用于检测毒芹的核酸试剂、试剂盒及检测方法技术

本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种用于检测毒芹的核酸试剂、试剂盒及检测方法。其中，所述核酸试剂是针对毒芹的ITS1基因设计得到的，包括SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
用于检测毒芹的核酸试剂、试剂盒及检测方法


[0001]本公开涉及生物
，具体地，涉及一种用于检测毒芹的核酸试剂、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]毒芹属植物(学名：Cicuta virosa L.)为伞形科多年生草本植物，约有20个品种，我国现有毒芹原变种和宽叶毒芹两种。毒芹属植物的植株高可达70～100厘米，生于海拔400
‑
2900米的杂木林下、湿地或水沟边。毒芹属植物干草和鲜草均有毒，全株有毒，其中以根茎最毒，早春和晚秋期间毒性更大。因其外形与芹菜十分类似，常被误认为山芹、水芹等植物被采食而导致采食者中毒。毒芹的毒性成分为毒芹素(Cincutoxin)和毒芹碱(Cicutin)，中毒发作极快，主要导致中枢神经系统兴奋，有显著的致痉挛作用，中毒后可表现为恶心、腹胀、瞳孔扩大，严重者昏迷、痉挛，甚至因窒息而死亡。
[0003]目前，毒芹的鉴别多为形态学鉴别或利用色谱法进行毒性成分检测，然而，形态学鉴别非专业人士难以掌握，色谱法较为复杂且耗时较长。

技术实现思路

[0004]本公开的目的是提供一种特异性和灵敏度高的、快速、准确检测毒芹的核酸试剂、试剂盒及检测方法。
[0005]为了实现上述目的，本公开提供一种用于检测毒芹的核酸试剂，所述核酸试剂是针对毒芹的ITS1基因设计得到的。
[0006]可选的，所述核酸试剂包括SEQ ID NO.1
‑
2所示的引物和SEQ ID NO.3所示的探针。
[0007]可选的，SEQ ID NO.1所示的引物可以为上游引物CV
‑
F：TACGAAATCGGGCGCGGAAA；SEQ ID NO.2所示的引物可以为下游引物CV
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R：CCGTTGCCGAGAGTCGTTTGTG；SEQ ID NO.3所示的探针可以为：5'
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TTGCACGTGCCTTCCCGTACGCGGGAAG
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3'。
[0008]可选的，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有荧光淬灭基团。
[0009]可选的，所述荧光报告基团选自FAM基团、VIC基团、JOE基团和HEX基团，所述荧光淬灭基团选自TAMAR基团、BHQ1基团、BHQ2基团和MGB基团；
[0010]可选的，所述荧光报告基团为FAM基团，所述荧光淬灭基团为MGB基团。
[0011]本公开还提供了一种用于检测毒芹的试剂盒，该试剂盒含有上述任意一项所述的核酸试剂。
[0012]可选的，所述试剂盒还包括空白对照品、阴性对照品和阳性对照品。
[0013]可选的，空白对照品可以为ddH2O，阴性对照品可以为非毒芹成分基因组DNA，阳性对照品可以为含毒芹成分基因组DNA。
[0014]本公开还提供了上述任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测毒芹的试剂盒中
的用途。
[0015]本公开还提供了上述任意一项所述的核酸试剂或者试剂盒在检测毒芹或者样品中毒芹成分中的用途。
[0016]本公开还提供了一种用于检测毒芹的方法，该方法包括：
[0017]提取样品中的核酸，获得样品DNA；
[0018]利用上述任意一项所述的核酸试剂对所述样品DNA进行实时荧光PCR反应。
[0019]其中，所述样品可以为毒芹植物、毒芹植物加工品、含有毒芹的植物以及含有毒芹的植物加工品。可以采用煮沸法或者商品化试剂盒提取样品中的核酸，以得到样品DNA。
[0020]可选的，所述实时荧光PCR反应的反应体系可以为：
[0021]2×
taqman PCR Mix预混液试剂12.5μL；
[0022]上游引物(10μmol/L)0.6μL；
[0023]下游引物(10μmol/L)0.6μL；
[0024]探针(10μmol/L)0.6μL；
[0025]样品DNA(1
‑
100μmol/L)0.6μL；
[0026]ddH2O 10.1μL。
[0027]可选的，所述实时荧光PCR反应的条件可以为：
[0028]a：95℃10min；
[0029]b：95℃15s；
[0030]c：60℃20s，采集荧光信号；其中，a循环1个反应，b
‑
c循环40个反应。
[0031]可选的，所述方法还包括：
[0032]分别利用上述任意一项所述的核酸试剂对空白对照品、阴性对照品和阳性对照品进行实时荧光PCR反应，并进行如下的判别：
[0033]若空白对照品、阴性对照品和阳性对照品的检测结果成立，则所述样品DNA的检测结果有效；
[0034]若所述样品DNA的荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且Ct值≥40，则判定检测结果为阴性；
[0035]若所述样品DNA的荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且Ct值≤36，则判定检测结果为阳性；
[0036]若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且36＜Ct值＜40，则重新提取样品DNA并复检，若复检得到的扩增曲线呈S型，且Ct值＜40，则判定检测结果为阳性，否则为阴性。
[0037]可选的，对空白对照品进行实时荧光PCR反应时，以ddH2O为模板进行实时荧光PCR反应，荧光通道检测Ct值大于或等于40，则判定空白对照品的检测结果有效；
[0038]对阴性对照品进行实时荧光PCR反应时，以非毒芹成分基因组DNA为模板进行实时荧光PCR反应，荧光通道检测Ct值大于或等于40，则判定阴性对照品的检测结果有效；
[0039]对阳性对照品进行实时荧光PCR反应时，以含有毒芹成分基因组DNA为模板进行实时荧光反应，荧光通道检测Ct值小于或等于36，则判定阳性对照品的检测结果有效。
[0040]本公开的有益效果在于：
[0041]利用本公开提供的核酸试剂、试剂盒或者方法，能够快速、准确地实现待测样本中毒芹的检测或鉴别，具有良好的灵敏性和特异性。
[0042]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0043]为了更清楚地说明本公开具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本公开的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0044]图1是本公开实施例1检测所得毒芹样品的特异性荧光曲线图；
[0045]图2是本公开实施例2中各浓度的评估用模板的特异性荧光曲线图；
[0046]图3是本公开实施例2中绘制的标准曲线图；
[0047]图4是本公开实施例3中各特异性评估样品的特异性荧光曲线图。
具体实施方式
[0048]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本公开，并不局限于所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测毒芹的核酸试剂，其特征在于，所述核酸试剂是针对毒芹的ITS1基因设计得到的。2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其特征在于，所述核酸试剂包括SEQ ID NO.1
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2所示的引物和SEQ ID NO.3所示的探针。3.根据权利要求2所述的核酸试剂，其特征在于，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有荧光淬灭基团。4.根据权利要求3所述的核酸试剂，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM基团、VIC基团、JOE基团和HEX基团，所述荧光淬灭基团选自TAMAR基团、BHQ1基团、BHQ2基团和MGB基团；可选的，所述荧光报告基团为FAM基团，所述荧光淬灭基团为MGB基团。5.一种用于检测毒芹的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1～4中任意一项所述的核酸试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括空白对照品、阴性对照品和阳性对照品。7.权利要求1～4中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测毒芹的试剂盒中的用途。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张驭涛，郎楠，蒋绍锋，李海蛟，章轶哲，程博文，何仟，张宏顺，尹萸，袁媛，周静，马沛滨，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，
类型：发明
国别省市：