一种鲤鱼脑细胞系及其应用制造技术

技术编号:34911497 阅读:22 留言:0更新日期:2022-09-15 07:00
本发明专利技术公开了一种鲤鱼脑细胞系及其应用,涉及水生生物细胞技术领域,本发明专利技术构建的鲤鱼脑细胞系,保藏号为:CCTCC NO:C202256,其可以连续传代,现已连续传至60代次以上,可提供大量的鲤鱼脑来源细胞,且细胞能维持良好、稳定的生长状态,可以对其进行冷冻保存,经连续多次传代后对锦鲤疱疹病毒和蛙虹彩病毒具有敏感性,可应用于KHV、LMBV的分离培养、病原特性研究以及相关疫苗的研制。研究以及相关疫苗的研制。研究以及相关疫苗的研制。

【技术实现步骤摘要】
一种鲤鱼脑细胞系及其应用


[0001]本专利技术涉及水生生物细胞
,具体而言,涉及一种鲤鱼脑细胞 系及其应用。

技术介绍

[0002]鲤鱼,中文别名鲤拐子、鲤子、毛子或红鱼。鲤科(Cyprinidae)中粗 强的褐色鱼,学名Cyprinus carpio。原产亚洲,后引进欧洲、北美以及其他 地区,杂食性。
[0003]锦鲤疱疹病毒病由锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus,KHV)引起,主要 感染锦鲤和鲤鱼,是锦鲤和鲤鱼养殖生产中发生的一种高致病性疾病,发 病率和致死率均可高达80%

100%。KHV非常特殊,只能在源自于原始宿 主的细胞中增殖,即在锦鲤组织细胞中增殖,很难在鱼类病毒分离常用的 细胞系(如EPC)中增殖。
[0004]建立来源于锦鲤的细胞系,是进行锦鲤疱疹病毒的分离与鉴定,研究 其致病机理,疫苗制备和免疫预防技术的重要基础。获取不同种属来源的 细胞系将有助于丰富和完善对KHV的病毒学、毒理、生理、分子遗传学等 的研究。现有能够用于KHV分离培养的细胞系相对匮乏,获得的病毒滴度 也相对有限。
[0005]鉴于此,特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种鲤鱼脑细胞系及其应用。
[0007]本专利技术是这样实现的:
[0008]第一方面,本专利技术实施例提供了一种鲤鱼脑细胞系,其保藏号为:CCTCC NO:C202256。
[0009]第二方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 锦鲤疱疹病毒KHV培养中的应用。
[0010]第三方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 分离锦鲤疱疹病毒KHV分离中的应用。
[0011]第四方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 制备锦鲤疱疹病毒KHV疫苗中的应用。
[0012]第五方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 制备用于检测锦鲤疱疹病毒KHV的产品中的应用。
[0013]第六方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 蛙虹彩病毒LMBV培养中的应用。
[0014]第七方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 分离蛙虹彩病毒LMBV分离中的应用。
[0015]第八方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 制备蛙虹彩病毒LMBV疫苗中的应用。
[0016]第九方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 制备用于检测蛙虹彩病毒LMBV的产品中的应用。
[0017]第十方面,本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的鲤鱼脑细胞系在 构建用于药物筛选或药物评价中的应用,所述药物为用于防治锦鲤疱疹病 毒KHV和/或蛙虹彩病毒LMBV感染引发的相关疾病。
[0018]本专利技术具有以下有益效果:
[0019]本专利技术构建了一种鲤鱼脑细胞系,保藏号为:CCTCC NO:C202256, 其可以连续传代,现已连续传至60代次以上,可提供大量的鲤鱼脑来源细 胞,且细胞能维持良好、稳定的生长状态,可以对其进行冷冻保存。
[0020]本专利技术构建的鲤鱼脑细胞系,经连续多次传代后对锦鲤疱疹病毒(KHV) 依旧具有敏感性,接毒后20℃培养3d可观察到细胞病变(CPE),7天细胞 全部病变,10

14天细胞脱落死亡,经反复冻融两次后,取离心上清200μl 提取病毒DNA后经qPCR检测,Cq值为16左右,因此本专利技术的细胞系可 以直接应用于KHV病原特性研究及其疫苗的研制。
[0021]此外,本专利技术构建的锦鲤脑细胞系同样其对蛙虹彩病毒LMBV敏感, 接毒后24℃培养,3d可见50%细胞死亡,7d时基本上所有细胞脱落死亡, 检测此时的病毒滴度为109TCID
50
/ml,可用于LMBV病原特性研究及疫苗 的研制与生产。
[0022]综上,本专利技术构建的鲤鱼脑细胞系具有广阔的应用前景,可应用于KHV、 LMBV的病原特性研究以及相关疫苗的研制。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案,下面将对实施例中所需 要使用的附图作简单地介绍,应当理解,以下附图仅示出了本专利技术的某些 实施例,因此不应被看作是对范围的限定,对于本领域普通技术人员来讲, 在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0024]图1中A为物镜4X时的视野图;B为物镜10X时的视野图;
[0025]图2为P4代次的鲤鱼脑细胞系;
[0026]图3为P13代次的鲤鱼脑细胞;
[0027]图4为P20代次的鲤鱼脑细胞,A为低倍镜下细胞形态(图中标尺为 100μm);B为高倍镜下的细胞形态(图中标尺为100μm);
[0028]图5中A为正常鲤鱼脑细胞;B为感染KHV病毒6天的鲤鱼脑细胞; C为感染KHV病毒14天的鲤鱼脑细胞;
[0029]图6为病毒DNA的qPCR反应曲线(曲线从左到右依次为病毒样本(重 复检测),阳性对照);
[0030]图7中A为正常鲤鱼脑细胞;B为感染LMBV病毒3天的鲤鱼脑细胞; C为感染LMBV病毒7天的鲤鱼脑细胞。
具体实施方式
[0031]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发 明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件 者,按照常规条件或制造商
建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产 厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0032]本专利技术实施例提供了一种鲤鱼脑细胞系(CCB63),其保藏号为:CCTCC NO:C202256,该细胞系的保藏信息如下:
[0033]保藏单位:中国典型培养物保藏中心,地址:中国.武汉,武汉大学,保 藏日期:2022年2月18日,分类命名为鲤鱼脑组织细胞CCB63,保藏编 号:CCTCC NO:C202256。
[0034]鲤鱼脑细胞系CCB63的构建包括以下步骤:(a)取鲤鱼苗的脑组织, 洗涤、剪碎、胰酶消化;所述胰酶消化为:向剪碎的鲤鱼苗脑细胞中加入 胰酶,消化后离心弃上清,重悬;(b)将步骤(a)消化得到的细胞采用含 胎牛血清的L15培养基培养,得到原代鲤鱼脑细胞;(c)将原代鲤鱼脑细 胞,传代超过50代,得到鲤鱼脑细胞系CCB63。
[0035]鲤鱼脑细胞系CCB63,首次传代细胞在8

16h可贴壁生长,大约3

5d 能生长成汇合细胞单层,细胞呈典型的成纤维样;连续传代15次后,传代 细胞约3d即可汇合成细胞单层,5d可形成致密细胞单层。CCB63细胞经 液氮冷冻后复苏,通过台盼蓝染色计数,约90%的细胞具有细胞活性,并 保持原有生长状态,目前该细胞已经稳定传代60多次。
[0036]具体地,制备得到原代鲤鱼脑细胞的条件为:用含EDTA的0.25%胰 酶在25
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲤鱼脑细胞系,其特征在于,其保藏号为:CCTCC NO:C202256。2.如权利要求1所述的鲤鱼脑细胞系在锦鲤疱疹病毒KHV培养中的应用。3.如权利要求1所述的鲤鱼脑细胞系在分离锦鲤疱疹病毒KHV分离中的应用。4.如权利要求1所述的鲤鱼脑细胞系在制备锦鲤疱疹病毒KHV疫苗中的应用。5.如权利要求1所述的鲤鱼脑细胞系在制备用于检测锦鲤疱疹病毒KHV的产品中的应用。6.如权利要求1所述的鲤鱼脑细胞系在蛙虹彩病毒LM...

【专利技术属性】
技术研发人员:张永林婧楠车钟杰宋统香高原陈璐
申请(专利权)人:宁波三生生物科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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