重组GBD-SSTad-SSTad蛋白及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及基因工程、生物技术、免疫学和微生物学。描述了重组GBD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组GBD
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SSTad
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SSTad蛋白及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及基因工程、生物技术、免疫学和微生物学。具体而言，本专利技术涉及重组蛋白GBD
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SSTad
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SSTad及其在葡聚糖上的生产方法，包括在孵育过程中，基于亲和相互作用，大肠杆菌BL21[pGBD
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SSTad
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SSTad]菌株的细胞提取物中的蛋白GBD
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SSTad
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SSTad与含α
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聚糖吸附剂结合，随后从未结合的细菌蛋白中洗涤并分离所需产物。本专利技术还涉及包含所述肽的免疫原性组合物和试剂盒。本专利技术还涉及所获得的蛋白质在增加成熟卵泡的数量和改善精子质量中的用途。这种增加成熟卵泡数量和改善精子质量的技术成果是基于KNFFWKTFTS肽的使用，该肽是能够诱导生长抑素自身抗体的重组蛋白的一部分。因此，本专利技术可用于治疗男女不孕不育症。

技术介绍

[0002]在人类中，当一些静息卵泡离开卵巢储备进入生长期时，卵泡发生开始。静息卵泡的激活仍是一个研究较少的过程；然而，现代文献数据表明存在一系列相关因素，这些因素调节激活和抑制卵泡发育的众多因素的平衡动力学。负责控制静息卵泡激活的分子机制的调节可能在动员卵巢功能障碍导致的不孕不育症患者静息卵泡的过程中具有重要的临床应用。最近，生长抑素(对下丘脑
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垂体
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卵巢系统具有全身性抑制作用)引起了专家越来越多的兴趣(Gougeon等，2010，Endocrinology.151(3):1299
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309)。
[0003]对调节卵泡生长启动的机制仍知之甚少。Kit配体(KL)是发现的第一种触发卵泡生长的蛋白。这是基于对携带自发失活KL突变的动物卵巢表型的分析(Huang等，1993,Dev.Biol,157:100
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109)和实验研究(Yoshida等，1997,Dev.Biol.184:122
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137；Parrott等，1999；Endocrinology 140:4262
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4271)。相反，肽类激素生长抑素(SST)对卵泡生长的启动具有抑制作用。SST对多种激素(生长激素、促甲状腺激素、胰岛素、胰高血糖素、胃泌素、胃蛋白酶)有很强的抑制作用，启动对胃、胰腺和小肠酶分泌的抑制，减缓胃肠道的蠕动及其内容物的排出。有证据表明下丘脑
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垂体
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卵巢系统也是SST的靶点(Gougeon等，2010，Endocrinology 151(3):1299
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309)。
[0004]SST是一种环状U形肽，在体内以两种形式存在(包含14个氨基酸的SST
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14和包含28个氨基酸的SST
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28)。这两种形式的SST的生物活性是相同的。SST
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14型在中枢神经系统中占优势，可抑制垂体前叶促生长细胞分泌生长激素。SST
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28型主要存在于胃和胰腺中。SST的生物活性由与蛋白G结合的几种膜受体介导，其中5种亚型已被表征，即SSTR1
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SSTR5亚型(Reubi，1987,Cancer Res.47:551
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558；Resine等,1995,Endocrin Reviews 16:427
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442；Lamberts等,1991,Endocrin Reviews 12:450
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482)。
[0005]据报道，几种哺乳动物卵巢中存在SST，包括猪(Mori等,1984,Acta Endocrinol.(Copenh.)106(2):254
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259)、大鼠(McNeill等,1987,Am.JAnat.179(3):269
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76)和人(Hoist等,1994,Hum.Reprod.9(8):1448
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1451)。已在大鼠卵巢(Lidor等,1998,Gynecol.Endocrinol.12(2):97
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101)以及人卵巢中鉴定出SST受体，特别是亚型1、2A和5(Strauss等,2003,Hum Reprod 18(1):495
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507)。因此，有理由得出结论，所有哺乳动物物
种的卵巢都含有SST及其受体。此前的专利中提供的另一个数据认为鸟类卵巢中存在SST及其受体(RU 2337708,RU 2526571,Kudryavets N.I.,2018,Gorki BGSKhA,Biological characteristics of birds of different species)。
[0006]实验证据表明，SST可能在保持卵泡处于静息状态方面发挥作用。SST是一种在内分泌组织中具有众所周知的作用的肽:它抑制cAMP的形成(Ben
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Shlomo et al.,2007,I Drugs.10(12):885
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95)，还抑制公猪睾丸中支持细胞(类似于颗粒细胞)产生KL。在大鼠中，当体内给予SST时，排卵前卵泡的数量减少(Nestorovic等,2004,Gen Physiol Biophvs.23(3):375
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80)，并且体外SST抑制颗粒细胞产生FSH刺激的芳香酶和孕酮(Andreani等,1995,Hum Reprod.10(8):1968
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73)。在猪卵巢颗粒细胞中，SST抑制黄体生成素(LH)和毛喉素刺激的cAMP产生(Rajkumar等,1992 J Endocrinol.134(2):297
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306)，并可抑制血管周卵母细胞的核成熟。
[0007]SST在控制雄性生殖细胞增殖方面也起着关键作用。SST受体(SSTR)SSTR3、SSTR4和SSTR5在正常人睾丸组织中大量表达，而SSTR1和SSTR2通常不存在。在大鼠睾丸中，SSTR1、SSTR2和SSTR3受体主要存在于精母细胞中。此外，在I
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VII阶段的圆形精子细胞中观察到SSTR1
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3 mRNA的强烈积累，并在IX阶段(此时圆形精子细胞已经开始发生变化)急剧减少。所有上述事实表明，SST及其受体直接参与哺乳动物的精子发生。此前的专利数据表明SST及其受体参与鸟类的精子发生(RU 2337708,RU 2526571,Kudryavets N.I.,2018,Gorki BGSKhA,Biological characteristics of birds of different species)。
[0008]上述事实有力地表明，SST是维持卵泡和精子细胞静息期的因素之一。SST可以通过抑制颗粒细胞cAMP的产生来限制KL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组GBD
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SSTad
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SSTad蛋白，分子量为39.5kDa，所述重组GBD
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SSTad
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SSTad蛋白包括2个序列为SEQ ID NO:1的SST蛋白片段、序列为SEQ ID NO:2的间隔物、序列为SEQ ID NO:3的间隔物、序列为SEQ ID NO:4的来自变异链球菌的基因的α
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葡聚糖结合结构域，所述重组蛋白由核苷酸序列为SEQ ID NO:5的GBD
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SSTad
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SSTad基因编码。2.在葡聚糖上制备权利要求1所述的重组GBD
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SSTad
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SSTad蛋白的方法，所述方法包括：在孵育过程中，基于亲和相互作用，将大肠杆菌BL21[pGBD
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SSTad
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SSTad]菌株的细胞提...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗拉基米尔，
申请(专利权)人：谢尔盖，
类型：发明
国别省市：