一种荧光渗滤试剂盒及其使用方法、制备方法技术

本申请公开了一种荧光渗滤试剂盒，用于待测样本中目标蛋白的检测，包括试剂卡，所述试剂卡包括依次层叠设置的复合层、保留层和吸水层，所述复合层包括第一荧光微球标记的原料，所述保留层包括所述原料，所述原料用于与所述目标蛋白结合，所述复合层不允许红细胞通过，所述吸水层用于吸收所述待测样本中的水分。本申请所提供的荧光渗滤试剂盒，结构简单、操作简单、检测速度快，适应性强，体积小，结果准确，重复性好。重复性好。重复性好。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光渗滤试剂盒及其使用方法、制备方法


[0001]本申请涉及目标蛋白检测领域，尤其涉及一种荧光渗滤试剂盒及其使用方法、制备方法。

技术介绍

[0002]荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术，由于其结合了免疫反应的高特异性和荧光信号放大的高灵敏度两大优势，从而广泛应用于人/动物体液样本中目标蛋白的检测。现有的荧光层析免疫检测中，首先需要将待测样本和缓冲液按照一定的比例进行稀释，然后将稀释后的待测样本滴加至荧光层析试剂卡上的样本槽内，使得稀释后的待测样本与试剂卡中的层析试纸接触，待层析试纸与待测样本反应一段时间后，获得检测结果。通常情况下，试剂卡主要是由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸四部分组成，每部分采用搭接的方式连接并粘在聚酯板基板上。由于这四部分材料在裁切和搭接时的加工误差会影响试剂卡的重复性以及检测准确性等，因而使得荧光免疫层析技术存在一定的弊端；不仅如此，采用荧光免疫层析技术进行层析待测样品时，也需要有足够的距离让待测样本进行流动，从而导致试剂卡的体积较大，不利于试剂检测仪器的小型化。

技术实现思路

[0003]本申请提供了一种荧光渗滤试剂盒及其使用方法、制备方法，旨在解决现有技术中荧光层析检测技术所需试剂卡的体积较大，不利于检测仪器的小型化和自动化，且层析检测技术所需的检测时间较长，不利于提高检测效率的技术问题。
[0004]为了实现上述目的，第一方面，本申请提供了一种荧光渗滤试剂盒，用于待测样本中目标蛋白的检测，包括试剂卡，所述试剂卡包括依次层叠设置的复合层、保留层和吸水层，所述复合层包括第一荧光微球标记的原料，所述保留层包括所述原料，所述原料用于与所述目标蛋白结合，所述复合层不允许红细胞通过，所述吸水层用于吸收所述待测样本中的水分。
[0005]在本申请一实施例中，所述复合层包括第二荧光微球标记的对照蛋白，所述保留层包括对照蛋白抗体，所述对照蛋白抗体能与所述对照蛋白结合。
[0006]在本申请一实施例中，所述第一荧光微球的荧光材料选自镧系金属，所述第一荧光微球的粒径选自100nm、200nm、300nm中的一种。
[0007]在本申请一实施例中，所述第一荧光微球的荧光材料选自三价铕，所述第一荧光微球的粒径选自200nm。
[0008]在本申请一实施例中，在层叠方向上，所述保留层的面积与所述复合垫的面积的比值为0.4
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0.9。
[0009]在本申请一实施例中，所述试剂卡还包括粘胶圈，所述粘胶圈为环形结构，所述粘胶圈设于所述保留层和所述吸水层之间，所述粘胶圈的内直径为所述保留层直径的10％
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40％。
[0010]第二方面，本申请提供了一种上所述的荧光渗滤试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[0011]将待测样品滴加在所述复合层上，所述待测样品中的目标蛋白与所述复合层中的所述第一荧光微球标记的原料结合得到第一结合物，以使所述第一结合物渗滤到所述保留层；
[0012]所述第一结合物与所述保留层中的原料结合；
[0013]移除所述复合层，检测所述保留层上所述第一荧光微球的荧光信号强度值，通过标准曲线计算待测样品中目标蛋白的浓度值。
[0014]第三方面，本申请提供了一种上所述的荧光渗滤试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0015]使用喷涂机或者点样机把含有所述原料的溶液包被在基材上，得到所述保留层；
[0016]在所述吸水层上贴附所述保留层；
[0017]使用喷涂机把含有所述第一荧光微球标记的原料溶液涂布在经处理液处理后的基底材料上，得到所述复合层；
[0018]在所述保留层上贴附所述复合层。
[0019]在本申请一实施例中，所述处理液包括缓冲盐、抗人红细胞抗体、抗HAMA抗体和表面活性剂，所述缓冲盐选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷
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盐酸缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种，所述表面活性剂选自氧化乙烯和氧化丙烯的嵌段共聚物、聚山梨醇酯、聚乙二醇醚中的一种。
[0020]在本申请一实施例中，所述缓冲液的PH值为6.0
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8.5，所述处理液中，所述抗人红细胞抗体的浓度为0.001mg/ml
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2mg/ml，所述抗HAMA抗体的浓度为0.001mg/ml
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2mg/ml。
[0021]与现有技术相比，本申请所提供的荧光渗滤试剂盒，具有结构简单、操作简单、检测速度快、适应性强、体积小、结果准确、重复性好的特点。本申请所提供的荧光渗滤试剂盒主要包括依次层叠设置的复合层、保留层和吸水层，由于层叠设置，使得试剂盒的结构简单，且对试剂卡的尺寸无要求，可根据实际需要灵活制备不同尺寸的试剂卡、试剂盒，从而使得试剂盒进行定量检测时，对检测仪器的体积无要求，有利于试剂盒检测仪器的小型化；此外，层叠设置而非拼接、或者搭接设置，更有利于待测样品的流动，且也不会存在因加工误差而导致的试剂盒不能重复使用或者检测准确性低的问题。再者，吸水层的设置，可吸收待测样本中的水分，加快待测样本从复合层渗滤到保留层，从而缩短了待测样本与试剂卡间的反应时间，提高了待测样本的检测效率。不仅如此，复合层不允许红细胞通过，且在检测时，会将复合层移除，暴露出保留层，仅仅检测保留层上的荧光信号，使得在进行全血样本检测时，不需要提前对全血样本进行特殊预处理，可直接用全血样本进行反应、检测，大大提高了劝学样本的检测效率。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请实施例，下面将对实施例所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本申请一实施例提供的荧光渗滤试剂盒的示意图；
[0024]附图标记
[0025]1待测样本；2复合层；3保留层；4吸水层；5外壳；6粘胶圈。
具体实施方式
[0026]本申请公开了一种荧光渗滤试剂盒及其使用方法、制备方法，为使本申请的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下结合实施例对本申请进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
[0027]本
技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)，具有与本专利技术所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
[0028]第一方面，如图1所示，本申请一实施例提供了一种荧光渗滤试剂盒，用于待测样本中目标蛋白的检测，包括试剂卡，试剂卡包括依次层叠设置的复合层、保留层和吸水层，复合层包括第一荧光微球标记的原料，保留层包括所述原料，原料用于与目标蛋白结合，复合层不允许红细胞通过，吸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光渗滤试剂盒，用于待测样本中目标蛋白的检测，其特征在于，包括试剂卡，所述试剂卡包括依次层叠设置的复合层、保留层和吸水层，所述复合层包括第一荧光微球标记的原料，所述保留层包括所述原料，所述原料用于与所述目标蛋白结合，所述复合层不允许红细胞通过，所述吸水层用于吸收所述待测样本中的水分。2.根据权利要求1所述的一种荧光渗滤试剂盒，其特征在于，所述复合层包括第二荧光微球标记的对照蛋白，所述保留层包括对照蛋白抗体，所述对照蛋白抗体能与所述对照蛋白结合。3.根据权利要求1所述的一种荧光渗滤试剂盒，其特征在于，所述第一荧光微球的荧光材料选自镧系金属，所述第一荧光微球的粒径选自100nm、200nm、300nm中的一种。4.根据权利要求3所述的一种荧光渗滤试剂盒，其特征在于，所述第一荧光微球的荧光材料选自三价铕，所述第一荧光微球的粒径选自200nm。5.根据权利要求1所述的一种荧光渗滤试剂盒，其特征在于，在层叠方向上，所述保留层的面积与所述复合层的面积的比值为0.4
‑
0.9。6.根据权利要求1所述的一种荧光渗滤试剂盒，其特征在于，所述试剂卡还包括粘胶圈，所述粘胶圈为环形结构，所述粘胶圈设于所述保留层和所述吸水层之间，所述粘胶圈的内直径为所述保留层直径的10％
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40％。7.一种如权利要求1
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6任一项所述的荧光渗滤试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：将待测样品滴加在所述复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：程涛，白佳委，张林华，张捷李，汪大明，
申请(专利权)人：安邦厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：