本发明专利技术提供了一种AIEFM@PDA作为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，在底板上依次搭接粘贴样本垫、喷涂有UiO
【技术实现步骤摘要】
一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条
[0001]本专利技术属于医学检验和食品安全检测领域，具体涉及一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，来定量检测样本中的待测物浓度。
技术介绍
[0002]免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法，具有检测速度快、特异性好、操作简单和费用低等优点，相比于其它方法更能满足现场大批量检测的需求，因此近年来发展迅猛，被广泛应用于食品安全、医学检验和环境污染物监测等领域。其中胶体金免疫层析试纸条是应用最广泛的一种免疫层析产品，但灵敏度较差且易受基质干扰。
[0003]荧光纳米材料是当下的研究热点，荧光纳米材料的高速发展同时带动了荧光免疫层析法的高速发展。荧光纳米材料的性能往往决定着荧光免疫层析法的性能。当下受到主要关注的热点荧光材料是聚集诱导发光材料(AIE)，相比传统染料的聚集诱导淬灭现象(ACQ)，即荧光材料随着浓度的升高而下降，相反AIE染料能够很好的克服这个问题，随着聚集态的出现，AIE染料展现出更佳的荧光性能，AIE染料已经在生物传感器、细胞成像、生物探针等领域得到了广泛的应用。
[0004]聚多巴胺(PDA)也是一种优异的表面包覆材料，能够有效的提高吸光能力以及抗体偶联效率，其合成是由盐酸多巴胺单体在碱性条件下发生的氧化自聚而形成，作为界面材料提高纳米材料的性能。此外，还可以在单独形成球形颗粒，在生物、医药等领域应用十分广泛。
技术实现思路
[0005]基于上述情况，本专利技术合成AIEFM微球，为了提高其在免疫层析技术，在其表面包覆一层聚多巴胺，较大的提高了其在偶联抗体方面的性能。AIEFM@PDA所表现出的灵敏度在免疫层析方面有望成为具备一定潜力的免疫标记物。目前，尚未有将AIEFM@PDA材料应用在免疫层析试纸条上的相关报道。
[0006]本专利技术的一个目的是提供一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条。
[0007]本专利技术的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0009]本专利技术提供了一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，它包括底板以及在底板上搭接粘贴的滤纸、样本垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述玻璃纤维垫包被有偶联抗体的UiO
‑
66@PDA，该玻璃纤维垫的制备方法包括如下步骤：
[0010]AIEFM@PDA的制备：首先在干净小瓶中称取一定质量的PMMA和PMAO，并加入氯仿将其溶解至终浓度分别为20mg/mL及60mg/mL；随后称取四联苯乙烯四甲酸甲酯溶于上述PMMA/PMAO储备液中至终浓度为30mg/mL，配置完成后再准确移取480μL于2.4mL SDS水溶液中(0.25％，w/w)，在冰浴条件下，用超声破碎仪以35％功率下乳化3min。超声结束后，使用旋转蒸发仪将氯仿除去，剩下的混合物在12000rpm，4℃，20min条件下离心，弃上清，清洗两
次，用0.01M NaOH将沉淀物浸泡过夜。待最后一次洗涤操作结束后，将沉淀物复溶于1.0mL BB缓冲液(0.01M，pH 8.0)，浓度为20mg/mL，4℃避光保存。在10mL的玻璃瓶中加入2mL超纯水和1.5mL的乙醇，加入2mg以上制备的AIEFM并称取1mg DA
·
HCl加入反应体系中，随后加入2.5mL的Tris
‑
HCl(0.01M,pH 8.5)，避光反应4h后，12000rpm离心20min，除去体系中未反应的盐酸多巴胺，4℃避光保存。
[0011]AIEFM@PDA标记抗体的制备：向制得的AIEFM@PDA中加入待标记抗体，混匀后，孵育1h，之后，加入封闭剂，室温孵育1h，离心取沉淀，得到的沉淀复溶，制成AIEFM@PDA@Ab；
[0012]喷涂有AIEFM@PDA@Ab的玻璃纤维垫：将制得的AIEFM@PDA@Ab喷涂到玻璃纤维垫上，烘干后即可。
[0013]进一步的，所述AIEFM@PDA@Ab的玻璃纤维垫中的待标记抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体。
[0014]进一步的，本专利技术的硝酸纤维素膜上包被有待测物人工偶联抗原或待测物抗体作为检测线，包被有抗鼠抗体或抗兔抗体(二抗)作为质控线；其中，该硝酸纤维素膜的制备方法，包括如下步骤：
[0015](1)使用0.01
–
0.5M pH 6.0
–
8.0的PBS(磷酸盐缓冲溶液)溶液分别调节包被物待测物人工偶联抗原或待测物抗体、抗鼠源抗体或抗兔源抗体至浓度为0.01
–
10.0mg/mL；
[0016](2)将调整浓度后的待测物人工偶联抗原或待测物抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部，作为检测线，将抗鼠抗体或抗兔抗体喷涂于硝酸纤维素膜下部，作为质控线；其中，检测线和质控线之间间隔一定距离，二者的喷量均为0.25～0.74μL/cm；
[0017](3)将喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后，在室温干燥的环境下保存备用。
[0018]进一步的，所述的待测物人工偶联抗原是指小分子待测物与大分子蛋白质通过化学偶联方法制备的具有免疫源性和反应源性的全抗原；其中，所述的小分子待测物涵盖医学检验领域和食品安全检测领域所需要检测的所有小分子物质；所述的偶联方法包括重氮法、碳二亚胺法、戊二醛法、混合酸酐法、琥珀酸酐法；所述的偶联大分子蛋白包括牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白；所述的偶联比为1:5
–
1:200，偶联后透析纯化，得到所需的人工偶联抗原。
[0019]进一步的，所述待测物抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体。
[0020]进一步的，所述的一种以AIEFM@PDA为免疫标记物制备成的免疫层析试纸条的组装，包括以下步骤：
[0021](1)在底板上搭接粘贴下述材料：滤纸、样本垫、喷涂有AIEFM@PDA@Ab的玻璃纤维垫、喷涂有待测物偶联人工抗原或抗体作为检测线和抗鼠源抗体/抗兔源抗体作为质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸，即组装成本专利技术的使用AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条大板。
[0022](2)组装好的试纸条大板，通过切刀切成相应的宽度，即成本专利技术的使用AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，该试纸条可以直接使用，也可以装入塑料卡壳中使用。
[0023]本专利技术提供的一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条的检测过程包
括：
[0024]经过处理后的检测样本加样到本专利技术制备的免疫层析试纸条，加样体积为50
–
200μL/条，反应时间为3
–
30分钟，之后，可以通过读取该试纸条上检测线和质控线的信号数据，内置标准曲线计算检测样本浓度来实现定量检测，试纸条直接观察检测线和质控线有无本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，其特征在于：包括底板以及在底板上搭接粘贴的滤纸、样本垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述玻璃纤维垫包被有偶联抗体的UiO
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66@PDA，该玻璃纤维垫的制备方法包括如下步骤：(1)AIEFM@PDA的制备：在干净小瓶中称取一定质量的PMMA和PMAO，并加入氯仿将其溶解至终浓度分别为20mg/mL及60mg/mL；随后称取四联苯乙烯四甲酸甲酯溶于上述PMMA/PMAO储备液中至终浓度为30mg/mL，配置完成后再准确移取480μL于2.4mL SDS水溶液中(0.25％，w/w)，在冰浴条件下，用超声破碎仪乳化；超声结束后，使用旋转蒸发仪将氯仿除去，剩下的混合物离心，弃上清，清洗两次，用0.01M NaOH将沉淀物浸泡过夜；待最后一次洗涤操作结束后，将沉淀物复溶于1.0mL BB缓冲液(0.01M，pH 8.0)，浓度为20mg/mL，4℃避光保存；在10mL的玻璃瓶中加入2mL超纯水和1.5mL的乙醇，加入2mg以上制备的AIEFM并称取1mg DA
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HCl加入反应体系中，随后加入2.5mL的Tris
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HCl(0.01M,pH 8.5)，避光反应4h后，离心，除去体系中未反应的盐酸多巴胺，4℃避光保存；(2)AIEFM@PDA标记抗体的制备：向制得的AIEFM@PDA中加入待标记抗体，混匀后，孵育1h，之后，加入封闭剂，室温孵育1h，离心取沉淀，得到的沉淀复溶，制成AIEFM@PDA@Ab；(3)喷涂有AIEFM@PDA@Ab的玻璃纤维垫：将制得的AIEFM@PDA@Ab喷涂到玻璃纤维垫上，烘干后即可。2.根据权利要求1所述的一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，其特征在于：所述AIEFM@PDA@Ab的玻璃纤维垫中的待标记抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体。3.根据权利要求1所述的一种AIEFM@PDA为免疫标记物制备的免疫层析试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上包被有待测物人工偶联抗原或待测物抗体作为检测线，包被有抗鼠抗体或抗兔抗体作为质控线；其中，该硝酸纤维素膜的制备方法，包括如下步骤：(1)使用0.01
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0.5M pH 6.0
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8.0的PBS溶液分别调节包被物待测物人工偶联抗原或待测...
【专利技术属性】
技术研发人员：赖卫华，张干，邓省亮，彭娟，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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