一种检测食品中核苷酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测食品中核苷酸的方法，属于化学成分检测技术领域。该方法包括：配置标准混合溶液：分别称取多种核苷酸的标准品，使用每一种核苷酸的标准品配置成多份具有浓度梯度的标准混合溶液。配置供试品溶液：称取供试品，配置pH为酸性的溶液，用0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤得到供试品溶液。液相色谱分析：采用表面正电荷修饰的反相色谱柱，以有机溶剂与缓冲盐为流动相，对标准混合溶液和供试品溶液进行色谱分析，对供试品中的多种所述核苷酸含量进行测定。该方法可以同时测试多种核苷酸的含量，保证了检测结果的准确性；不使用离子对试剂，各分析物保留时间稳定，提高了方法的耐用性；增强胞苷酸的保留时间，改善了基质干扰问题。质干扰问题。质干扰问题。

【技术实现步骤摘要】
一种检测食品中核苷酸的方法


[0001]本专利技术涉及一种检测食品中核苷酸的方法，属于化学成分检测


技术介绍

[0002]核苷酸是一类由嘌呤碱/嘧啶碱、核糖/脱氧核糖和磷酸三种物质组成的化合物。它们是人体所需的重要免疫物质，能帮助激活淋巴细胞活力，提高免疫球蛋白水平，参与了人体几乎全部生理代谢过程。经研究，母乳中含有胞苷酸(CMP)、腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)等多种核苷酸，为提高婴幼儿的免疫调节功能和记忆力发挥着重要作用。由于牛乳中核苷酸含量很低，我国GB 14880
‑
2012《食品营养强化剂使用标准》规定了婴幼儿配方食品中上述五种核苷酸的添加量为0.12g/kg～0.58g/kg(以核苷酸总量计)。
[0003]从核苷酸的结构特点分析，它们均为强极性可电离的化合物，在色谱分离分析方面传统反相色谱不容易产生有效保留。目前文献已经报道了多种婴幼儿食品和乳品中的核苷酸检测方法，如国标GB 5413.40—2016《婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》采用反相离子对色谱法检测5种核苷酸，试样经水提蛋白沉淀后，直接上机进行分析。检测过程中发现胞苷酸 (CMP)保留太弱，存在较明显的基质干扰。同时，实验中发现供试品中核苷酸保留时间与对照品有明显差异，给定量分析带来严重不利影响(主要是离子对方法造成的不稳定性)。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测食品中核苷酸的方法，基于表面正电荷修饰的反相色谱柱，通过在反相色谱柱中引入阴离子交换作用，可以改善待测物的色谱保留及与样品基质间的分离选择性，能够同时检测多种核苷酸的含量；同时，由于不使用离子对试剂，各被测物保留时间稳定性，定性定量准确，方法耐用性良好。
[0005]本专利技术提供一种检测食品中核苷酸的方法，包括如下步骤：
[0006]配置标准混合溶液：分别称取多种核苷酸的标准品，配置成多份具有浓度梯度的标准混合溶液；
[0007]配置供试品溶液：称取供试品，配置pH为酸性的溶液，用0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤得到供试品溶液；
[0008]液相色谱分析：采用表面正电荷修饰的反相色谱柱，以有机溶剂与缓冲盐为流动相，对所述标准混合溶液和所述供试品溶液进行色谱分析，对所述供试品中的多种所述核苷酸含量进行测定。
[0009]反相色谱柱的表面修饰有正电荷，可以使色谱柱既具有疏水作用，又具有阴离子交换作用，从而可以改善待测物的色谱保留及与样品基质间的分离选择性，能够同时检测多种核苷酸的含量；同时，由于不使用离子对试剂，各被测物保留时间稳定性，定性定量准确，方法耐用性良好。
[0010]在一些实施例中，所述正电荷修饰的基团为阴离子交换基团。
[0011]在一些实施例中，所述反相色谱柱为C8或C18，所述阴离子交换基团为在一些实施例中，所述反相色谱柱为C8或C18，所述阴离子交换基团为其中，R、R1、R2和R3均为烃基。
[0012]通过上述方法，制备得到的色谱柱为反相/阴离子交换混合色谱柱。
[0013]在一些实施例中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈中的一种或两种以上任意组合。
[0014]在一些实施例中，所述缓冲盐的浓度为5～50mmol/L。
[0015]在一些实施例中，所述缓冲盐为甲酸铵、乙酸铵、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、高氯酸铵、高氯酸钠中的一种或两种组合。
[0016]在一些实施例中，所述液相色谱分析的条件为：采用粒径1.5～5μm的所述表面正电荷修饰的反相色谱柱；流速为0.5～2mL/min；柱温为20～50℃；以pH为2～5、浓度为5～50 mmol/L的磷酸二氢钾为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱(v/v)，线性梯度设置为0～12min，0～24％B。
[0017]在一些实施例中，所述配置供试品溶液的步骤中，所述微孔滤膜为水系。
[0018]在一些实施例中，所述供试品中不含有淀粉，所述供试品溶液的配置方法为：称取供试品，加入50～60℃的热水，使供试品溶解，并调节溶液的pH至酸性，然后定容、离心并使用0.22～0.45μm的水系微孔滤膜过滤得到供试品溶液。
[0019]在一些实施例中，所述供试品中含有淀粉，所述供试品溶液的配置方法为：称取供试品，加入淀粉酶和30～40℃的热水，使供试品溶解，并在35～39℃的条件下酶解10～60min，然后调节溶液的pH至酸性，然后定容、离心并使用0.22～0.45μm的水系微孔滤膜过滤得到供试品溶液。
[0020]在一些实施例中，所述配置供试品溶液的步骤中，所过滤之前，还可以加入氧化剂。
[0021]在一些实施例中，所述氧化剂为H2O2或过氧乙酸。
[0022]本专利技术提供的检测食品中核苷酸的方法的有益效果包括：
[0023](2)反相色谱柱的表面修饰有正电荷，可以使色谱柱既具有疏水作用，又具有阴离子交换作用，从而可以改善待测物的色谱保留及与样品基质间的分离选择性，能够同时检测多种核苷酸的含量。
[0024](3)由于不使用离子对试剂，各被测物保留时间稳定性，定性定量准确，方法耐用性良好。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，因此不应被看作是对范围的限定。对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为本专利技术提供的检测食品中核苷酸的方法的工艺流程图；
[0027]图2为实施例中标准品及三种不同品牌奶粉样品的检测色谱图；
[0028]图3为实施例2中标准品及供试品的检测色谱图；图4为对比例中标准品及供试品的检测色谱图。
具体实施方式
[0029]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。
[0030]图1为本专利技术提供的检测食品中核苷酸的方法的工艺流程图。请参阅图1，该方法包括如下步骤：
[0031]S110，配置标准混合溶液：分别称取多种核苷酸的标准品，配置成多份具有浓度梯度的标准混合溶液。
[0032]其中，食品可以是食品或乳品，例如：本专利技术中的食品可以是婴幼儿食品和乳品。
[0033]本专利技术中，选择核苷酸的种类与检测标准有关，按照现有的《食品营养强化剂使用标准》，如果是对婴幼儿食品进行检测，则需要检测胞苷酸(CMP)、腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)等多种核苷酸。
[0034]配置标准混合溶液：分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP、GMP和I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测食品中核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：配置标准混合溶液：分别称取多种核苷酸的标准品，配置成多份具有浓度梯度的标准混合溶液；配置供试品溶液：称取供试品，配置pH为酸性的溶液，用0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤得到供试品溶液；液相色谱分析：采用表面正电荷修饰的反相色谱柱，以有机溶剂与缓冲盐为流动相，对所述标准混合溶液和所述供试品溶液进行色谱分析，对所述供试品中的多种所述核苷酸含量进行测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述正电荷修饰的基团为阴离子交换基团。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述反相色谱柱为C8或C18，所述阴离子交换基团为
‑
NH2，其中，R、R1、R2和R3均为烃基。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈中的一种或两种以上任意组合。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲盐的浓度为5
‑
50mmol/L；或/和，所述缓冲盐为甲酸铵、乙酸铵、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、高氯酸铵、高氯酸钠中的一种或两种组合。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述液相色谱分析的条件为：采用粒径1.5～...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏杰，李明凤，李博，苗玉玲，王利春，
申请(专利权)人：华谱科仪大连科技有限公司，
类型：发明
国别省市：