自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括检测膜条、酶结合物、样本缓冲液及底物液。所述检测膜条由固定板和依次固定在硝酸纤维素膜上的抗原带、质控带构成；所述抗原待上包被的抗原包括AMA

【技术实现步骤摘要】
自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及试剂盒领域，尤其涉及一种自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]目前，随着医疗技术越来越发达，关于肝病的治疗和检测也有了很大的进步。其中，检测多种肝特异和系统性抗原的自身抗体对于诊断自身免疫性肝病(AILD)非常重要。已经建立多种检测方法用于检测，比如间接免疫荧光法、免疫印迹和酶联免疫吸附法。特别推荐间接免疫荧光马赛克和免疫印迹法用于多指标筛选。
[0003]为了准确诊断自身免疫性肝病，必须排除以下病症：病毒性肝炎(甲乙丙丁戊型)、合并其他感染的肝炎、中毒性肝炎(比如由药物或酒精导致的)、代谢性肝病和遗传性肝病。
[0004]自身免疫性肝病(AILD)是一类病因尚不明确，具有自身免疫基础的非化脓性炎症性肝病。根据主要受累的肝细胞类型不同，分为两大类，即肝细胞受累的自身免疫性肝炎、胆管细胞受累的自身免疫性胆管病。自身免疫性肝脏疾病(AILD)包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)。AIH相关自身抗体主要包括抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体
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1(LKM
‑
1)抗体、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体、抗肝细胞溶质抗原
‑
1(LC
‑
1)抗体等。PBC相关自身抗体主要包括抗线粒体抗体(AMA)、PBC特异性ANA[间接免疫荧光法检测ANA主要为核点型(nuclear dots)或核膜型(perinuclear rims)，ANA特异性自身抗体主要为抗可溶性酸性磷酸化核蛋白100(sp100)抗体或抗跨膜糖蛋白210(gp210)抗体]等。PSC相关自身抗体主要包括核周型抗中性粒细胞胞质抗体(pANCA)等。此外，还有可能发生重叠综合征，如两种不同的自身免疫性肝病同时出现或者一种自身免疫性肝病合并另一种自身免疫性疾病，如系统性硬化症。因此，一种方便快速的自身免疫性肝病抗体的检测诊断与分类很有必要。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术提供了一种自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒及其检测方法，该检测试剂盒能够快速通过免疫印迹法进行体外半定量检测人血清或血浆中自身免疫性肝病相关抗体的检测问题。主要用于自身免疫性肝病的诊断与分类，亦有助于重叠综合征的诊断。
[0006]技术方案：本专利技术的自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒，包括平行包被有抗原的检测膜条、酶结合物、样本缓冲液及底物液。
[0007]其中，所述检测膜条抗原带上平行包被的抗原包括AMA
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M2(丙酮酸脱氢酶复合物)、M2
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3E(BPO)(线粒体内膜a
‑2‑
酮酸脱氢酶E2亚基的融合蛋白)、LKM
‑
1(肝肾微粒体；细胞色素P450
ꢀⅡ
D6)、LC
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1(细胞浆肝抗原1；亚胺[代]甲基转移酶
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环化脱氨酶)、SLA/LP(可溶性肝抗原
‑
肝胰抗原)、Sp100(核颗粒蛋白，核点)、gp210(核膜整合蛋白，核孔复合物)、核周型抗中性粒细胞胞质抗体(pANCA)、抗平滑肌抗体(SMA)和Ro
‑
52中的至少两种。
[0008]所述检测膜条上抗原带平行包被的抗原还包括PML(早幼粒细胞白血病蛋白，核点)，但是，PML的检测结果仅供研究，不用于临床诊断。
[0009]M2抗原是从牛心中提取的天然抗原，主要组分是丙酮酸脱氢酶复合物E2亚基(74kDa)。
[0010]M2
‑
3E(BPO)抗原是在E.coli中表达的重组融合蛋白，包含了下列3种酶的E2亚基的抗原位点：支链2
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酮酸脱氢酶(BCOADH)、丙酮酸脱氢酶(PDH)和2
‑
酮戊二酸脱氢酶(OGDH)共同组成，故而称为M2
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3E(BPO)。
[0011]Sp100和PML抗原是早幼粒细胞白血病核质体(PML
‑
NB)的组份。在E.coli中表达的Sp100和PML抗原的人cDNA。
[0012]gp210抗原是核孔复合物(NPC)的整合蛋白。在E.coli中表达了gp210抗原的人cDNA。
[0013]LKM
‑
1抗原位于肝脏和肾脏的微粒体部分，靶抗原是细胞色素P450 II D6。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中表达的LKM
‑
1抗原的人cDNA。
[0014]以杆状病毒为载体，在昆虫细胞中表达了LC
‑
1抗原(亚胺[代]甲基转移酶
‑
环化脱氨酶)的人cDNA。
[0015]重组SLA/LP(UGA
‑
抑制子
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tRNA相关蛋白)抗原来源于人cDNA在大肠杆菌中表达。
[0016]Ro
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52为重组Ro
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52(52KDa)，以杆状病毒为载体在昆虫细胞中表达的Ro
‑
52抗原。
[0017]其检测膜条抗原带上包被的抗原优选组合方式有以下两种：
[0018](1)AMA
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M2、M2
‑
3E(BPO)、LKM
‑
1、LC
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1、SLA/LP、Sp100、gp210、PML、pANCA、SMA和Ro
‑
52；
[0019](2)AMA
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M2、M2
‑
3E(BPO)、LKM
‑
1、LC
‑
1、pANCA、SMA和SLA/LP。
[0020]所述酶结合物包括碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、IgM及IgA中的一种或几种。
[0021]其中，酶结合物的pH值为7
‑
7.1，还包括三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、氯化钠、BSA(牛血清白蛋白)、蔗糖、防腐剂(Proclin 300)、Brij 35(月桂醇聚氧乙烯醚)、对乙酰氨基酚、硫酸庆大霉素、吐温20。
[0022]每升酶结合物中各成分的含量为：三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)5.451
‑
6.663g、氯化钠8.1
‑
9.9g、BSA(牛血清白蛋白)22.5
‑
27.5g、蔗糖13.5
‑
16.5g、防腐剂(Proclin 300)0.9
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1.1ml、Brij 35(月桂醇聚氧乙烯醚)0.9
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1.1g、对乙酰氨基酚0.45
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0.55g、硫酸庆大霉素0.036
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0.044g、吐温20 0.45
‑
0.55ml、AP酶羊抗人0.72...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种自身免疫性肝病相关抗体的检测试剂盒，其特征在于：包括平行包被有抗原的检测膜条、酶结合物、样本缓冲液及底物液，所述检测膜条由固定板和依次固定在硝酸纤维素膜上的抗原带、质控带构成所述检测膜条上抗原带上平行包被的抗原包括AMA
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M2、M2
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3E(BPO)、LKM
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1、LC
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1、SLA/LP、Sp100、gp210、PML、pANCA、SMA和Ro
‑
52中的至少两种。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测膜条上平行包被的抗原还包括PML。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物包括碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、IgM及IgA中的一种或几种。4.根据权利要求1或3所述的检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物进行10倍浓缩，使用时需用样本缓冲液稀释。5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：还包括清洗缓冲液，所述清洗缓冲液进行了10倍浓缩，包括TBST缓冲液。6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述样本缓冲液包括TBST缓冲液/脱脂奶...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶瑞，谢红梅，
申请(专利权)人：苏州邦器生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：