一种检测抗乌头酸水合酶-IgG抗体的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测抗乌头酸水合酶

【技术实现步骤摘要】
一种检测抗乌头酸水合酶
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IgG抗体的检测试剂盒
[0001]本申请是申请号为202110742938.0，申请日为2021年7月1日，专利技术名称为一种检测抗乌头酸水合酶
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IgG抗体的检测试剂盒的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物医学
，涉及一种检测抗乌头酸水合酶
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IgG抗体的检测试剂盒。

技术介绍

[0003]原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)是多种因素引起肾小球基底膜通透性增加，进而血浆蛋白滤出增多，从尿液中丢失，并由此造成一系列病理改变的临床综合症。PNS是儿童常见的肾小球疾病，根据报道其年发病率为1.15～16.9/10,0000。病理类型表现为微小病变性肾病综合征(minimal change nephrotic syndrome,MCNS)是其中最常见的，依据PNS对于激素治疗的反应效果，分为激素敏感型(SSNS)、激素依赖型(SDNS)、激素耐药型(SRNS)。尽管绝大多数患儿对激素治疗反应敏感，预后良好，但仍有10％～20％的患儿对激素治疗的反应为依赖或耐药，若不进行其他药物干预治疗，可进展为肾小球硬化，最终进展为终末期肾病，严重影响患儿健康，家庭及社会难以承担沉重的经济负担。且该病的发病机制目前尚不十分清楚。PNS其临床症状通常表现为水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症以及高脂血症等，然而引起这些临床表现的病因非常复杂，给明确PNS的诊断带来困难。因此，若能够寻找到引起PNS确切的病因，那么就能够在病因上对PNS进行尽早诊断，从而尽早干预与治疗，这将具有重要的临床意义。
[0004]目前，临床上给予激素和免疫抑制剂进行治疗的绝大多数PNS患儿病情能有所好转，间接地提示了PNS与患者的自身免疫存在密切的联系。众所周知，B淋巴细胞在体液免疫中发挥着最为重要的作用，然而PNS患儿肾脏的局部在过去数年间缺乏抗体的沉积，因此忽视了B淋巴细胞介导的体液免疫在PNS疾病中的作用。近年来的研究发现，在复发的激素敏感型肾病综合征患者中发现外周血中的B细胞的数量显著增加，被活化的B细胞在激素依赖型肾病综合征患者体内大量增加，然而对于处在缓解期的激素依赖型肾病综合征患者体内，其B细胞数量明显下降，提示B淋巴细胞功能异常在PNS中扮演着重要的作用。近些年，全球多地的研究发现，利用特异性针对CD20+B细胞的利妥昔单抗治疗儿童难治性肾病综合征中取得了显著的治疗效果。然而利用利妥昔单抗治疗SDNS的过程中发现，其清除B细胞的功效能维持5个月左右，但是在6，7个月的时候，由于B细胞数量回升患者的病情随即复发。由此提示PNS患者体内发生病理性的B细胞克隆，如果可以鉴别和精准的清除这些病理性的B细胞克隆，那么对于PNS病情的恢复是有利的，同样也减少了利用利妥昔单抗等方法无差别的清除B细胞造成体液免疫缺陷的风险。
[0005]然而，迄今为止，PNS患儿体内病理性B细胞针对的靶抗原仍然不是很清楚。从病理特征上来说，微小病变型肾病或局灶节段性肾小球硬化被认为是由于足细胞功能丧失或改变，导致大量蛋白尿的足细胞病。足细胞为肾脏肾小球上皮细胞，附着在肾小球的基底膜的
外侧。它是阻止蛋白质丢失的最后屏障，足细胞损伤通常会引起大量的蛋白尿。
[0006]乌头酸酶(aconitate hydratase)是位于线粒体中的必需酶，在三羧酸循环中催化柠檬酸和异柠檬酸的相互转化。现有的研究表明，aconitate hydratase的表达可能会在某些类型的癌症中发生改变。Wang等对胃癌标本进行实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹和免疫组织化学染色以测量肿瘤组织和匹配的相邻非肿瘤组织中的aconitate hydratase表达。结果显示，与匹配的相邻非肿瘤组织相比，胃癌组织中aconitate hydratase的表达显着下调，并与胃癌的TNM分期相关，aconitate hydratase可能在胃癌中发挥重要作用，并可能作为预后生物标志物(Wang,et al.Decreased expression of the mitochondrial metabolic enzyme aconitase(aconitate hydratase)is associated with poor prognosis in gastric cancer.Med Oncol,2013Jun；30(2):552.)。Aconitate hydratase的活性在前列腺癌中升高，在直肠癌中降低。最近一项关于乳腺癌的研究发现，aconitate hydratase表达降低，可能是通过增加细胞中酶的水平抑制细胞增殖，这或与氧化代谢增强有关(Fabio Ciccarone,et al.Aconitase 2inhibits the proliferation of MCF
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7cells promoting mitochondrial oxidative metabolism and ROS/FoxO1
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mediated autophagic response.Br J Cancer,2020Jan；122(2):182
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193.)。
[0007]但是，目前关于aconitate hydratase与肾病综合征关系未见报道。另外，在现有技术中，通过检测血清抗aconitate hydratase
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IgG抗体鉴别出自身免疫性肾病综合征的研究目前为空白。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种检测血清抗aconitate hydratase
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IgG自身抗体的检测试剂盒，所述试剂盒通过与aconitate hydratase抗原蛋白(特别根据序列识别号SEQ ID NO.1所示)的免疫反应，对被检测样品中的抗体进行检测。
[0009]所述试剂盒包括：aconitate hydratase抗原蛋白，标记抗体液(酶标记或化学发光剂标记的抗人IgG溶液)，包被aconitate hydratase抗原的固相载体，样本稀释液，抗体稀释液，抗原稀释液，底物显色液，洗涤液，终止液，标准品，阳性质控品，以及阳性质控品。
[0010]所述aconitate hydratase抗原蛋白的序列如SEQ ID NO：1所示：
[0011]MAPYSLLVTRLQKALGVRQYHVASVLCQRAKVAMSHFEPNEYIHYDLLEKNINIVRKRLNRPLTLSEKIVYGHLDDPASQEIERGKSYLRLRPDRVAMQDATAQMAMLQFISSGLSKVAVPSTIHCDHLIEAQVGGEKDLRRAKDINQEVYNFLATAGAKYGVGFWKPGSGIIHQIILENYAYPGVLLIGTDSHTPNGGGLGGICIGVGGADAVDVMAGIPWELKCPKVIGVKLTGSLSGWSSPKDVILKVAGILTV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的乌头酸水合酶(aconitate hydratase)多肽或其抗体结合片段在制备肾病综合征检测试剂或试剂盒方面的用途；其中，所述抗原抗体复合物包括抗乌头酸水合酶
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IgG抗体(抗aconitate hydratase
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IgG抗体)复合物。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述肾病综合征是自身免疫性肾病综合征。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述肾病综合征是儿童自身免疫性肾病综合征。4.根据权利要求1所述的用途，其中所述乌头酸水合酶(aconitate hydratase)抗体结合片段序列如SEQ ID NO.1所示。5.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是血清。6.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是没有进行免疫治疗之前患者的生物样品。7.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的乌头酸水合酶(aconitate hydratase)多肽或抗体结合片段在制备用于相对于紫癜性肾炎、过敏性紫癜、IgA肾病特异性检测肾病综合征的试剂或试剂盒方面的用途；其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，张俊峰，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：