甘露聚糖酶变体制造技术

一种与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4至少75％相同的甘露聚糖酶，编码该甘露聚糖酶的多核苷酸，包含该多核苷酸的表达构建体，以及包含该多核苷酸或该表达构建体的宿主细胞。细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】甘露聚糖酶变体


[0001]本专利技术涉及甘露聚糖酶的变体。这些变体可用于其中需要甘露聚糖降解或改性的工业应用，例如洗衣和清洁应用、饲料、食品、纸浆和造纸以及石油工业。本专利技术还提供有用的甘露聚糖酶、编码这些酶的多核苷酸、酶组合物以及它们的生产和使用方法。

技术介绍

[0002]半纤维素和半乳甘露聚糖的主要作用是作为结构多糖和/或作为储备能量。除作为植物中最广泛的储备多糖的直链淀粉和支链淀粉之外，各种植物的种子、根、鳞茎和块茎中存在多样的基于甘露聚糖的多糖类群。这些类群包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖。
[0003]甘露聚糖是具有β
‑
1,4
‑
连接的D
‑
吡喃甘露糖残基骨架的多糖。在大多数情况下，甘露聚糖极不溶于水，但具有很高的水结合能力。与未取代的甘露聚糖相反，半乳甘露聚糖为水溶性。归因于植物细胞壁的复杂结构性组成，依赖分解植物材料兴起的微生物必须拥有众多不同的能够水解这些高度聚合且大多不溶性物质的酶。两类参与半纤维素降解的主要内切作用酶是β
‑
甘露聚糖酶和β
‑
木聚糖酶。另外，需要外切作用酶β
‑
甘露糖苷酶、α
‑
半乳糖苷酶和β
‑
葡糖苷酶以完全降解半乳葡甘露聚糖。
[0004]参与甘露聚糖主链降解的主要酶类型是水解甘露聚糖主链中内部糖苷键的内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)。内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)是本文中可称为内切
‑
β
‑
1,4
‑
D
‑
甘露聚糖酶、β
‑
甘露聚糖酶或甘露聚糖酶的甘露聚糖降解酶。由于内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)降解甘露聚糖主链，故甘露聚糖降解包括降解甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或葡甘露聚糖。
[0005]甘露聚糖酶广泛用于食品和饲料应用、洗涤剂以及纸浆和造纸工业：
[0006]·
使用甘露聚糖酶作为饲料添加剂已显示提供多种有益效果，因为甘露聚糖是影响肠道内容物粘度的一个因素，因此会对饲料消化率和动物生长速度产生不利影响。
[0007]·
在食品工业中，甘露聚糖酶被描述用于生产速溶咖啡，其中酶由于咖啡甘露聚糖的水解而降低了咖啡提取物的粘度。此外，甘露聚糖酶用于生产特定的目的甘露寡聚体，这些甘露寡聚体可作为功能性食品成分，例如具有益生元功能的甘露寡聚体。在此类应用中，植物来源的甘露寡聚体经受甘露聚糖酶的水解。
[0008]·
甘露聚糖酶在加工和制造果汁中很常见，因为它可以降低粘度并提高过滤速度、稳定性并有助于提取水果成分。
[0009]·
洗涤剂用途：甘露聚糖酶促进移除食物衍生和化妆品衍生的污渍/污垢，后者经常包括含有甘露聚糖的添加物如稳定剂、乳化剂和增稠剂。在更特殊的清洁应用中，应用甘露聚糖酶从需要无微生物的表面或管件如制药设备移除生物膜。在这样的应用中，甘露聚糖酶经常与洗涤剂和其他酶如糖酶和蛋白酶组合使用。
[0010]·
纸浆和造纸：甘露聚糖酶用于纸浆的酶助漂白中。甘露聚糖酶据称弥补木聚糖酶的作用。
意指将酶制剂加入液体制剂中。
[0028]酶制剂还可包含选自由以下组成的组的其他酶(一种或多种)：蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、角质酶、酯酶、植酸酶、DNA酶、果胶酶、果胶裂解酶、果胶分解酶、糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、漆酶、过氧化物酶和氧化酶，以及选自由稳定所含酶的化合物如酶稳定剂和稳定制剂的化合物如防腐剂组成的组的合适添加剂。
[0029]在一个方面，本专利技术提供了一种制剂，该制剂优选具有5
‑
12范围内，优选6
‑
11范围内，更优选在选自6
‑
10、7
‑
12、7
‑
9、8
‑
12、8
‑
10和7.5
‑
8.5范围内的pH，该制剂包含根据本专利技术的甘露聚糖酶变体。优选地，制剂是包含至少一种选自表面活性剂、助洗剂和水溶助长剂的组分的液体制剂，其以有效保持液体制剂的物理特性和/或有效清洁的量存在。在一个实施方案中，制剂是洗涤剂制剂。
[0030]包含至少一种根据本专利技术的甘露聚糖酶变体的洗涤剂制剂是有利的，因为它去除含甘露聚糖的污渍。
[0031]序列
[0032]本文使用的序列如下：
[0033]编码根据SEQ ID NO:2的亲本甘露聚糖酶的SEQ ID NO:1多核苷酸序列：
[0034][0035][0036]以其单字母代码表示的SEQ ID NO:2亲本甘露聚糖酶(包括信号序列的490AA)：
[0037][0038]SEQ ID NO:3是包括接头和CBD(碳水化合物结构域)的成熟亲本甘露聚糖酶。在此，以其单字母代码表示：
[0039][0040]不具有接头和CBD(碳水化合物结构域)的SEQ ID NO:4成熟亲本甘露聚糖酶，以其单字母代码表示：
[0041][0042]专利技术详述
[0043]应理解，如在说明书和权利要求书中使用的，“一个”或“一种”可意指一个或多个(在“至少一个”的意义上)，这取决于其使用的上下文。
[0044]此外，应理解，术语“至少”是指该术语所指的项目或参数在一个方向上受到限制，但在一个或多个其他方向上是开放式的。
[0045]如在下文中使用的，术语“具有”、“包含”、“含有”或“包括”或其任何任意语法变体以非排他的方式使用。因此，这些术语既可以指代其中除了由这些术语引入的特征之外，在该上下文中描述的实体中不存在另外的特征的情况，又可以指代其中存在一个或多个另外的特征的情况。
[0046]通过“在一个实施方案中”或类似表述引入的特征旨在作为附加或替代特征，对本专利技术的替代实施方案没有任何限制，对本专利技术的范围没有任何限制，并且对将以这种方式引入的特征与本专利技术的其它附加或替代或非附加或非替代的特征组合的可能性没有任何限制。术语“可以”在本文中优选地涵盖实施方案。
[0047]如本文所用，术语“约”意指关于在所述术语之后列举的任何数字，存在在其中可以实现技术效果的区间精度。因此，如本文所提及的约优选是指精确数值或所述精确数值附近的
±
15％、优选
±
10％、更优选
±
5％或甚至更优选
±
3％的范围。
[0048]通常，“酶”是作用于底物并将其转化为产物的催化活性蛋白质或多肽。该反应在本文中可称为酶促转化，其通常发生在酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 4至少75％相同的甘露聚糖酶变体，其包含至少一个选自D86N、Q89V/L、N96D、L101T/V、S103Y/E/A、K107N、N108G、N109Q/A、A112N、A119Y/H/T、N122S、A124E/C/D、S126E、S127A、N129M/L/F、S231Q/K/L/P/Y、I233V、S235H/R/L/Q/N/Y、D244I/V/N、H254W、K255Y/H/R、E264Q/V、S270T、Q272I、K273T、N274E/C/Q、S281L、G286E/L/Q/A、W289F/M/H、S290A、N296H/F/Y、D301E/C/T、T309L、N312F/Y、A314P、L317T、A319D/E的氨基酸取代，其中编号根据SEQ ID NO:2，并且其中多肽具有甘露聚糖降解活性。2.根据权利要求1所述的甘露聚糖酶变体，其中变体具有与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO 3至少75％相同的多肽序列，包含至少一个选自D328I/Q/V、G329L/S/V/T、G330P/D/T、D331A/Q、Y344Q/F/T、M359R/Y/C/Q、Y374G/V/A/R/N/P、L416W和W432P/N/L/R/S/T/G/H/I的氨基酸取代。3.一种编码根据权利要求1和2所述的甘露聚糖酶的多核苷酸，优选其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:1至少75％相同。4.表达构建体，其包含根据权利要求3所述的多核苷酸。5.宿主细胞，其包含根据权利要求3所述的多核苷酸或根据权利要求4所述的表达构建体。6.一种表达根据权利要求1和2所述的甘露聚糖酶变体的方法，包括以下步骤(a)通过将包含编码根据本发明的甘露聚糖酶变体的多核苷酸的核酸构建体引入宿主细胞中来提供包含异源核酸构建体的宿主细胞，所述异源核酸构建体包含编码根据本发明的甘露聚糖酶变体的多核苷酸；(b)在有利于所述多核苷酸表达的条件下培养步骤(a)的重组宿主细胞；以及(c)任选地，回收由所述多核苷酸编码的目的蛋白质。7.液体酶制剂，其包含根据权利要求1或2所述的甘露聚糖酶、至少一种稳定液体酶制剂本身的化合物如防腐剂、至少一种溶剂如甘油和任选地至少一种酶稳定剂。8.通过在选自D86N、Q89V、N96D、L101T/V、S103Y/E/A、K107N、N108G、N109Q/A、A112N、A119Y/H/T、N122S、A...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：