【技术实现步骤摘要】
一种构建神经组织特异过表达人源SNCA的帕金森病模型猪的方法及应用
[0001]本专利技术涉及生物
，涉及一种构建神经组织特异过表达人源SNCA的帕金森病模型猪的方法及应用，具体涉及一种采用CRISPR/Cas9系统及同源重组技术构建的在基因组中的特定位置整合并由人源神经组织特异性表达启动子Syn驱动表达人源SNCA基因的猪重组细胞，该重组猪细胞被用于克隆生产帕金森病模型猪，该模型猪可用于下一步的药物筛选及药效评价、基因及细胞治疗、帕金森病发病机制的研究等生物医药领域。
技术介绍
[0002]帕金森病(parkinson
’
s disease,PD)又称震颤麻痹，是一种中枢神经系统的慢性神经退化疾病，主要影响运动神经系统，其带来的主要运动症状合称为帕金森综合症。据估计，全球约有700万
‑
1000万人患有帕金森综合症，且该病的症状会随着年龄的增长缓慢出现，且男性较女性更容易发病。在60岁以上的老人中，其发病率高达1％；在80岁以上的老人中，其发病率更是高达1.9％。在我国，有超过30...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将命名为DNA分子甲的DNA分子整合至猪细胞的基因组DNA，得到重组细胞；所述DNA分子甲中具有人源SNCA基因。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述DNA分子甲中具有人源SNCA基因表达盒；人源SNCA基因表达盒中，启动子为人源神经组织特异性表达启动子。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：人源SNCA基因表达盒中，由同一启动子驱动多个拷贝的人源SNCA基因表达。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：人源SNCA基因表达盒中，所述多个拷贝的人源SNCA基因存在于同一编码框，它们之间由自剪接肽的编码基因间隔。5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述DNA分子甲整合至猪细胞的基因组DNA的COL1A1基因、ROSA26基因、AAVS1基因或H11位点中。6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述“将命名为DNA分子甲的DNA分子整合至猪细胞的基因组DNA”的实现方式为：将命名为DNA分子乙的DNA分子导入猪细胞或者将具有所述DNA分子乙的重组质粒导入猪细胞；所述DNA分子乙中，具有所述DNA分子甲且在所述DNA分子甲的上游具有上游同源臂且在所述DNA分子甲的下游具有下游同源臂，所述上游同源臂和所述下游同源臂用于将所述DNA分子甲整合至猪细胞的基因组DNA。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法中，具有所述DNA分子乙的重组质粒与两个辅助质粒共同导入猪细胞；所述两个辅助质粒为sgRNA质粒和Cas9质粒；sgRNA质粒转录得到特异sgRNA；所述特异sgRNA为sgRNA
COL1A1
‑
g3
、sgRNA
ROSA26
‑
g3
、sgRNA
AAVS1
‑
g4
或sgRNA
H11
‑
g1
；sgRNA
ROSA26
‑
g3
的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1
‑
20位核苷酸所示；sgRNA
AAVS1
‑
g4
的靶序列结合区如SEQ ID NO：14中第1
‑
20位核苷酸所示；sgRNA
H11
‑
g1
的靶序列结合区如SEQ ID NO：15中第1
‑
20位核苷酸所示；sgRNA
COL1A1
‑
g3
的靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第1
‑
20位核苷酸所示；Cas9质粒表达Cas9蛋白。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述Cas9质粒为质粒pKG
‑
GE3；质粒pKG
‑
GE3中，具有特异融合基因；所述特异融合基因编码特异融合蛋白；所述特异融合蛋白自N端至C端依次包括如下元件：两个核定位信号、Cas9蛋白、两个核定位信号、自剪切...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛冬，汪滔，马翔，刘瑜，曾为俊，王磊，程锐，黄彩云，赵泽英，陶裴裴，段星，刘璐，
申请(专利权)人：南京启真基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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