一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断技术领域，优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法包括样本稀释液的制备方法、样品垫的制备方法、中和垫的制备方法、金标垫的制备方法和固相抗体反应膜的制备方法，优生优育十项抗体联合检测试剂盒包括检测卡和样本稀释液，检测卡包括上盖、下盖和五个检测试纸条，五个检测试纸条结构相同，检测试纸条包括样品垫、中和垫、金标垫、固相抗体反应膜、吸水纸和PVC板，本发明专利技术可以快速、准确检测弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹I型病毒、单纯疱疹II型病毒IgM/IgG抗体，可同时判断既往感染或近期感染。可同时判断既往感染或近期感染。可同时判断既往感染或近期感染。

【技术实现步骤摘要】
一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体的说，涉及一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]TORCH是指可导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体，它是一组病原微生物的英文名称缩写，其中T(Toxopasma)是弓形虫，R(Rubella.Virus)是风疹病毒，C(Cytomegalo.Virus)是巨细胞，H(Herpes.Virus)即是单纯疱疹I/II型。这组微生物感染有着共同的特征，即可造成母婴感染。孕妇由于内分泌改变和免疫力下降易发生原发感染，既往感染的孕妇体内潜在的病毒也容易被激活而发生复发感染。孕妇发生病毒血症时，病毒可通过胎盘或产道传播感染胎儿，引起早产、流产、死胎或畸胎等，以及引起新生儿多个系统、多个器官的损害，造成不同程度的智力障碍等症状。特别在怀孕初的三个月胚胎处于器官形成期，此时受病毒感染，可破坏细胞或抑制细胞的分裂和增殖。器官形成期以后感染病毒，可破坏组织和器官结构，并可形成持续感染，出生后继续排毒，能引起相应的病变。TORCH的感染影响着人口素质，与优生优育有重要关系。
[0003]弓形虫（TOX）孕早期弓形虫感染引起的胎儿畸形。主要包括：脑积水、小脑畸形、脉络膜视网膜炎及脑钙化。血行感染可引起胎儿多器官坏死性损害，如肝脾肿大、心肌炎及血小板减少症等。无症状感染科引起胎儿宫内发育迟缓及早产。孕晚期感染者一般不会引起胎儿发育异常。
[0004]风疹病毒（RV）孕早期感染风疹病毒通过胎盘可感染胎儿，引起流产、胎儿宫内发育迟缓及先天性风疹综合症 (CRS)。先天性风疹综合症是指由于风疹病毒感染所引起的胎儿畸形综合征。主要包括眼部畸形(如先天性白内障、小眼畸形、斜视)、头小畸形、先天性心脏病、聋哑、腭裂、短指和并指、尿道下裂及溶血性贫血等。孕妇风疹感染越早，胎儿畸形发生率较高，畸形程度也越严重。
[0005]巨细胞病毒（CMV）孕早期感染可引起流产及胎死；孕中晚期感染可引起胎儿黄疸、肝脾大、小脑畸形、脑积水、脑软化、白内障、巨细胞病毒肺炎、先天性心脏病、唇裂、腭裂等。
[0006]单纯疱疹病毒（HSV）孕妇孕早期感染后会引起流产或胎儿畸形。它的致畸作用较巨细胞病毒感染弱。常见的畸形有眼部畸形(如小眼球、独眼、白内障及视乳头萎缩)、神经系统功能缺陷(如大脑皮质萎缩及痴呆)及骨骼和皮肤损伤。单纯疱疹病毒能引起多种感染，如黏膜皮肤表面感染、生殖器和肛门感染、中枢神经系统感染以及偶见的内脏感染。孕妇感染HSV可使胎儿产生先天性感染，诱发流产、早产、死胎、畸形，新生儿HSV感染死亡率高，幸存者常有后遗症。女性生殖器HSV感染与宫颈癌的发生关系密切。HSV分为HSV
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1型和HSV
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2型两种血清型。常见的为HSV
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1型，主要引起皮肤黏膜感染，HSV
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2型主要引起生殖器感染和新生儿感染，并与宫颈癌的发生有关。
[0007]TORCH感染是严重危害新生儿健康的重要因素之一。可导致多器官损害及一系列严重后遗症。 因此，为减少病残儿的出生率及提高出生人口素质，临床工作者应进一步加
强对孕妇的宣传教育，积极做好TORCH感染的血清学筛查以便及早发现不良妊娠并及时处理。对新生儿也应常规开展TORCH检测，了解新生儿TORCH感染情况，以便早干预、早治疗。TORCH感染的血清学筛查对优生优育具有重要现实意义，临床上应常规开展TORCH检测。
[0008]TORCH感染后，患者特异性抗体IgM、IgG可迅速升高，IgM出现早，可持续6
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12周，而IgG出现晚，但可维持终生。TORCH
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IgG抗体为TORCH既往感染或感染期的重要指标；IgM为早期感染指标，胎盘中特异性IgM的检测是诊断胎儿宫内感染的可靠依据；而TORCH
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IgM/IgG抗体的联合检测，是判断TORCH早期感染或既往感染的重要方法。
[0009]在优生全套(TORCH)检测中，每一种病原微生物的特异抗体IgG和IgM之间可以有以下4种不同的组合结果，可以粗略地提示不同的感染状态。
[0010]有两种可能性：(1)既往感染，此次为“再发”感染；(2)近期“新发”感染，IgG已出现，IgM尚未消失阶段。
[0011]如果TORCH感染系“新发”感染，其对胎儿发生先天性感染的机率和造成的危害远远超过“再发”感染。有研究报告称，孕妇CMV“新发”感染所致的先天性感染率平均约为30％～40％，“再发”感染所致的先天感染率则小于1.0％。所以根据以上筛查结果，如初步诊断为近期感染，特别是IgG和IgM均为(+)时，就必须及早区别是“新发”还是“再发”，因为追踪复查可能不止1次2次，需要等待一段时间，会增加感染孕妇的焦虑情绪，又会延误正确诊断和处理。
[0012]孕前检查和咨询至少应在孕前3～6个月进行，以便有充分时间采取一些可行的预防措施，适时选择受孕时机，做好孕前和孕期保健争取成功理想的妊娠结局。
[0013]TORCH检测分直接指标的检测和间接指标检测。直接指标主要对病原体核酸、病毒抗原或通过对病毒培养进行检测，检测的是病毒本身，主要适用于诊断，但其诊断的灵敏度较差。间接指标主要对病原体的IgG/IgM抗体及IgG抗体的亲和力进行检测，是筛查和免疫状态评估的适用方法。目前，国际上公认的最方便、最先进的早期诊断方法是检测人体血清中的特异性IgM、IgG抗体，以判断受到感染的情况，保存检测过的剩余血清样本对可能的后续诊断有不可替代的参考价值。
[0014]市场现有产品针对单项检测或单一产品分别检测，无同一产品可同时检测五项病原体IgM和IgG抗体。

技术实现思路

[0015]本专利技术的第一目的是提供一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法，可以快速、准确检测弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹I型病毒、单纯疱疹II型病毒IgM/IgG抗体，可同时判断既往感染或近期感染。
[0016]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，包括样本稀释液的制备方法、样品垫的制备方法、中和垫的制备方法、金标垫的制备方法和固相抗体反应膜的制备方法；所述金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取双蒸水加热至沸腾，加入质量百分数1%的HAuCl4，加速搅拌，得金溶液；取质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得胶体金溶液；
2）、取胶体金溶液缓慢加入重组抗原，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，静置，制得重组抗原
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胶体金复合物溶液；3）、取胶体金溶液加入DNP
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BSA，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，制得DNP
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BSA
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胶体金复合物溶液；4）、取重组抗原...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括样本稀释液的制备方法、样品垫的制备方法、中和垫的制备方法、金标垫的制备方法和固相抗体反应膜的制备方法；所述金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取双蒸水加热至沸腾，加入质量百分数1%的HAuCl4，加速搅拌，得金溶液；取质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得胶体金溶液；2）、取胶体金溶液缓慢加入重组抗原，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，静置，制得重组抗原
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胶体金复合物溶液；3）、取胶体金溶液加入DNP
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BSA，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，制得DNP
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BSA
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胶体金复合物溶液；4）、取重组抗原
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胶体金复合物溶液、DNP
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BSA
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胶体金复合物溶液、胶体金稀释液混匀后得到金标处理液；5）、使用金标处理液处理玻璃纤维得到金标垫。2.根据权利要求1所述的一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述重组抗原为TOX重组抗原、RV重组抗原、CMV重组抗原、HSV
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I型重组抗原、HSV
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II型重组抗原中的一种。3.根据权利要求1所述的一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述胶体金稀释液的制备方法为：取8g Tris用超纯水900mL溶解，依次加入0.5g PVP40、7.5mL曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1gNaN3，HCL调节pH值至8.5，超纯水定容至1L，得胶体金稀释液。4.根据权利要求1所述的一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：使用金标处理液处理玻璃纤维的具体步骤如下：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取金标处理液倒入不锈钢盘，使金标处理液完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时。5.根据权利要求1所述的一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样本稀释液的制备方法包括如下步骤：制备200mM A液：取NaH2PO4·
2H2O 3.12g溶于超纯水，定溶至100mL；制备200mM B液：取Na2HPO4·
H2O 7.17g溶于超纯水，定溶至100mL；取A液39mL、B液61mL，依次加入3g NaCl、0.5g BSA、0.1mL吐温
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80、1.5g枸橼酸钠、0.2g枸橼酸、8g葡萄糖、1mL Proclin
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300，超纯水定容至1L，得样本稀释液。6.根据权利要求1所述的一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样品垫的制备方法包括如下步骤：按以下配方配制1L样品垫处理液：称取6.057g Tris，超...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，李桂芹，郑国华，张静静，赵倩，杨明霞，
申请(专利权)人：山东康华生物医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：