检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β

【技术实现步骤摘要】
检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白
β
‑
IgG抗体的试剂盒
[0001]本申请是申请号为202110742935.7，申请日为2021年7月1日，专利技术名称为检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG抗体的试剂盒的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物医学
，涉及检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG 抗体的试剂盒，是一种用于检测患者样本中的抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG 抗体的试剂盒。

技术介绍

[0003]自身免疫性疾病是由人体对正常存在于体内的物质和组织的异常免疫反应引起的疾病。可能仅限于某些器官，涉及不同位置的特定组织，也可能是全身性的。自身免疫性疾病的治疗通常涉及免疫抑制，即降低免疫反应的药物。
[0004]原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的特征是患者水肿，尿液中蛋白质增加，血液中蛋白质减少，血液中脂肪增加(Roth KS,Amaker BH, Chan JC:Nephrotic syndrome:pathogenesis and management.Pediatr Rev(2002) 23(7):237
‑
48)。90％以上儿童原发性肾病综合征的病理类型是以足细胞损伤为主要特征的微小病变或局灶节段性肾小球硬化。足细胞的炎症会增加对蛋白质的渗透性，导致分泌的蛋白质增加。当尿液中排泄的蛋白质量超过肝脏的补偿能力时，血液中检测到的蛋白质就更少了，特别是白蛋白，而白蛋白占了循环蛋白的大部分。随着血液中蛋白质的减少，血液中的渗透压会降低。由于组织中的渗透压保持不变，因此会导致水肿。肾上腺分泌醛固酮会加剧这种情况，它是根据循环血液的减少而分泌的，导致钠和水滞留。高脂血症被认为是肝脏活动增加的结果(Brinkkoetter PT,Ising C,Benzing T:The role of the podocyte inalbumin filtration.Nat Rev Nephrol(2013)9(6):328
‑
36)。已有证据表明，儿童绝大多数激素敏感型肾病综合征和2/3的激素耐药型肾病综合征的发病与自身免疫功能紊乱有关(Li J,Wang L,Wan L,Lin T,Zhao W,Cui H,et al:Mutationalspectrum and novel candidate genes in Chinese children with sporadicsteroid
‑
resistant nephrotic syndrome.Pediatr Res(2019)85(6):816
‑
21)。我们在自身免疫性肾病综合征患者中筛查到针对丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白 (F
‑
actin
‑
capping protein subunit beta)的自身抗体。丝状肌动蛋白成帽蛋白β是F
‑
肌动蛋白加帽蛋白家族的成员。该基因编码倒钩末端肌动蛋白结合蛋白的β亚基。该蛋白质通过覆盖生长的肌动蛋白丝的带刺末端来调节肌动蛋白丝的生长。在肌肉中，丝状肌动蛋白成帽蛋白β与肌动蛋白的相互作用在肌原纤维生成过程中至关重要(Pyle WG,Hart MC,Cooper JA,Sumandea MP,de TombePP,Solaro RJ.Actin capping protein:an essential element in protein kinasesignaling to the myofilaments.Circulation Research.(2002)90(12):1299
–
306)。
[0005]但目前丝状肌动蛋白成帽蛋白β和抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β的自身抗体在泌尿系统疾病，特别是在肾病综合征中未有报道。另外现有的技术中，没有涉及基于靶点丝状肌动蛋白成帽蛋白β或其自身抗体作为一种血清学标志物在自身免疫性肾病综合征中的应
用。通过检测血清抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG抗体鉴别出自身免疫性肾病综合征的研究是空白的。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG抗体的试剂盒，是一种基于靶点丝状肌动蛋白成帽蛋白β及其相应自身抗体的检测试剂盒。所述试剂盒可通过与抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β(特别根据序列识别号SEQ ID NO.1所示)的抗原抗体反应对来自组织(肾活检组织)或体液(特别是血液、血浆、血清)中的自身抗体进行检测。
[0007]本专利技术涉及用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β自身抗体的检测试剂盒，该试剂盒包含抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、终止液、标准品、阳性质控品、阴性质控品。
[0008]根据本专利技术，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β可表达于细菌如大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞中。
[0009]根据本专利技术，抗原蛋白可以是融合蛋白，使用具有某些生物学或物理功能的标签，这些标签的存在有利于抗原蛋白纯化，固定，沉淀或鉴定本专利技术多肽的其他序列基序或多肽。在一个更优选的实施方案中，标签是能够特异性结合配体的序列或结构域，例如，选自：GST标签、c
‑
Myc标签、His标签、Flag 标签或生物素标签。
[0010]根据本专利技术，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β固定于固相载体上，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜、磁珠、酶标微孔板。
[0011]本专利技术一个实施方案中，所述标准品和阳性质控品，标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽IgG或其片段、或从病人血清中提取抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体作为阳性质控品和标准品，健康体检者血清为阴性质控品。
[0012]根据本专利技术，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β经Ni柱亲和层析、分子筛层析、离子交换层析、疏水柱纯化。
[0013]本文中的样品是待检的体液或组织的样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰和胸腔积液。此外，在分离或纯化程序之后，例如将全血分离成血清或血浆成分，将更容易分析某些测试样品。因此，在本专利技术的优选实施方案中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品或任何上述样品的提取物。优选地，样品是血液样品，更优选血清样品或血浆样品。
[0014]所述检测试剂盒还包括底物显色剂、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、洗涤液和终止液。所述底物显色剂为TMB、BCIP、AMPPD、4
‑
MUP；所述抗原稀释液为pH7.4 1x PBS、163mM NaCL、1％TritonX
‑
100；所述样品稀释缓冲液为pH7.4含有10％BSA的0.01M PBS缓冲液；所述抗体稀释液为取1MD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F
‑
actin
‑
capping protein subunit beta)多肽或其抗体结合片段在制备肾病综合征检测试剂或试剂盒方面的用途；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG抗体(抗F
‑
actin
‑
capping protein subunit beta
‑
IgG抗体)复合物。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述肾病综合征是自身免疫性肾病综合征。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述肾病综合征是儿童自身免疫性肾病综合征。4.根据权利要求1所述的用途，其中所述丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体结合片段序列如SEQ ID NO.1所示。5.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是血清。6.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是没有进行免疫治疗之前患者的生物样品。7.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F
‑
actin
‑
capping protein subunit beta)多肽或抗体结合片段在制备用于相对于紫癜性肾炎、过敏性紫癜、IgA肾病特异性检测肾病综合征的试剂或试剂盒方面的用途；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β
‑
IgG抗体(抗F
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，周希，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：