的检测，不适用于羟基酪醇的纯度测定。本专利技术通过对色谱条件、样品处理方法等的筛选，使用超高效液相色谱仪，采用十八烷基或辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用磷酸水溶液
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乙腈作为流动相，基线噪音小，利于杂质的检出和准确测定，操作简便，流动相简单易得，分析时间短，流动相流速小，溶剂用量少，有效节约了时间和成本，既适用于测定含有羟基酪醇的各类样品(例如包合物、保健食品及植物提取物等)中羟基酪醇的含量，又适用于测定羟基酪醇的纯度，对羟基酪醇的质量控制及其在各个领域的研究具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种可行性高、操作简便、能够快速测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法。
[0007]本专利技术一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法的实现包括以下步骤：
[0008](1)色谱条件：
[0009]色谱柱：选用十八烷基或辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，包括但不限于2.1*100mm，1.6μm、2.1*100mm，1.7μm、2.1*50mm，1.7μm、2.0*100mm，1.9μm等规格。
[0010]流动相：以磷酸水溶液
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乙腈为流动相，梯度洗脱。梯度洗脱程序为0～6分钟，磷酸水溶液
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乙腈的比例为95：5～80：20；6～12.5分钟，磷酸水溶液
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乙腈的比例线性变化至75：25～65：35；12.5～16分钟，磷酸水溶液
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乙腈的比例为75：25～65：35。
[0011]磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.01％～0.1％。
[0012]流速为0.2～0.3ml/min。
[0013]柱温为25～40℃。
[0014]采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为200～280nm。
[0015]进样体积1～2μl。
[0016]溶剂为磷酸水溶液
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乙腈，比例为95：5～65：35。
[0017](2)羟基酪醇的含量测定：
[0018]对照溶液：取羟基酪醇标准品或对照品适量，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.01～0.5mg的溶液。
[0019]供试品溶液：取羟基酪醇或含有羟基酪醇的样品适量，用适宜的样品处理方法处理，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.01～0.5mg的溶液。
[0020]取对照溶液及供试品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积计算供试品中羟基酪醇的含量。
[0021](3)羟基酪醇的纯度测定：
[0022]供试品溶液：取羟基酪醇适量，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.3～1mg的溶液。
[0023]取供试品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积归一化法计算羟基酪醇的纯度。
[0024]本专利技术的积极效果在于：
[0025](1)本专利技术提供的分析方法既能广泛应用于各类含有羟基酪醇的样品中羟基酪醇的含量测定，又能准确测定羟基酪醇的纯度。
[0026](2)本专利技术提供的分析方法操作简便，流动相简单易得，可行性高。
[0027](3)本专利技术提供的分析方法使用超高效液相色谱仪，流动相流速小，溶剂用量少，分析时间短，有效节约了时间和成本。
附图说明
[0028]图1实施例一的溶剂的超高效液相色谱图
[0029]图2实施例一的对照溶液的超高效液相色谱图
[0030]图3实施例一的橄榄果粉供试品溶液的超高效液相色谱图
[0031]图4实施例二的溶剂的超高效液相色谱图
[0032]图5实施例二的羟基酪醇的超高效液相色谱图
[0033]图6实施例三的羟基酪醇的超高效液相色谱图
[0034]图7实施例四的羟基酪醇的超高效液相色谱图
[0035]图8实施例五的溶剂的超高效液相色谱图
[0036]图9实施例五的对照溶液的超高效液相色谱图
[0037]图10实施例五的压片糖供试品溶液的超高效液相色谱图
具体实施方式
[0038]以下结合附图对本专利技术实施方式作进一步详细描述。
[0039]实施例一
[0040]仪器与色谱条件：
[0041]超高效液相色谱仪：Waters ACQUITY H
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Class UPLC，PDA检测器
[0042]色谱柱：Waters C8，2.1mm*100mm，1.6μm
[004本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定羟基酪醇含量及纯度的超高效液相色谱方法，其特征在于包括以下步骤：(1)色谱条件：选用十八烷基或辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸水溶液
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乙腈为流动相，梯度洗脱，采用二极管阵列检测器或紫外检测器；(2)羟基酪醇的含量测定：对照溶液：取羟基酪醇标准品或对照品适量，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.01～0.5mg的溶液；供试品溶液：取羟基酪醇或含有羟基酪醇的样品适量，用适宜的样品处理方法处理，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.01～0.5mg的溶液；取对照溶液及供试品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积计算供试品中羟基酪醇的含量；(3)羟基酪醇的纯度测定：供试品溶液：取羟基酪醇适量，用溶剂稀释制成每1ml中约含羟基酪醇0.3～1mg的溶液；取供试品溶液注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积归一化法计算羟基酪醇的纯度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱为十八烷基或辛烷基键合硅胶中的任意一种，包括但不限于2.1*100mm，1.6μm、2.1*100mm，1.7μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王帆，郭新艳，杨海霞，王静，刘延新，廉贞霞，刘敏，袁晓如，李霞，杨帅，杨琪，刘亚方，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：