本发明专利技术公开了一种肉毒中毒小鼠呼气分析模型,在小鼠呼气成分中发现了7种与肉毒毒素密切相关的组分,分别为包括丙酮、乙醇、2
【技术实现步骤摘要】
一种肉毒中毒小鼠呼气分析模型
[0001]本专利技术涉及生物
,具体的说,涉及一种肉毒中毒小鼠呼气分析模型。
技术介绍
[0002]肉毒毒素是由一类由厌氧肉毒梭菌(Clostridium botulinum)产生的烈性蛋白类神经毒素,是迄今所发现的生物毒素(包括化学毒物)中毒性最强的物质。目前所知的肉毒毒素在人体中的作用机制是,能够在人体中通过阻断突触小泡中神经递质乙酰胆碱的释放,使神经和肌肉失去兴奋性和传导性,引起肌肉松弛性麻痹,严重时麻痹可累及呼吸肌,最终因呼吸衰竭致人死亡。近些年,报道的肉毒中毒病例数逐年升高,每年可达200例以上,主要包括食源性和医源性中毒。食源性中毒是传统的自然中毒途径,随着医疗美容行业的发展,通过注射肉毒毒素进行除皱美容的人士越来越多,但不规范的治疗以及错误用量,导致医源性中毒的病例日益增多,每年可多达上百例。
[0003]目前,临床上对于肉毒中毒病人的诊断主要以临床症状分析与实验室诊断相结合为主。实验室诊断分为小鼠生物实验法、免疫学检测方法、基于生物传感器的检测方法、细胞学检测法、质谱法等。迄今为止,小鼠生物试验法是中毒检出的金标准,而过去30年中,免疫学方法中的酶联免疫吸附实验(ELISA)是被最广泛应用的肉毒毒素血清型鉴定和检测的方法。但由于中毒患者临床表现与格林-巴利综合征、重症肌无力等其他神经类疾病相似,加上实验室检测普遍耗时长、对实验人员要求较高,对患者做出最终诊断耗时较长并且容易做出错误诊断而耽误最佳治疗时间导致患者死亡。所以我们希望得到一种更加迅速、灵敏度高、特异性强并能直接适用于临床的诊断新方法。
[0004]在机体中,细胞在维持细胞膜完整性、进行能量代谢的过程中会产生许多内源性的挥发性有机化合物(VOC
S
),这些代谢物通过汗液、血液、尿液、粪便和呼出的气体等在人体中不断释放出来,并可在特定情况下以气态形式被捕获和检测到。其中具有特征性的成分可以被认为是人体氧化应激反应后产生的典型标志物。标志物浓度与人体受到氧化性损伤的程度相关,通过检测人体中的挥发性有机物的成分及含量,可以反应人体新陈代谢的过程,也可以判断机体的生理状况和病理情况。近年来由于分析领域的飞速发展,对疾病标志物的研究也越发增多,其中以研究呼出气体中VOCs 在疾病诊断价值的研究最多。呼出气检测因为其高效性、无创性、能够适用于远程医疗,而受到极大关注,成为一种疾病诊断的新方式。
技术实现思路
[0005]本专利技术提供一种肉毒中毒小鼠呼气分析模型,在小鼠呼气成分中发现了7种与肉毒毒素密切相关的组分,分别为包括丙酮、乙醇、2
‑
戊酮、正丁醇、苯乙烯、D
‑
甘露醇和3
‑
甲基
‑
3丁烯
‑1‑
醇。。
[0006]本专利技术提供一种用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的标志物组合物,所述标志物组合物包括丙酮、乙醇、2
‑
戊酮、正丁醇、苯乙烯、D
‑
甘露醇和3
‑
甲基
‑
3丁烯
‑1‑ꢀ
醇。
[0007]上述的标志物组合物在制备肉毒毒素中毒检测或者辅助检测产品中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
[0008]其中,检测或者辅助检测为通过质谱分析方法检测被试者呼气中的权利要求1所述的标志物组合物的含量。
[0009]其中,所述产品为检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的试剂、装置或者系统。
[0010]所述的标志物组合物作为肉毒毒素中毒的标志物的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
[0011]本专利技术提供一种用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的标志物组合物的系统,包括呼气收集装置、固相微萃取装置和气相色谱
‑
质谱仪,所述呼气收集装置收集到的呼气样本经固相微萃取装置浓缩后递送至气相色谱
‑
质谱仪检测用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的标志物组合物的含量;所述标志物组合物包括丙酮、乙醇、2
‑
戊酮、正丁醇、苯乙烯、D
‑
甘露醇和3
‑
甲基
‑
3丁烯
‑1‑
醇。
[0012]本专利技术通过一种肉毒毒素中毒小鼠呼气分析模型的制备方法,包括:
[0013]1)将肉毒毒素通过灌胃或者腹腔注射的方式送给小鼠,得到;
[0014]2)将小鼠放置于密封的呼气收集装置中;
[0015]3)集气后用固相微萃取装置采气;
[0016]4)采集好气体的萃取头进行气相色谱
‑
质谱仪分析成分和含量。
[0017]其中,步骤1)中的灌胃方法为取肉毒毒素,用牛奶进行1:1稀释,取0.3ml 对小鼠灌胃,两小时内间隔30min灌胃0.3ml,共进行灌胃4次。
[0018]其中,步骤1)中腹腔注射的方法为取肉毒毒素,稀释10
‑2后,取0.5ml腹腔注射小鼠。
[0019]其中,步骤3)中的集气时间为1.5
‑
2h,采气时间为0.5h。
[0020]使用本法明的标志物组合物进行肉毒毒素判定标准为:
[0021]当待测样本中标志物组合物的含量同时发生变化,并且丙酮与苯乙烯增高,乙醇、 2
‑
戊酮、正丁醇、3
‑
甲基
‑3‑
丁烯
‑1‑
醇、D
‑
甘露醇降低,判定为灌胃中毒。上述图和表中的空白是指未中毒小鼠的呼气量平均值。(中毒/空白≥1.5表示中毒后含量增高,中毒/空白≤0.8表示中毒后含量降低。)
[0022]当待测样本中标志物组合物的含量同时发生变化且乙醇降低,其余6种物质增高判定为注射肉毒毒素中毒。上述图和表中的空白是指未中毒小鼠的呼气量平均值。(中毒/空白≥1.5表示中毒后含量增高,中毒/空白≤0.8表示中毒后含量降低。)
[0023]本专利技术的有效果在于,提供一种肉毒毒素中毒小鼠呼气分析模型的构建方法和与肉毒毒素中毒相关的标志物组合,为快速鉴定肉毒毒素中毒提供了依据。
附图说明
[0024]图1为注射肉毒中毒小鼠前后呼出气体成分分析色谱图。
[0025]图2为灌胃肉毒中毒小鼠前后呼出气体成分分析色谱图。
[0026]图3为注射肉毒中毒小鼠于空白小鼠的呼气中7种VOC含量的平均值比较图。
[0027]图4为灌胃肉毒中毒小鼠于空白小鼠的呼气中7种VOC含量的平均值比较图。
[0028]图5为注射中毒与缺氧窒息小鼠呼出气体成分分析色谱图。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本专利技术,而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南,并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0030]下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的标志物组合物,其特征在于,所述标志物组合物包括丙酮、乙醇、2
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戊酮、正丁醇、苯乙烯、D
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甘露醇和3
‑
甲基
‑
3丁烯
‑1‑
醇。2.权利要求1所述的标志物组合物在制备肉毒毒素中毒检测或者辅助检测产品中的应用。3.根据权利要求书2所述的应用,其特征在于,检测或者辅助检测为通过质谱分析方法检测被试者呼气中的权利要求1所述的标志物组合物的含量。4.根据权利要求书2或3所述的应用,其特征在于,所述产品为检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的试剂、装置或者系统。5.权利要求1所述的标志物组合物作为肉毒毒素中毒的标志物的应用。6.一种用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒的标志物组合物的系统,其特征在于,包括呼气收集装置、固相微萃取装置和气相色谱
‑
质谱仪,所述呼气收集装置收集到的呼气样本经固相微萃取装置浓缩后递送至气相色谱
‑
质谱仪检测用于检测或者辅助检测肉毒毒素中毒...
【专利技术属性】
技术研发人员:高姗,王菁,胡宸艺,金涵,白雪欣,李岩伟,康琳,李佳欣,王景林,辛文文,
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院,
类型:发明
国别省市:
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