一种细胞分离方法技术

本发明专利技术属于细胞分离技术领域，具体而言，是一种细胞分离方法，通过细胞组织碎化器来进行，通过该细胞组织碎化器底部设置的转动切割刀头的低速和高速切割方式的切换，能够对松散的软组织进行快速碎化处理，之后将碎化的组织在细胞组织碎化器内直接分离存储，以减少对细胞组织造成的机械损伤；通过细胞组织碎化器进行细胞分离方法的步骤包括：步骤一：将软组织清洗后，低温储存10～30min；步骤二：投入到碎化容器内，通过刀头转动进行碎化处理；步骤三：碎化处理后的组织碎片经滤网进入到存料箱中的缓冲液内；步骤四：将存料箱向上抬起，使存料箱的排料口与碎化容器侧部的出料管连通，将组织碎片连同缓冲液一起排出。织碎片连同缓冲液一起排出。织碎片连同缓冲液一起排出。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞分离方法


[0001]本专利技术属于细胞分离
，具体而言，是一种细胞分离方法。

技术介绍

[0002]动物组织原代细胞分离通常通过酶、EDTA和机械方法来进行，之后使其分散为单细胞悬液样品，后续在适当的培养体系下对于分离的原代细胞进行生存、生长和繁殖培养；针对不同物种的不同组织类型，其具体的操作流程也要进行调整；常规原代细胞分离流程为取样
→
预处理
→
分离处理
→
过滤清洗
→
后处理。
[0003]对于质地软且较为松散的软组织，在对于组织细胞的需求量较大时，通过成本较低，便于大批量提取的物理机械方式将组织进行初步碎化预处理，之后将碎化的组织置于缓冲液中过滤清洗后，进行后续分离提取处理。
[0004]现有专利号为CN202010322559.1的一种软骨组织切碎及细胞分离提取一体化装置，该专利文献中就是通过机械方式进行细胞分离的，并通过将破碎组件与分离提取组件进行一体化设置，以解决对于软骨组织切碎以及细胞离心分离单独处理时的效率较低的问题；但是该专利文献中通过破碎组件对组织剪碎的方式，是通过周向转动的破碎转盘和固定在容器侧壁的破碎转环之间进行剪切作用来实现的，无法对容器底部的组织进行充分处理，欲使其剪碎的组织大小能够穿过穿透孔进入到对接沉槽内，需要较长的处理时间，会对细胞组织造成较大的机械损伤。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种细胞分离方法，该细胞分离方法通过细胞组织碎化器来进行，通过该细胞组织碎化器底部设置的转动切割刀头的低速和高速切割方式的切换，能够对松散的软组织进行快速碎化处理，之后将碎化的组织在细胞组织碎化器内直接分离存储，以减少对细胞组织造成的机械损伤；
[0006]为了实现上述的目的，本专利技术的通过细胞组织碎化器进行细胞分离方法的步骤包括：
[0007]步骤一：将软组织清洗后，低温储存10～30min；
[0008]步骤二：投入到碎化容器内，通过刀头转动进行碎化处理；
[0009]步骤三：碎化处理后的组织碎片经滤网进入到存料箱中的缓冲液内；
[0010]步骤四：将存料箱向上抬起，使存料箱的排料口与碎化容器侧部的出料管连通，将组织碎片连同缓冲液一同排出；
[0011]步骤五：对细胞碎片进行聚解后充分分离。
[0012]细胞组织碎化器的主体结构包括承载座、导向立杆和碎化容器，承载座放置在试验台上，承载座上固定连接有导向立杆和碎化容器。
[0013]导向立杆上滑动连接有升降座，升降座上固定连接有转动驱动器，转动驱动器的输出轴与转轴通过联轴器相连，转轴上固定连接有刀头。
[0014]转轴贯穿碎化容器上的拆卸盖，拆卸盖通过固定座安装在碎化容器上，拆卸盖通过两个锁定旋钮与固定座锁定连接。
[0015]细胞组织碎化器对于组织碎片的收集结构包括存料箱和滤网夹持座，存料箱上设有排料口，存料箱上固定连接有连接架，连接架竖向滑动连接在承载座上的滑口内，承载座的底部设有通气口，存料箱上固定连接有滤网夹持座，滤网夹持座内侧安装有滤网。
[0016]存料箱内侧下端的排料口在存料箱升起后能够与碎化容器侧部的出料管连通，出料管上还安装有阀门。
[0017]优选的，连接架上安装有多个密封圈，密封圈与滑口内壁抵接连接。
[0018]优选的，承载座上固定连接有用于控制升降座滑动的第一升降驱动器。
[0019]优选的，承载座上固定连接有用于控制连接架升降的第二升降驱动器。
附图说明
[0020]图1为本专利技术的细胞分离方法的流程图；
[0021]图2为本专利技术的细胞组织碎化器的结构示意图；
[0022]图3为本专利技术的细胞组织碎化器的主体结构示意图；
[0023]图4为本专利技术的组织碎片升降座、转动驱动器和转轴的结构示意图；
[0024]图5为本专利技术的承载座和通气口的结构示意图；
[0025]图6为本专利技术的存料箱、排料口、连接架和密封圈的结构示意图；
[0026]图7为本专利技术的导温片的结构示意图；
[0027]图8为本专利技术的固定座和拆卸盖的结构示意图；
[0028]图9为本专利技术的固定座、拆卸盖和锁定旋钮的结构示意图；
[0029]图10为本专利技术的组织碎片升降座、转动驱动器和刀头的结构示意图；
[0030]图11为本专利技术的锁定旋钮、横片和弹性套的结构示意图；
[0031]图12为本专利技术的滤网夹持座的结构示意图。
[0032]图中：承载座11；导向立杆12；碎化容器13；出料管14；阀门15；通气口16；滑口17；升降座21；转动驱动器22；转轴23；刀头24；第一升降驱动器25；存料箱31；排料口32；连接架33；密封圈34；导温片35；第二升降驱动器35；滤网夹持座41；限位柱42；固定座51；拆卸盖61；密封套62；锁定旋钮71；横片72；弹性套73；套环74；金属片75。
具体实施方式
[0033]本专利技术的通过细胞组织碎化器进行细胞分离方法的步骤包括：
[0034]步骤一：将软组织清洗后，根据软组织的种类，
‑
15～3℃储存10～30min；
[0035]步骤二：投入到碎化容器13内，通过刀头24转动进行碎化处理；
[0036]步骤三：碎化处理后的组织碎片经滤网进入到存料箱31中的缓冲液内；
[0037]步骤四：将存料箱31向上抬起，使存料箱31的排料口32与碎化容器13侧部的出料管14连通，将组织碎片连同缓冲液一起排出；
[0038]步骤五：对细胞碎片进行聚解后充分分离。
[0039]进一步地，在步骤二中，将软组织投入到碎化容器13内的同时，加入一定量的低温溶液，起到降温和便于软组织重新聚拢的作用；
[0040]进一步地，步骤二中，刀头24的转速过程为：长时间的低速转动和短时间的高速转动循环切换，减少对于组织的机械损伤；刀头24经高速转动切换到低速转动后，一定量的组织碎片通过滤网夹持座41之间的滤网进入到存料箱31内收集，脱离与刀头24的接触，减少对于组织碎片的温度损伤和机械损伤；
[0041]刀头24经低速转动重新切换到高速转动后，将滤网夹持座41上嵌入的部分大块组织碎片重新卷出粉碎处理；
[0042]进一步地，步骤三中的缓冲液可预先经过低温预处理，缓冲液能够便于溶解用于细胞分离的酶，便于后续细胞分离处理；
[0043]进一步地，缓冲液的量占存料箱31容积的二分之一或三分之一；
[0044]通过机械方式对于组织进行碎化后，可配合酶处理或EDTA的方式进一步对细胞进行分离处理。
[0045]以下，参照图2和图8，说明作为本专利技术的实施方式中的细胞组织碎化器的整体结构：
[0046]承载座11放置在试验台上，承载座11上固定连接有导向立杆12和碎化容器13，承载座11上固定连接有第一升降驱动器25，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞分离方法，其特征在于：该工艺包括以下步骤：步骤一：将软组织清洗后，低温储存10～30min；步骤二：投入到碎化容器(13)内，通过刀头(24)转动进行碎化处理；步骤三：碎化处理后的组织碎片经滤网进入到存料箱(31)中的缓冲液内；步骤四：将存料箱(31)向上抬起，使存料箱(31)的排料口(32)与碎化容器(13)侧部的出料管(14)连通，将组织碎片连同缓冲液一起排出；步骤五：对细胞碎片进行聚解后充分分离。2.根据权利要求1所述的细胞分离方法，其特征在于：所述碎化容器(13)内转动连接有转轴(23)，刀头(24)连接在转轴(23)底部，刀头(24)位于连接在碎化容器(13)内的存料箱(31)上侧，通过刀头(24)碎化的组织碎片能够嵌入在滤网夹持座(41)内，之后通过滤网夹持座(41)上的滤网进入到存料箱(31)内。3.根据权利要求2所述的细胞分离方法，其特征在于：所述滤网夹持座(41)设置有双层结构，双层结构的中部安装有滤网，滤网夹持座(41)与存料箱(31)可拆卸固定连接。4.根据权利要求2所述的细胞分离方法，其特征在于：所述刀头(24)的侧部交错连接有向刀头(24)外端的上下两侧曲折延伸的刀片。5.根据权利要求2所述的细胞分离方法，其特征在于：所述存料箱(31)上设有连接架(33)，连接架(33)滑动连接在碎化容器(13)上的多个滑口(17)内，存料箱(31)在升起后，其侧部的排料口(32)能够与碎化容器(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翠玲，
申请(专利权)人：王翠玲，
类型：发明
国别省市：