一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条及制备方法和应用技术

一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条及制备方法和应用。包括以下步骤：合成Au@Pd溶液、制备Au@Pd纳米酶免疫探针、侧流免疫层析试纸条的构建、试纸条检测C反应蛋白(CRP)以及进行催化放大反应。本方法中，利用Au@Pd纳米材料的颜色和过氧化物酶活性，在Au@Pd纳米颗粒颜色进行可视化检测的基础上，再催化放大，有效提高了检测灵敏度，此外，在进行催化放大时利用高粘度溶剂在T线处固定催化反应。明显改善了显色底物在试纸条上的扩散情况，使显色物集中固定检测T线上，实现了对CRP的快速、简便、灵敏的现场检测。敏的现场检测。敏的现场检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于免疫检测领域，涉及一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]C反应蛋白(CRP)是一种在宿主防御和炎症反应中起重要作用的急性期蛋白，人体一旦遭遇感染或组织损伤，体内CRP水平在数小时内急剧增加，因此CRP是一种重要的炎症标志物。当前临床分析中常规的CRP检测主要采用化学发光法、免疫比浊法和酶联免疫法(ELISA)。但这些方法都需要昂贵的仪器以及专业的操作和较长的分析时间，这极大地限制了它们在资源贫乏地区的普及，以及现场检测的要求。所以建立一种简便、快速、灵敏的CRP检测方法具有重要意义。
[0003]侧流免疫分析法(LFIA)因其具有成本低、快速、检测结果肉眼可见以及不需要专业的操作人员等优势，现在已发展成为临床诊断、食品安全检测和环境影响评估等领域的常规检测方法。金纳米粒子(AuNPs)是传统LFIA中应用最广的标签。然而，AuNPs由于其比表面积(球形)小、视觉对比度低等缺点，使其在高灵敏目标物检测中的使用受到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括含有Au@Pd的纳米酶免疫探针及侧流免疫层析检测试纸，具体步骤如下：1)Au@Pd纳米溶液的制备
①
AuNPs的制备将氯金酸溶液加入到超纯水中混合均匀，溶液加热沸腾后快速加入柠檬酸三钠溶液，沸腾至溶液颜色不再变化后继续加热十分钟后停止加热，在搅拌状态下冷却至室温，得到AuNPs溶液；
②
Au@Pd纳米溶液的制备取合成好的AuNPs，加入氯钯酸钠混匀后，再向溶液中逐滴加入抗坏血酸，持续搅拌得到Au@Pd溶液；2)Au@Pd标记单克隆抗体制备Au@Pd
‑
mAb；调节Au@Pd溶液的pH，采用静电吸附法，将Au@Pd纳米溶液与CRP的单克隆抗体mAb
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6G5结合，经过封闭
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冷冻离心
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重悬得到Au@Pd纳米酶免疫探针Au@Pd
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mAb；3)基于Au@Pd纳米酶的侧流免疫层析检测试纸的构建将处理后的样品垫、喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在聚氯乙烯衬板上，组装好的整条试纸条使用切条机剪切备用，得到基于Au@Pd纳米酶的侧流免疫层析检测试纸条。2.根据权利1要求所述的一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤
①
和
②
中，所述氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、氯钯酸溶液的质量分数均为1％，抗坏血酸溶液浓度为0.1M，其中：所述氯金酸、柠檬酸钠、水的反应投料比为1～3mL﹕3～9mL﹕99～297mL；所述AuNPs溶液、氯钯酸钠、抗坏血酸和水的反应投料比为10～20mL﹕0.15～0.3mL﹕0.152～0.304mL﹕1.2～2.4mL。3.根据权利要求1所述的一种基于Au@Pd纳米酶的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述处理后的样品垫的处理方法包括将样品垫置于样品垫封闭溶液中浸湿后，置于干燥的玻璃皿中，在30～40℃的烘箱中...

【专利技术属性】
技术研发人员：段忆翔，姚乃芝，黄志钧，李晓婷，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：