一种干细胞外泌体的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种干细胞外泌体的提取方法，属于细胞提取技术领域，用于解决现有干细胞外泌体提取效率低和纯度低的技术问题。本方法先对干细胞进行两次无菌培养，获取较为纯净且外泌体含量较高的提取液；再进行两次除杂处理，能够有效去除杂质和囊泡，保证外泌体的纯度；再进行筛选处理，能够将残留的细胞、血小板和稍大的胞外囊膜去除，进一步提高纯度；再对外泌体进行孵育；最后通过低速离心回收外泌体，得到高纯度的干细胞外泌体。在除杂后对提取液进行筛选纯化处理，提高了外泌体的纯度，纯化后的提取液采用PEG溶液孵育后进行低速离心沉淀即可获取干细胞外泌体，操作方便，耗时短，提高了干细胞外泌体的提取效率和纯度，适合批量化提取。合批量化提取。合批量化提取。

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞外泌体的提取方法


[0001]本专利技术属于细胞提取
，涉及一种干细胞外泌体的提取方法。

技术介绍

[0002]干细胞外泌体是来自干细胞的一种细胞分泌物，外泌体是干细胞分泌微小的囊泡(宽30至150纳米)，它带上有干细胞的蛋白、mRNA和microRNA等生物活性化学物质，具备干细胞的一些功能。外泌体合乎纳米颗粒的界定，干细胞外泌体可以透过血脑屏障，是干细胞与别的细胞中间信息内容传送的关键物质，有利于干细胞功能的完成。它们类似细胞间的“通信兵”可以在细胞之间转移DNA，RNA或蛋白质，从而影响受体细胞的功能，在干细胞和再生医学领域，外泌体正在被用于以治疗从心脏病到呼吸系统疾病的疾病。
[0003]干细胞外泌体与干细胞具有相似的生物学性能，但干细胞外泌体更加安全稳定高效，外泌体对受损的微环境不响应，具有更强而复杂的信号分子转运和调控能力，具有改变细胞外基质，改变受体细胞的转录组和蛋白质组，调节细胞凋亡，生长，增殖和分化途径的能力。外泌体中包含多种生物因子，这些因子被发现可诱导成纤维细胞的迁移和增殖以及胶原的合成；具有减少细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，干细胞的一次无菌培养：采用含血清的培养基在恒温无菌环境中培养干细胞，培养一定时间后，提取干细胞；步骤二，干细胞的二次无菌培养：对提取的干细胞采用不含血清的培养基在恒温无菌环境中培养一定时间，提取培养上清液；步骤三，一次除杂处理：将步骤二中得到的培养上清液进行第一次离心处理，提取上清液，能够去除杂质细胞和凋亡的细胞碎片；步骤四，二次除杂处理：对步骤三中得到的上清液进行第二次离心处理，提取上清液，能够去除较大的囊泡；步骤五，筛选处理：采用细胞分选装置对步骤四得到的上清液进行筛分，将其中残留的细胞、血小板和稍大的胞外囊膜去除，得到含有外泌体的纯化提取液；步骤六，外泌体孵育：将步骤五种获取的提取液采用PEG溶液混合在4℃无菌恒温条件下孵育；步骤七，外泌体提取：将孵育后的提取液通过低速离心即可沉淀回收外泌体，得到高纯度的干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的一种干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，所述步骤一中干细胞的一次无菌培养时间为(15
‑
18)h。3.根据权利要求2所述的一种干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，所述步骤二中干细胞的二次无菌培养时间为(18
‑
24)h。4.根据权利要求1所述的一种干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，所述步骤三中上清液的第一次离心处理，采用300g离心力，离心处理(...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘萍，
申请(专利权)人：刘萍，
类型：发明
国别省市：