一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述制备方法如下：1)重组杆状病毒获得：将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pK205R蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表达基因克隆到转移载体pBacPAK8中，然后与线性化的DNA质粒共转染昆虫细胞，得到含有非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白表达基因的重组杆状病毒；2)发酵培养：再将所述重组杆状病毒进行扩大培养后进行发酵，收集培养液；3)亚单位蛋白纯化：对步骤2)中所述培养液进行纯化，纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位可溶性蛋白。本发明专利技术能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟蛋白pK205R亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。家现有标准。

【技术实现步骤摘要】
一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
涉及一种高纯度非洲猪瘟pK205R蛋白大规模制备方法和应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，发病率及死亡率高达100％。猪感染非洲猪瘟病毒后出现皮肤充血，内脏器官出血，高热为特征临床症状，猪是ASFV自然感染的唯一哺乳动物宿主，包括家猪和野猪，尤其是家猪，易感性极高，对畜牧业影响巨大。世界动物卫生组织将其列为A类疫病，我国也将其列为一类动物传染病。
[0003]该病最早在1921年于非洲的肯尼亚国家确认发生，对非洲乃至全球多个国家的养猪业造成极大打击。2018年8月份以来，在我国多个省份爆发，给我国养猪业带来了严重的经济损失。虽然，国内外学者对非洲猪瘟做了大量的研究工作，但研究发现：常规制备的非洲猪瘟灭活苗效果不明显，而弱毒苗保护效果也不好，且安全性差，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白，其特征在于，所述重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白为非洲猪瘟病毒蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.如权利要求1所述的重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白，其特征在于，密码子优化后的所述重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.一种制备如权利要求1～2任一所述的重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)重组杆状病毒获得：将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pK205R蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表达基因克隆到转移载体pBacPAK8中，然后与线性化的DNA质粒共转染昆虫细胞，得到含有非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白表达基因的重组杆状病毒；2)发酵培养：再将所述重组杆状病毒进行扩大培养后进行发酵，收集培养液；3)亚单位蛋白纯化：对步骤2)中所述培养液进行纯化，纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位可溶性蛋白。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述昆虫细胞为sf9细胞和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：张强，钱泓，吴有强，贾宝琴，徐玉兰，闻雪，
申请(专利权)人：浙江海隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：