奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株制造技术

本发明专利技术提供了一种奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株，涉及药物监测技术领域。本发明专利技术提供的奥卡西平代谢物半抗原衍生物能实现对奥卡西平代谢物10,11

【技术实现步骤摘要】
奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株


[0001]本专利技术属于药物监测
，具体涉及奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株。

技术介绍

[0002]奥卡西平是一种神经性药物，可用于局限性及全身性癫痫发作，奥卡西平在临床上主要用于对卡马西平有过敏反应者，可作为卡马西平的替代药物应用临床。
[0003]10,11
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二氢
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10
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羟基卡马西平（MHD）是奥卡西平的主要活性代谢产物。奥卡西平血药浓度存在较大的个体间和个体内变异，提示血药浓度监测可以在判断奥卡西平疗效、评价治疗效果、规避副反应以及个体化用药方案调整等方面发挥重要作用。采集尿样测定药物浓度的目的与血液不同，尿液中原型药物的测定主要用于药物的剂量回收、尿清除率、体内药物代谢的研究等。
[0004]但目前奥卡西平代谢物MHD血药浓度监测在临床实践中开展很少，与MHD血药浓度检测方法繁琐、目前还没有好的免疫学测定方法。此外MHD和卡马西平及其代谢物结构上高度相似。MHD的检测分析主要有LC
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MS法（如中国专利CN 110763800 A），但是这类方法满足不了临床高通量、快速准确的检测需求。
[0005]建立高灵敏度高特异性的奥卡西平代谢物MHD免疫学检测的前提是获得高质量的抗奥卡西平代谢物MHD抗体，进一步的依赖于奥卡西平代谢物MHD人工抗原的设计和制备。
[0006]目前国内外还没有奥卡西平代谢物MHD衍生及抗体制备的专利报道，也没有商品化的奥卡西平代谢物MHD及相应抗体。因此，开发满足MHD的临床检测特异性的奥卡西平代谢物抗体具有重要的意义。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供了奥卡西平代谢物的半抗原衍生物、人工抗原和单克隆抗体及其应用、杂交瘤细胞株。本专利技术提供的奥卡西平代谢物半抗原衍生物与载体蛋白结合形成的奥卡西平代谢物人工抗原免疫动物后产生的奥卡西平代谢物单克隆抗体能够高灵敏度特异性识别奥卡西平代谢物MHD，满足奥卡西平代谢物的临床检测特异性需求。
[0008]本专利技术提供了一种奥卡西平代谢物半抗原衍生物，具有式I所示结构：式I。
[0009]本专利技术提供了上述技术方案所述奥卡西平代谢物半抗原衍生物的制备方法，包括以下步骤：将化合物1、乙醛酸和水混合，在酸性条件下进行醛胺缩合反应，得到化合物2；将所述化合物2、还原剂和呋喃类溶剂混合，进行还原反应，得到所述奥卡西平代谢物半抗原衍生物；化合物1化合物2。
[0010]本专利技术提供了一种奥卡西平代谢物人工抗原，由上述技术方案所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物或上述技术方案所述制备方法制得的奥卡西平代谢物半抗原衍生物与载体蛋白共价偶联得到；所述载体蛋白为具有免疫原性的蛋白质或多肽。
[0011]优选地，所述载体蛋白包括血清白蛋、鸡卵清蛋白或牛甲状腺球蛋白。
[0012]本专利技术提供了上述技术方案所述奥卡西平代谢物人工抗原的制备方法，包括以下步骤：将权利要求1所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物或权利要求2所述制备方法制得的奥卡西平代谢物半抗原衍生物、有机胺盐类交联剂和极性溶剂混合进行活化，得到活化的奥卡西平代谢物半抗原衍生物溶液；将所述活化的奥卡西平代谢物半抗原衍生物溶液和载体蛋白的缓冲液混合进行共价偶联反应，得到所述奥卡西平代谢物人工抗原。
[0013]本专利技术提供了一种产生奥卡西平代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C5，所述杂交瘤细胞株3C5的保藏编号为CGMCC NO.：45160。
[0014]本专利技术提供了一种奥卡西平代谢物单克隆抗体，由上述技术方案所述的杂交瘤细胞株3C5产生。
[0015]本专利技术提供了上述技术方案所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物和/或上述技术方案所述的奥卡西平代谢物单克隆抗体在制备检测奥卡西平代谢物中的应用。
[0016]本专利技术提供了一种奥卡西平代谢物均相酶免疫检测试剂，包括独立分装的试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括酶底物和权利要求7所述的奥卡西平代谢物单克隆抗体；所述试剂R2包括奥卡西平代谢物酶标偶联物，所述奥卡西平代谢物酶标偶联物为权利要求1所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物和葡萄糖
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磷酸脱氢酶的偶联物。
[0017]本专利技术提供了一种奥卡西平代谢物磁微粒化学发光检测试剂，包括独立分装的磁微粒工作液和酶标工作液；所述磁微粒工作液包括磁珠和权利要求7所述的奥卡西平代谢物单克隆抗体；所述酶标工作液包括奥卡西平代谢物酶标偶联物，所述奥卡西平代谢物酶标偶联物为权利要求1所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物和血清碱性磷酸酶的偶联物。
[0018]本专利技术提供一种奥卡西平代谢物半抗原衍生物，具有式I所示结构。本专利技术提供的
奥卡西平代谢物半抗原衍生物，衍生位点位于MHD和其类似的化合物的相同位点，因此暴露出MHD的特异性结构，实现对奥卡西平代谢物MHD的特异性识别，且偶联载体蛋白得到的奥卡西平代谢物MHD抗原能够准确获得对MHD具有特异性结合能力的抗体，满足MHD的临床检测特异性、高灵敏度和准确性的需求。
[0019]本专利技术还提供了一种产生奥卡西平代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号分别CGMCC NO.：45160。本专利技术提供的杂交瘤细胞株3C5产生的奥卡西平代谢物单克隆抗体具有能够高灵敏度等效识别奥卡西平代谢物MHD的能力，同时具备优于现有已知抗体的特异性，与MHD
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葡糖苷酸、二氢二羟基卡马西平、奥卡西平、艾司利卡西平醋酸酯、环氧卡马西平、卡马西平和二氢卡马西平无明显的交叉反应，满足奥卡西平代谢物MHD的临床检测特异性、高灵敏度和准确性的需求。适合于奥卡西平代谢物MHD药物浓度监测方法的建立。
[0020]本专利技术还提供了上述技术方案所述的奥卡西平代谢物单克隆抗体在制备检测奥卡西平代谢物试剂中的应用。由于本专利技术的奥卡西平代谢物单克隆抗体具有能够高灵敏度等效识别奥卡西平代谢物的能力，使其能够应用于制备检测奥卡西平代谢物的检测试剂（奥卡西平代谢物均相酶免疫检测试剂和奥卡西平代谢物磁微粒化学发光检测试剂），满足奥卡西平代谢物的临床检测特异性、高灵敏度和准确性的需求。
附图说明
[0021]图1为实施例5构建的均相酶法同LC
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MS法的测定奥卡西平代谢物的结果比对图。
[0022]生物保藏信息杂交瘤细胞株3C5，保藏日期为2022年05月19日，保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101，分类命名为杂交瘤细胞株，保藏编号为CGMCC NO.：45160。
具体实施方式
[0023]本专利技术提供一种奥卡西平代谢物半抗原衍生物，具有式I所示结构：式I。
[0024]本专利技术提供了上述技术方案所述奥卡西平代谢物半抗原衍生物的制备方法，包括以下步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种奥卡西平代谢物半抗原衍生物，其特征在于，具有式I所示结构：式I。2.权利要求1所述奥卡西平代谢物半抗原衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将化合物1、乙醛酸和水混合，在酸性条件下进行醛胺缩合反应，得到化合物2；将所述化合物2、还原剂和呋喃类溶剂混合，进行还原反应，得到所述奥卡西平代谢物半抗原衍生物；化合物1化合物2。3.一种奥卡西平代谢物人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物或权利要求2所述制备方法制得的奥卡西平代谢物半抗原衍生物与载体蛋白共价偶联得到；所述载体蛋白为具有免疫原性的蛋白质或多肽。4.根据权利要求3所述的奥卡西平代谢物人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白包括血清白蛋、鸡卵清蛋白或牛甲状腺球蛋白。5.权利要求3或4所述奥卡西平代谢物人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的奥卡西平代谢物半抗原衍生物或权利要求2所述制备方法制得的奥卡西平代谢物半抗原衍生物、有机胺盐类交联剂和极性溶剂混合进行活化，得到活化的奥卡西平代谢物半抗原衍生物溶液；将所述活化的奥卡西平代谢物半抗原衍生物溶液和载体蛋白的缓冲液混合进行共价偶联反应，得到所述奥卡西平代谢物...

【专利技术属性】
技术研发人员：周建平，周裕军，许秀丽，常缘荣，
申请(专利权)人：北京丹大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：