一种神经保护活性多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种神经保护活性多肽及其应用。所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述多肽的应用为在制备治疗脑部神经损伤及其后遗症药物中的应用。本发明专利技术从大绿臭蛙皮肤分泌物中获得了一种具有神经保护活性的多肽OL

【技术实现步骤摘要】
一种神经保护活性多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种神经保护活性多肽及其应用。

技术介绍

[0002]脑卒中（中风）是一种急性脑血管疾病，是许多人类死亡和永久残疾的原因之一。近年来，随着临床诊断和治疗的进展，中风死亡率显著降低。然而，根据世界卫生组织的数据，三分之一的中风患者可能会永久残疾。这种高致残率不仅降低了患者的生活质量，还增加了他们的家庭和社会负担。
[0003]大多数中风病例被归类为缺血性中风（约80%）。这种急性疾病的治疗主要依赖于脑血流的早期恢复（再灌注），以保存低灌注脑组织并限制神经功能障碍。因此，再灌注被认为是治疗缺血性卒中最有效的方法。目前，美国食品和药物管理局只批准了两种中风治疗方法，即溶解闭塞性血栓的溶栓剂（组织纤溶酶原激活剂）和直接清除脑血管血栓。然而，这两种方法有严格的适应证，只有少数患者能够从早期治疗中获益。因此，缺血/再灌注对于大多数缺血性卒中患者中仍然是一个相当大的挑战，并可能导致血脑屏障损伤、脑水肿、神经功能缺损，甚至毁灭性脑出血。
[0004]近年来，两栖动物作为一种潜在的天然药物资源，在生物医学领域引起了广泛关注。研究人员已经获得了多种具有新颖结构和独特功能的两栖类衍生肽分子，包括具有创伤愈合、降血糖、抗菌、镇痛和抗氧化特性和活性的肽。然而，只有少数从两栖动物皮肤中获得的神经保护肽被报道。
[0005]本专利技术旨在提供一种结构简单、体内和体外均表现出促神经损伤修复的神经保护活性多肽。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种多肽，本专利技术的第二目的是提供编码所述多肽的核酸分子，本专利技术的第三目的是提供所述多肽的应用。
[0007]本专利技术的第一目的是这样实现的，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术的第二目的是这样实现的，所述核酸分子为DNA分子或RNA分子；所述DNA分子为cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述RNA分子为mRNA或hnRNA。
[0009]本专利技术的第三目的是这样实现的，所述应用为该多肽在制备治疗脑部神经损伤及其后遗症药物中的应用。
[0010]本专利技术的有益效果为：本专利技术从大绿臭蛙皮肤分泌物中获得了一种具有神经保护活性的多肽OL
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FS13，该多肽结构简单，且在低剂量下于体内和体外均表现出较强的促神经损伤修复活性，具有较高的临床应用价值，也为神经保护药物的开发提供了新的方向。
附图说明
[0011]图1为本专利技术编码抗损伤多肽OA
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FS13的cDNA序列图；图2为本专利技术神经保护肽OL
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FS13在氧糖剥夺/复氧细胞模型中的神经保护活性图；图3为本专利技术神经保护肽OL
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FS13的动物模型抗脑缺血再灌注损伤活性图：A. TTC染色；B. 脑梗死面积量化；C. 各组大鼠的神经行为评分。
具体实施方式
[0012]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的详细说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或改进，均落入本专利技术的保护范围。
[0013]本专利技术提供了一种多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0014]本专利技术进一步提供了一种编码所述多肽的核酸分子。
[0015]所述核酸分子为DNA分子或RNA分子；所述DNA分子为cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述RNA分子为mRNA或hnRNA。
[0016]本专利技术进一步含有所述核酸分子的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系。
[0017]本专利技术还提供了所述多肽在制备治疗脑部神经损伤及其后遗症药物中的应用。
[0018]本专利技术另外提供了一种药物组合物，包含作为活性剂的所述多肽及药学上有效的载体。
[0019]实施例1神经保护肽OL
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FS13的制备第一步：成体大绿臭蛙来自中国云南省。大绿臭蛙被饲养在一个 21 cm
ꢀ×
21 cm
ꢀ×
15 cm的饲养缸中 7 天以适应环境，定期换水并以面包虫作为饲料喂食。样品来自大绿臭蛙的皮肤。再用去离子水冲洗大绿臭蛙皮肤后，通过捣毁脑髓的方式快速处死并获取其皮肤。
[0020]第二步：大绿臭蛙cDNA文库的构建如下。为筛选编码成熟OL
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FS13的cDNA，聚合酶链反应（PCR）模板来自以SMART技术合成的cDNA以及BGI公司（中国）合成的5'PCR引物（5'
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CCAAA（G/C）ATGTTCACC（T/A）TGAAGAA
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3'）和3'PCR引物（5'ATTCAGGCCGAGGCC GACA TG
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3'）。获取的PCR产物被克隆到大肠杆菌DH5a活性细胞中，并使用Applied Biosystems DNA测序仪（美国加利福尼亚州福斯特市ABI 3730XL）进行DNA测序，结果如图1所示，cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，cDNA序列全长311bd(含有311个碱基)，编码58个氨基酸残基，成熟肽序列为“FSLLLTWWRRRVC”（图1中碱基序列下划线部分）。通过检索，该肽是一种新肽，将其命名为OL
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FS13。
[0021]第三步：采用常规化学合成或基因表达的方式制备得到OL
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FS13。
[0022]实施例2多肽OL
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FS13的活性检测通过体外氧糖剥夺/复氧实验以及体内缺血再灌注实验对实施例1制备的多肽OL
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FS13进行活性检测。
[0023]一、体外神经保护活性检测试验方法：体外细胞氧糖剥夺/复氧实验PC12细胞于含5%CO2的37
ꢀ°
C恒温培养箱中培养。选择添加1%抗生素（100 U/mL 青霉素，100 U/mL链霉素）和10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养培养。采用96孔板培养
PC12细胞 (5000个/孔)。细胞贴壁后，用PBS清洗PC12细胞两次后用无糖DMEM代替原培养基。细胞被分为两组，阴性对照组在在通用环境下于原培养基中培养，其余组别被置于95%N2和5%CO2的环境中。4 h后复氧，将模型组（PBS）以及给药组（OL
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FS13）PC12细胞的无糖DMEM培养基替换为原完全培养基。
[0024]细胞复氧后，模型组和给药组分别使用PBS以及不同浓度的OL
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FS13进行干预并继续培养24 h。按照制造商提供的说明，向各孔加入CellTiter 96
®ꢀ
AQueous One Solution Assay并测定其在490 nm处的吸光度值。以阴性对照组为100%对各组细胞的活力进行计算。
[0025]结果：如图2所示，神经保护肽OL
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FS13在体外具有较强的促神经损伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种编码权利要求1所述多肽的核酸分子。3.根据权利要求2所述核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为DNA分子或RNA分子；所述DNA分子为cDNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨新旺，王滢，刘乃心，杨美凤，孙俊，李依林，王颖蕾，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：