甘露聚糖酶变体制造技术

与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少75％相同的甘露聚糖酶，编码甘露聚糖酶的多核苷酸，包含多核苷酸的表达构建体，和包含多核苷酸或表达构建体的宿主细胞。表达构建体的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】甘露聚糖酶变体


[0001]本专利技术涉及甘露聚糖酶的变体。这些变体可用于其中需要甘露聚糖的降解或改性的工业应用中，如在洗衣和清洁应用中，在饲料、食品、纸浆和造纸和油工业中。本专利技术还提供了有用的甘露聚糖酶、编码这些酶的多核苷酸、酶组合物及其生产和使用方法。

技术介绍

[0002]半纤维素和半乳甘露聚糖的主要作用是充当结构多糖和/或充当储备能量。除作为植物中最广泛的储备多糖的直链淀粉和支链淀粉之外，各种植物的种子、根、鳞茎和块茎中存在多样的基于甘露聚糖的多糖类群。这些类群包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖。
[0003]甘露聚糖是具有β
‑
1,4连接的D
‑
吡喃甘露糖残基主链的多糖。在大多数情况下，甘露聚糖高度地不溶于水中，但具有高的水结合能力。与未取代的甘露聚糖相反，半乳甘露聚糖为水溶性。归因于植物细胞壁的复杂结构性组成，依赖分解植物材料兴起的微生物必须拥有众多不同的能够水解这些高度聚合且大多不溶性物质的酶。两类参与半纤维素降解的主要内切作用酶是β
‑
甘露聚糖酶和β
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木聚糖酶。此外，需要外切作用酶β
‑
甘露糖苷酶、α
‑
半乳糖苷酶和β
‑
葡糖苷酶以完全降解半乳葡甘露聚糖。
[0004]参与甘露聚糖主链降解的主要酶类型是水解甘露聚糖主链中内部糖苷键的内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)。内切<br/>‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)是本文中也称为内切
‑
β
‑
1,4
‑
D
‑
甘露聚糖酶、β
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甘露聚糖酶或甘露聚糖酶的甘露聚糖降解酶。由于内切
‑
1,4
‑
β
‑
甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)降解甘露聚糖主链，所以甘露聚糖降解包括降解甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或葡甘露聚糖。
[0005]甘露聚糖酶广泛用于食品和饲料应用、洗涤剂以及纸浆和造纸业：
[0006]·
已经显示使用甘露聚糖酶作为饲料添加剂提供若干有益作用，因为甘露聚糖是肠道内容物粘度的促成因素，从而不利地影响饲料消化率和动物生长速率。
[0007]·
在食品工业中，描述了甘露聚糖酶用于生产速溶咖啡，其中由于咖啡甘露聚糖的水解，酶降低了咖啡提取物的粘度。此外，甘露聚糖酶用于产生作为功能性食品成分令人感兴趣的特定甘露糖低聚物，如具有益生元功能的甘露糖低聚物。在这类应用中，将植物衍生的甘露糖聚合物通过甘露聚糖酶进行水解。
[0008]·
在加工和制造果汁中通常使用甘露聚糖酶，因为它降低粘度并提高过滤速率、稳定性并有助于提取水果成分。
[0009]·
洗涤剂用途：甘露聚糖酶促进移除食物衍生和化妆品衍生的污渍/污垢，后者经常包括含有甘露聚糖的添加剂如稳定剂、乳化剂和增稠剂。在更特殊的清洁应用中，应用甘露聚糖酶从需要无微生物的表面或管件如制药设备移除生物膜。在这样的应用中，甘露聚糖酶经常与洗涤剂和其他酶如糖酶和蛋白酶组合使用。
[0010]·
纸浆和造纸：甘露聚糖酶用于纸浆的酶辅助漂白中。甘露聚糖酶据称弥补木聚糖酶的作用。
[0011]·
甘露聚糖酶应用于借助水力压裂的石油和天然气井增产过程中。甘露聚糖酶降低用于该过程中的瓜尔豆溶液的粘度。
[0012]·
甘露聚糖酶用于从交联型半乳甘露聚糖组成的基质中控释药物或其他材料。
[0013]在应用条件下的活性是许多工业用酶的关键参数，因为这些酶在应用条件下经常倾向于活性不足。因此，本专利技术的目的是找到在通过发酵生产酶期间具有改善的稳定性的甘露聚糖酶变体，从而实现提高的非降解酶产物的产量。此类变体在本文中可称为“对降解稳定”。
[0014]在一个实施方案，本专利技术的甘露聚糖酶变体在生产中提供提高的非降解产物的产率和更好的使用性能。
[0015]在一个方面，本专利技术提供了在发酵过程中稳定的甘露聚糖酶，从而引起更高产量的具有足够酶活性的酶。甘露聚糖酶与SEQ ID NO:2至少75％相同，优选与根据SEQ ID NO:2的第31
‑
490位的序列至少75％相同。根据SEQ ID NO:2的第31
‑
409位的序列等于SEQ ID NO:3。
[0016]在一个方面，本专利技术提供了编码根据本专利技术的甘露聚糖酶变体的多核苷酸序列。
[0017]在一个方面，本专利技术提供了包含本专利技术的多核苷酸序列的载体。
[0018]在一个方面，本专利技术提供了包含本专利技术的多核苷酸的重组宿主细胞，其使得宿主细胞能够表达至少一种根据本专利技术的重组甘露聚糖酶变体。
[0019]在一个方面，本专利技术提供了一种表达多核苷酸的方法，其包括步骤
[0020](a)通过将包含编码根据本专利技术的甘露聚糖酶变体的多核苷酸的核酸构建体引入宿主细胞中来提供包含异源核酸构建体的宿主细胞，该异源核酸构建体包含编码根据本专利技术的甘露聚糖酶变体的多核苷酸；
[0021](b)在有利于表达多核苷酸的条件下培养步骤(a)的重组宿主细胞；和
[0022](c)任选地，回收由多核苷酸编码的目的蛋白质。
[0023]在本专利技术的一个方面，在酶制剂中提供根据本专利技术的甘露聚糖酶变体，酶制剂允许与一种类型的酶或酶的混合物灵活地配制成液体制剂，如液体洗涤剂制剂。“配制成”意指将酶制剂加入液体制剂中。
[0024]酶制剂可以进一步包含选自由以下组成的组的其他酶(一种或多种)：蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、角质酶、酯酶、植酸酶、DNA酶、果胶酶、果胶裂解酶、果胶分解酶、糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、漆酶、过氧化物酶和氧化酶，以及选自由以下组成的组的合适添加剂：稳定所包含的酶的化合物如酶稳定剂和稳定制备物的化合物如防腐剂。
[0025]序列
[0026]本文使用的序列如下：
[0027]SEQ ID NO:1:编码根据SEQ ID NO:2的亲本甘露聚糖酶的多核苷酸序列：
[0028][0029]以其单字母代码表示的SEQ ID NO:2亲本甘露聚糖酶(包括信号序列的490AA)：
[0030][0031]以其单字母代码表示的SEQ ID NO:3包括接头和CBD(碳水化合物结构域)的成熟亲本甘露聚糖酶：
[0032][0033]专利技术详述：
[0034]应理解，如在说明书和权利要求书中所使用的，“一个(a)”或“一种(an)”意指一个或多个(“至少一个”的意义)，这取决于其使用的上下文。
[0035]此外，应理解，术语“至少”意指该术语所指的项目或参数在一个方向上受到限制，但在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少75％相同的甘露聚糖酶变体，其包含至少一个选自N341F、F346T、T348S/R/N/M/G、E349T/S/G/D、S352N/G、G356Y/V/T/Q/H/C和D379V的氨基酸取代，其中编号根据SEQ ID NO:2。2.一种编码权利要求1所述的甘露聚糖酶的多核苷酸，其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:1至少75％相同。3.表达构建体，其包含根据权利要求2所述的多核苷酸。4.宿主细胞，其包含根据权利要求2所述的多核苷酸或根据权利要求3所述的表达构建体。5.一种表达根据权利要求1所述的甘露聚糖酶变体的方法，其包括步骤(a)通过将包含编码根据本发明的甘露聚糖酶变体的多核苷酸的核酸构建体引入宿主细胞中来提供包含异源核酸构建体的宿主细胞，所述异源核酸构建体包含编码根据本发明的甘露聚糖酶变体的多核苷酸；(...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：