一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法技术

本发明专利技术公开了一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，选取SPF级BABL/c雄性小鼠24只，随机分为空白组，模型组，阳性药组，实验组。空白组每日于背部皮损处外涂62.5mg凡士林，其余三组每日于背部皮损处外涂62.5mg咪喹莫特(IMQ)诱导小鼠进行银屑病造模，期间模型组和空白组以生理盐水进行灌胃，阳性药组每日以甲氨蝶呤灌胃，实验组以鸭嘴花碱进行灌胃，同时对背部皮损处拍照记录，PASI对皮损处红斑、表皮脱屑及浸润程度评分，共5天。与模型组相比，鸭嘴花碱显著缓解银屑病小鼠的皮损样症状，PASI结果表示皮损处红斑、表皮增厚、鳞屑程度均有缓解，脏脾指数呈下降趋势；鸭嘴花碱对银屑病小鼠的皮损病理情况有治疗效果。损病理情况有治疗效果。损病理情况有治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法


[0001]本专利技术涉及银屑病治疗
，具体是指一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法。

技术介绍

[0002]银屑病俗称牛皮藓，是皮肤科临床中一种常见的慢性炎症性、红斑鳞屑性皮肤病，易反复发作且难以根治，发病时间较长，有的患者几乎终身不愈，任何人只要停药有复发的可能，多在冬季加重，夏季有明显缓解，即冬重夏轻。累计人群较广，我国银屑病患病几率为0.47％患病人数超过600万，因其易反复发作和红斑鳞屑性皮损而严重影响患者的生活质量和美观，对患者的身体健康和精神状况都有影响。银屑病的发病机制很复杂包括遗传因素，免疫机制，环境因素，中医病因，人类对银屑病的认识经历了一个较为漫长曲折的过程，到目前为止，还没有找到能够根治银屑病的药物和方法，最多见的治疗措施有生物制剂、光疗、免疫调剂、抗炎等。现有方案有序贯疗法、交替及联合。尽管这些方法在临床治疗中得到了肯定，但都在一定程度上存在着对皮肤的损害及相应的不良反应，因此寻找安全有效都新药的研发仍然是目前医学界关注的重点。
[0003]银屑病的病理表现主要为境界清楚的浸润性红斑的基础上，表皮角化过度伴有角度不全，覆盖着银白色的鳞屑，鳞屑较厚，一般没有明显的瘙痒。它的诱发和加重因素很多，目前尚未完全明确，在中医理论里，银屑病是被认为在“松皮癣”“白疕”“疕风”等的范畴，它的发病原因包括了血瘀、湿邪、血热、外风等，其中，银屑病最常见的致病因素就是血热风盛，它贯穿在了银屑病的整个病理过程中，血热之邪结聚于皮肤，患有银屑病者会感到脾胃积热和内热偏盛，或者外感风热，热入血液，局部气血流动受阻，血热引起皮肤红斑，热盛血燥引起鳞屑、脱屑等症状。因此中医还可以从清热凉血的角度治疗银屑病。从现代医学角度它是一种基因遗传和免疫功能失调及T细胞异常引起的表皮质形成细胞的过度增生导致的皮肤炎症反应。
[0004]本专利技术探究的药物鸭嘴花碱(vasicine)是从爵床科植物鸭嘴花(AdhatodavasicaNees.)及蒺藜科植物骆驼蓬(PeganumharmalaLinn.)等植物中分离获得的含有一个手性中心的吡咯并[2，1
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b]喹唑啉类生物碱，主要分布于我国云南，四川等地。藏医经典著作《晶珠本草》里面记有鸭嘴花味苦性凉，治血热病，肝热，赤巴热的功效，是类风湿性关节炎常用药物，其中从鸭嘴花的二氯甲烷部位萃取出的一系列抗炎活性较强的化合物，具体有鸭嘴花酮碱、鸭嘴花碱、7
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甲氧基鸭嘴花碱、丁香脂素、3
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吲哚甲醛等成分。后续也经过实验证实这些成分确实有效改善皮损组织的病理情况，能够降低肥大细胞数量和外周血中炎性细胞因子数量，由此想到到用鸭嘴花里的成分鸭嘴花碱可能对皮肤炎症性银屑病有治疗作用。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种鸭嘴花碱干预银屑病
的实验方法，通过采用咪喹莫特(IMQ)诱导BALB/c小鼠进行银屑病造模，通过皮损PASI评分、光镜进行观察小鼠HE染色的皮肤的病理损伤情况、酶联免疫吸收法(ELISA)检测小鼠皮肤匀浆及外周血中IL
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17A、IL
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23、IL
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25的表达水平来探讨鸭嘴花碱干预银屑病的可能机制。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供以下的技术方案：一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，以雄性小鼠为实验对象，包括如下步骤：
[0007]1)动物造模，使用咪喹莫特或普萘洛尔进行诱导，诱发雄性小鼠的背部表现出类似人类的银屑病症状；并对动物分组，分为正常组、模型对照组、3mg/kg阳性对照组和200mg/kg鸭嘴花碱组；
[0008]2)动物给药，正常组以及模型对照组以生理盐水灌胃，每日一次，连续5日；
[0009]阳性药对照组以0.5％CMC
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Na溶解3mg/kg甲氨蝶呤灌胃，每日一次，连续5日；
[0010]鸭嘴花碱组以0.5％CMC
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Na溶解200mg/kg鸭嘴花碱灌胃，每日一次，连续5日；
[0011]3)通过PASI法评价皮损程度、动物取材及HE染色、酶联免疫吸收法检测小鼠皮肤匀浆以及外周血中IL
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17A、IL
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23、IL
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25细胞因子的表达水平，来记录雄性小鼠背部皮肤皮损处组织的情况；
[0012]4)通过统计学对相关数据进行处理，对结果进行分析。
[0013]优选的，所述步骤1)中，使用剃毛器和脱毛膏将所有雄性小鼠背部去毛形成2cm
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3cm暴露区域，然后再涂药膏。
[0014]优选的，所述步骤1)中，正常组以62.5mg凡士林涂抹背部；模型对照组以62.5mg 5％咪喹莫特涂抹背部；鸭嘴花碱对照组在暴露区外涂62.5mg 5％咪喹莫特软膏；阳性药对照组在暴露区外涂62.5mg 5％咪喹莫特软膏。
[0015]优选的，所述步骤3)中，依据PASI评分标准进行PASI评分，因皮损面积均为背部，不予考虑面积百分比，记录小鼠皮损处红斑、表皮脱屑及浸润程度分别记0
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4分，小鼠皮损指标总积分按照红斑、表皮脱屑和板块肥厚三者之和。
[0016]优选的，所述步骤3)中，关于动物取材及HE染色，在末次给药1h后，各组小鼠取血，每只1ml，取血后当即在4℃环境下离心1500r/min共5min，吸取出上层血清，
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20℃保存，用于细胞因子检测；接着把小鼠进行断颈处死，将背部皮肤取下一部分进行病理切片，然后固定在10％甲醛溶液中，进行石蜡包埋，切片，最后是苏木精
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伊红染色后；一部分背部皮肤取下进行组织匀浆，送公司进行组织内细胞因子的检测。通过玻片扫描进行观察小鼠HE染色的皮肤损伤组织其病理损伤状况。
[0017]优选的，所述步骤3)中，准确称量小鼠皮肤组织重量，按1:9比例加入PBS，用组织研磨仪充分匀浆。4℃、3000转离心20min，收集上清，按ELISA试剂盒说明书提示检测各组皮肤组织中IL
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25细胞因子的表达水平。
[0018]优选的，所述步骤3)中，麻醉小鼠摘取眼球，眼眶内取血，静置30min，于低温高速离心机离心10min，4℃、3000转离心，吸取上层血清，
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80℃保存。按ELISA试剂盒说明书提示检测各组外周血中IL
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23、IL
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25细胞因子的表达水平。
[0019]采用以上技术方案的有益效果是：通过本试验方法可以表明鸭嘴花中的生物活性成分能显著改善银屑病模型小鼠的病理症状，由免疫组化结果显示鸭嘴花碱可抑制炎性细胞因子的过度表达。对银屑病小鼠有治疗作用。
附图说明
[0020]图1鸭嘴花碱对银屑病小鼠皮肤组织外观影响本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，以雄性小鼠为实验对象，其特征在于，包括如下步骤：1)动物造模，使用咪喹莫特或普萘洛尔进行诱导，诱发雄性小鼠的背部表现出类似人类的银屑病症状；并对动物分组，分为正常组、模型对照组、3mg/kg阳性对照组和200mg/kg鸭嘴花碱组；2)动物给药，正常组和模型对照组以生理盐水灌胃，每日一次，连续5日；阳性药对照组以0.5％CMC
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Na溶解3mg/kg甲氨蝶呤灌胃，每日一次，连续5日；鸭嘴花碱对照组以0.5％CMC
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Na溶解200mg/kg鸭嘴花碱灌胃，每日一次，连续5日；3)通过PASI法评价皮损程度、动物取材及HE染色、酶联免疫吸收法检测小鼠外周血和皮肤匀浆中IL
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17A、IL
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23、IL
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25的表达水平，来记录鸭嘴花碱对银屑病小鼠背部皮肤皮损处组织的干预情况；4)通过统计学对相关数据进行处理，对结果进行分析。2.根据权利要求1所述的鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，其特征在于，所述步骤1)中，使用剃毛器和脱毛膏将所有雄性小鼠背部去毛形成2cm
×
3cm暴露区域，然后再涂药膏。3.根据权利要求2所述的鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，其特征在于，所述步骤1)中，正常组以62.5mg凡士林涂抹背部；模型对照组以62.5mg 5％咪喹莫特涂抹背部；鸭嘴花碱对照组在暴露区外涂62.5mg 5％咪喹莫特软膏；阳性药对照组在暴露区外涂62.5mg 5％咪喹莫特软膏。4.根据权利要求1所述的鸭嘴花碱干预银屑病的实验方法，其特征在于，所述步骤3)中，依据PASI评分标准进行PASI评分，因皮损面积均为背部，不予考虑面积百分比，记录...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿璐，孙赟，黄丰，杜雯霞，高杰，董臣庆，马方琪，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：