一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法技术

本申请涉及狂犬病疫苗的技术领域，具体公开了一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，具体包括以下步骤：（1）在病毒灭活液中加入DNA去除液，搅拌处理，获得处理液；（2）采用柱色谱的方法对步骤（1）中的处理液进行纯化，获得病毒纯化液；（3）对步骤（2）中的病毒纯化液进行冻干，获得人用狂犬病疫苗；其中，所述DNA去除液包括溶质和溶剂；所述溶质包括乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种。本申请提供的方法能够有效去除人用狂犬病疫苗中的残留DNA，同时保证病毒的回收率较高。同时保证病毒的回收率较高。

【技术实现步骤摘要】
一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法


[0001]本申请涉及狂犬病疫苗的
，具体涉及一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法。

技术介绍

[0002]冻干人用狂犬病疫苗以其在生产工艺、经济效益和质量等方面的综合优势，占据了我国的大部分狂犬病疫苗市场。目前，人用狂犬病疫苗的生产需要经过Vero细胞培养、病毒增殖、病毒收获和浓缩、病毒灭活以及纯化等过程。然而，在细胞培养和病毒增殖的过程中，会产生游离的宿主DNA及与病毒蛋白结合的宿主DNA。这些残留DNA会随疫苗一起被注入到人体内，使得人体由于异源物质的注入引起不良反应。
[0003]相关技术中最广泛的DNA去除方式有离子交换层析、硫酸鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法。其中，离子交换层析方法利用DNA带有大量的负电荷，可以被阴离子交换剂吸附，从而实现对残留DNA的去除。但是利用上述方法去除人用狂犬病疫苗中的残留DNA时，疫苗中的病毒和残留DNA会一起被吸附在介质上，然后通过控制洗脱条件实现病毒和残留DNA的先后洗脱，故残留DNA的去除率较低。
[0004]采用硫酸鱼精蛋白去除DNA时，带有大量正电荷的硫酸鱼精蛋白可以与带有大量负电荷的DNA结合，产生的结合物容易形成沉淀，通过离心便能实现对DNA的去除。然而，上述方法在去除残留DNA的同时，硫酸鱼精蛋白还会结合病毒，使得病毒损失严重，从而导致疫苗药效降低。
[0005]当使用DNA限制性内切酶去除DNA时，酶切后的DNA变成了小片段，然后利用凝胶过滤色谱将DNA和病毒分离开。但是，一方面，该方法只能将大部分残留DNA和病毒分离开，残留DNA的去除效率较低。另一方面，DNA限制性内切酶的活性作用容易受pH、温度等外界环境条件限制，故残留DNA的去除成本较高。
[0006]因此，残留DNA的去除成为人用狂犬病疫苗生产纯化的难题。

技术实现思路

[0007]为了有效降低人用狂犬病疫苗中DNA的残留量，同时保证病毒的回收率较高，本申请提供一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法。
[0008]本申请提供的一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，采用如下的技术方案：
[0009]一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，具体包括以下步骤：
[0010](1)在病毒灭活液中加入DNA去除液，搅拌处理，获得处理液；
[0011](2)采用柱色谱的方法对步骤(1)所述处理液进行纯化，获得病毒纯化液；
[0012](3)对步骤(2)所述病毒纯化液进行冻干，获得所述人用狂犬病疫苗。
[0013]其中，所述DNA去除液包括溶质和溶剂；所述溶质包括乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种。
[0014]本申请提供的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法中，以病毒灭活液作为人用
狂犬病疫苗的来源，采用乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种作为DNA去除液中的溶质，对病毒灭活液进行搅拌处理，之后采用柱色谱的方法对处理液进行纯化获得病毒纯化液，并将病毒纯化液冻干制备成人用狂犬病疫苗。本申请提供的方法，能够有效去除人用狂犬病疫苗中残留的DNA，同时使得病毒的回收率较高。
[0015]经过试验分析可知，相比于单独使用茶氨酸、单独使用甘露醇、单独使用乳酸薄荷酯或者一起使用茶氨酸和甘露醇作为DNA去除液中的溶质，选择使用乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种一起作为DNA去除液中的溶质，用于人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法中，能够有效提高人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除率。因此，本申请采用乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种作为DNA去除液中的溶质。
[0016]进一步地，所述溶质包括乳酸薄荷酯、茶氨酸和甘露醇。
[0017]经过试验分析可知，相比于使用茶氨酸和乳酸薄荷酯或者使用甘露醇和乳酸薄荷酯作为DNA去除液中的溶质，同时使用乳酸薄荷酯、茶氨酸、甘露醇作为DNA去除液中的溶质，用于人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法中，能够进一步提高人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除率。因此，本申请采用乳酸薄荷酯、茶氨酸、甘露醇一起作为DNA去除液中的溶质。
[0018]进一步地，所述DNA去除液中所述溶质的浓度为8
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12g/L。
[0019]优选地，所述DNA去除液中所述溶质的浓度为9
‑
11g/L。
[0020]在一个具体的实施方案中，所述DNA去除液中所述溶质的浓度可以是：8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L。
[0021]在一些具体的实施方案中，所述DNA去除液中所述溶质的浓度可以是：8
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9g/L、9
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10g/L、10
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11g/L、11
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12g/L。
[0022]经过试验分析可知，在人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除过程中，当控制DNA去除液中溶质的浓度为上述范围内时，所得到的疫苗成品中DNA残留量较低，病毒含量较高。因此，本申请将DNA去除液中溶质的浓度控制在上述范围内，能够有效提高人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除率，同时使得病毒的回收率较高。
[0023]进一步地，所述溶质包含以下重量份的组分：乳酸薄荷酯0.5
‑
1.5份；茶氨酸1.5
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5.5份；甘露醇35
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45份。
[0024]优选地，所述溶质包含以下重量份的组分：乳酸薄荷酯0.8
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1.3份；茶氨酸2.5
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4.5份；甘露醇38
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43份。
[0025]在一个具体的实施方案中，所述乳酸薄荷酯的添加量可以是以下重量份的组份：0.5份、0.8份、1.1份、1.3份、1.5份。
[0026]在一些具体的实施方案中，所述乳酸薄荷酯的添加量还可以是以下重量份的组份：0.5
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0.8份、0.8
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1.1份、1.1
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1.3份、1.3
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1.5份。
[0027]在一个具体的实施方案中，所述茶氨酸的添加量可以是以下重量份的组份：1.5份、2.5份、3.5份、4.5份、5.5份。
[0028]在一些具体的实施方案中，所述茶氨酸的添加量还可以是以下重量份的组份：1.5
‑
2.5份、2.5
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3.5份、3.5
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4.5份、4.5
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5.5份。
[0029]在一个具体的实施方案中，所述甘露醇的添加量可以是以下重量份的组份：35份、38份、40份、43份、45份。
[0030]在一些具体的实施方案中，所述甘露醇的添加量还可以是以下重量份的组份：35
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38份、38
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40份、40
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43份、43
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45份。
[0031]经过试验分析可知，在人用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）在病毒灭活液中加入DNA去除液，搅拌处理，获得处理液；（2）采用柱色谱的方法对步骤（1）所述处理液进行纯化，获得病毒纯化液；（3）对步骤（2）所述病毒纯化液进行冻干，获得所述人用狂犬病疫苗；其中，所述DNA去除液包括溶质和溶剂；所述溶质包括乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种。2.根据权利要求1所述的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，其特征在于，所述DNA去除液中所述溶质的浓度为8
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12g/L。3.根据权利要求2所述的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，其特征在于，所述DNA去除液中所述溶质的浓度为9
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11g/L。4.根据权利要求1所述的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，其特征在于，所述溶质包含以下重量份的组分：乳酸薄荷酯0.5
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1.5份；茶氨酸1.5
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5.5份；甘露醇35
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45份。5.根据权利要求4所述的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，其特征在于，所述溶质包含以下重量份的组分：乳酸薄荷酯0.8
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【专利技术属性】
技术研发人员：李沛阳，毛昱，刘俊，付祥，曹鹏，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：