一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及生物分析技术领域，提供了一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒及检测方法。试剂盒包括彼此独立的试剂1和试剂2，试剂1由稳定剂和防腐剂置于适当的缓冲液中组成；试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒置于适当的缓冲液中组成。本发明专利技术采用胶乳免疫比浊法为检测原理测定血清抗谷氨酸脱羧酶抗体，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，能够应用于各种全自动生化分析仪进行大批量的测定，检测成本低，适合临床推广使用。适合临床推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物分析
，尤其涉及一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]谷氨酸脱羧酶(GAD)由GAD65和GAD67两种异构体组成。GAD65为1型糖尿病患者抗谷氨酸脱羧酶抗体(Anti
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GAD)的主要靶抗原。Anti
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GAD在糖尿病前期和1型糖尿病患者中的阳性率为70％
‑
90％，是糖尿病高危人群最敏感的指标。Anti
‑
GAD在大龄儿童和迟发性1型糖尿病患者中的阳性率更高。对于进展缓慢的1型糖尿病，亦即成人潜伏型自身免疫性糖尿病，Anti
‑
GAD可用于与2型糖尿病的鉴别诊断。Anti
‑
GAD还与一种罕见的神经疾病一僵人综合征相关，阳性率为60％
‑
100％。
[0003]目前，临床上主要是对谷氨酸脱羧酶抗体进行检测，常见方法有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着一些不足之处。间接免疫荧光法，操作较复杂，需要昂贵的荧光显微镜，只能进行定性检测，分析结果的客观性不足；酶联免疫吸附法，无法进行独立的、单人份的检测，定量测定所用的试剂种类较多，加注试剂的操作也极为繁琐，检测试剂之间容易交叉污染，检测结果的准确度和精密度较差。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少克服上述现有技术的缺点与不足其中之一，提供一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒及检测方法。本专利技术目的基于以下技术方案实现：
[0005]本专利技术目的一方面，提供了一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，包括彼此独立的试剂1和试剂2，其中：
[0006]所述试剂1由稳定剂和防腐剂置于适当的缓冲液中组成；
[0007]所述试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒置于适当的缓冲液中组成。
[0008]优选地，所述稳定剂包括氯化钠、氯化钾、蔗糖中的一种或多种；
[0009]所述防腐剂包括叠氮化钠、Procline300、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠中的一种或多种；
[0010]所述缓冲液包括柠檬酸钠、2
‑
吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS缓冲液；
[0011]所述表面活性剂包括吐温20、吐温40、曲拉通X
‑
100中的一种或多种。
[0012]优选地，所述试剂1包括缓冲剂50～150mmol/L，稳定剂0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.06wt％，所述缓冲剂的pH为6.5～7.5；
[0013]所述试剂2包括缓冲剂50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，表面活性剂0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.06wt％，包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒0.2～3wt％，所述缓冲剂的pH为6.5～7.5。
[0014]优选地，所述试剂1包括缓冲剂100mmol/L，稳定剂0.15mol/L，防腐剂0.03wt％；
[0015]所述试剂2包括缓冲剂100mmol/L，牛血清白蛋白1wt％，表面活性剂1wt％，防腐剂0.03wt％，包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒1wt％。
[0016]优选地，本专利技术提供的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，还包括校准品，所述校准品包含50wt％人血清、25～100mmol/L缓冲剂、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.06wt％防腐剂、靶值浓度范围为270～400IU/mL的抗谷氨酸脱羧酶抗体。
[0017]优选地，本专利技术提供的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，还包括质控品，所述质控品包含50wt％人血清、25～100mmol/L缓冲剂、2～10wt％保护剂、0.05～0.3mol/L氯化钠、0.01～0.06wt％防腐剂、抗谷氨酸脱羧酶抗体，所述抗谷氨酸脱羧酶抗体的水平1目标浓度范围为3～50IU/mL，所述抗谷氨酸脱羧酶抗体的水平2目标浓度范围为100～200IU/mL。
[0018]优选地，所述缓冲剂包括柠檬酸钠、2
‑
吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS，所述防腐剂包括叠氮化钠、Procline300、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠中的一种或多种。
[0019]本专利技术目的另一方面，提供了一种抗谷氨酸脱羧酶抗体含量的检测方法，采用以上所述的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，通过胶乳免疫比浊法进行检测：按照比例加入加入试剂1和人血清样品混匀，37℃反应5分钟，加入试剂2混匀，30秒后在600nm下读取吸光度值A1，5分钟后读取吸光度值A2。计算
△
A＝A2
‑
A1。
[0020]优选地，所述试剂1、试剂2与人血清样品进行免疫凝集反应的体积比为100～150：30～60：15。
[0021]优选地，所述人血清样品的抗谷氨酸脱羧酶抗体浓度检测范围为0～300IU/mL。
[0022]本专利技术可至少取得如下有益效果其中之一：
[0023]本专利技术的试剂盒采用胶乳免疫比浊法为检测原理测定血清抗谷氨酸脱羧酶抗体，在反应体系中，样本中的抗谷氨酸脱羧酶抗体和包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，可根据浊度吸光度变化计算样本中的抗谷氨酸脱羧酶的活性。与目前临床使用试剂盒相比，本专利技术的特异性、灵敏度、准确性一致，且能够应用于各种全自动生化分析仪进行大批量的测定，不需要昂贵的检测仪器，检测时间短、操作方便、检测成本低、无放射性污染，更适合临床推广使用。
具体实施方式
[0024]下面将对本专利技术的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]检验原理：
[0026]在反应体系中，样本中的抗谷氨酸脱羧酶抗体和包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，可根据浊度吸光度变化计算样本中的抗谷氨酸脱羧酶的活性。
[0027]实施例1试剂盒的制备
[0028]一.试剂1和试剂2
[0029]1.试剂主要原料
[0030]抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)的主要原料是包被有谷氨酸脱羧酶抗原的胶乳颗粒，经过对国内外厂家的调研和筛选，选择了两个厂家的产品，分别为北京百尚利德和北京华元山水生物科技有限公司。
[0031]缓冲液及pH值：
[0032]缓冲体系pH值Tris
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HCl(三羟甲基氨基甲烷)7.5PBS(NaH2PO4·
Na2HPO4·
12H2O)7.5柠檬酸钠6.5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂1和试剂2，其中：所述试剂1由稳定剂和防腐剂置于适当的缓冲液中组成；所述试剂2由牛血清白蛋白、表面活性剂、防腐剂和包被有谷氨酸脱羧酶抗原的胶乳颗粒置于适当的缓冲液中组成。2.根据权利要求1所述的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括氯化钠、氯化钾、蔗糖中的一种或多种；所述防腐剂包括叠氮化钠、Procline300、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠中的一种或多种；所述缓冲液包括柠檬酸钠、2
‑
吗啉乙磺酸、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷或PBS缓冲液；所述表面活性剂包括吐温20、吐温40、曲拉通X
‑
100中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括缓冲剂50～150mmol/L，稳定剂0.05～0.3mol/L，防腐剂0.01～0.06wt％，所述缓冲剂的pH为6.5～7.5；所述试剂2包括缓冲剂50～150mmol/L，牛血清白蛋白0.5～2wt％，表面活性剂0.5～2wt％，防腐剂0.01～0.06wt％，包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒0.2～3wt％，所述缓冲剂的pH为6.5～7.5。4.根据权利要求3所述的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括缓冲剂100mmol/L，稳定剂0.15mol/L，防腐剂0.03wt％；所述试剂2包括缓冲剂100mmol/L，牛血清白蛋白1wt％，表面活性剂1wt％，防腐剂0.03wt％，包被有谷氨酸脱羧酶抗原胶乳颗粒1wt％。5.根据权利要求1所述的一种抗谷氨酸脱羧酶抗体测定试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品包含50wt％人血清、25～10...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭勇，郝立颖，曹培杰，周晶，邢冬梅，
申请(专利权)人：北京世纪沃德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：