一种化妆品原料体外3D全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种化妆品原料体外3D全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法，对目标原料的抗衰老活性进行筛选，包含免疫学、分子生物学、组织学、生理学四种维度的检测，构建化妆品原料的抗衰老功效评价方法，属于系统型评估方法，具有快速、高效、全面的优势；为皮肤护理产品抗衰老活性原料的前期验证及筛选提供快捷可靠的评价方法，为抗衰老原料的复配方案提供参考依据，也为护肤品行业动物替代实验、皮肤护理产品开发和功效验证的进一步研究提供有效依据。效依据。效依据。

【技术实现步骤摘要】
一种化妆品原料体外3D全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法


[0001]本专利技术涉及一种化妆品原料体外3D全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法，属 于化妆品原料性能测试


技术介绍

[0002]抗衰老类功效性护肤品的开发中，其活性原料的抗衰老功效评估是配方设计前 期的重要步骤之一。传统活性原料抗衰老功效评价手段在《化妆品安全技术规范》 中并未涉及。目前主要的评价手段集中在对DPPH自由基、羟自由基等的清除效果 的实验，实验结果单一，实验维度单一，存在假阳性，对于原料筛选非常不方便。 随着生物学领域对于细胞、类器官、动物和人体的系统性研究的不断深入，采用多 维度的生物学手段对于原料的功效性评价已经逐渐替代单一的实验。同时，随着3R 原则的循环经济理念推出，3R原则已经成为生物医药科学研究及相关法规管理普遍 遵守的准则，欧洲化妆品法规也颁布了关于动物实验在化妆产品中的禁令，这些法 规的变化促进了体外替代验证方法的开发及应用。3D皮肤模型由于具有与人体皮 肤结构和生理功能相似的特点，已经成为体外替代实验中的优良实验模型。那么， 构建体外替代功效验证本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化妆品原料体外3D全皮皮肤模型抗衰老功效的筛选方法，其特征在于，利用3D全皮皮肤模型，从四个维度对目标原料的抗衰老活性进行筛选，具体包括以下步骤：S1，评估原料样品的溶解性，确定溶解方案；S2，3D全皮皮肤模型培养；S3，3D全皮皮肤模型活性检测确定原料样品检测浓度，包括以下工序：S31，取步骤S2中生长状态稳定3D全皮皮肤模型，加入实验样品，所述实验样品包含若干个不同浓度梯度原料样品，对照样品为不添加任何样品的缓冲液，培养3天～10天，用MTT检测3D全皮皮肤模型组织存活率；S32，筛选得到CV90时对应的原料样品3D全皮皮肤模型给药浓度，所述CV90代表3D皮肤组织存活率为90％；S4，3D全皮皮肤模型的水分值检测步骤、基因表达检测步骤、免疫荧光检查步骤及真皮层厚度检测步骤，包括以下工序：S41，取步骤S2中生长状态稳定的3D全皮皮肤，设置阴性对照组及样品组，所述阴性对照组加入缓冲液，所述样品组加入步骤S32中CV90对应给药浓度的原料样品，将阴性对照组及样品组分别培养3天～10天；S42，对步骤S41中培养完成的3D全皮皮肤模型进行收集，实施3D全皮皮肤模型水分值表达检测；S43，对步骤S41中培养完成的3D全皮皮肤模型进行收集，分别实施3D全皮皮肤模型中MMP9、COL3A1、Elastin、Nrf2的基因表达检测；S44，对步骤S41中培养完成的正常3D皮肤模型进行收集，进行石蜡包埋和切片，然后分别实施3D全皮皮肤模型中Collagen VI和proCollagen I的免疫荧光表达检测；S45，对步骤S41中培养完成的正常3D皮肤模型进行收集，进行石蜡包埋和切片，然后分别实施3D全皮皮肤模型中真皮层厚度的检测；S5，评价步骤，具体包括以下内容：S51，水分值检测的评价步骤：汇总步骤S42中水分值检测结果，计算检测原料样品组与阴性对照组的水分值含量，比较样品组与阴性对照组的水分值，应用GraphPad Prism作图，低于阴性对照组评分为0；高于阴性对照组评分为1；S52，基因相对表达量的评价步骤：汇总步骤S43中基因表达检测结果，计算检测原料样品组基因表达与阴性对照组的基因表达比值，得到基因的相对表达量，应用GraphPad Prism作图，结果表示为Mean
±
SD；各组间比较采用Two
‑
way ANOVA统计分析；所有的统计分析均为双尾；p<0.05认为具有显著差异，用“*”表示，说明该受试物具有一定抗衰老作用，评分为0.3；p<0.01认为具有非常显著差异，用“**”表示，说明该受试物具有显著抗衰老作用，评分为0.5；p<0.001认为具有极显著差异，用“***”表示，说明该受试物具有极显著抗衰老作用，评分为0.7；p<0.0001认为具有极其显著差异，用“****”表示，说明该受试物具有极其显著抗衰老作用，评分为1.0；
S53，免疫荧光表达评价步骤：汇总步骤S44中免疫荧光表达检测结果，应用Image J计算荧光强度，结果表示为Mean
±
SD；按照荧光强度进行排序，数值越高，说明受试物的抗衰老作用越强；应用GraphPad Prism作图，各组间比较采用Two
‑
way ANOVA统计分析；所有的统计分析均为双尾；p<0.05认为具有显著差异，用“*”表示，说明该受试物具有一定抗衰老作用，评分为0.3；p<0.01认为具有非常显著差异，用“**”表示，说明该受试物具有显著抗衰老作用，评分为0.5；p<0.001认为具有极显著差异，用“***”表示，说明该受试物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王博，王飞飞，张超，马骁，郭振宇，
申请(专利权)人：云南云科特色植物提取实验室有限公司美达丝上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：