一种颠茄草药材特征图谱的建立方法及其应用技术

一种颠茄草药材特征图谱的建立方法，包括以下步骤：（1）、对照品溶液的制备；（2）、供试品溶液的制备；（3）、高效液相色谱分析；（4）、测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，以山柰素

【技术实现步骤摘要】
一种颠茄草药材特征图谱的建立方法及其应用


[0001]本专利技术涉及中药材的特征图谱
，具体涉及一种颠茄草药材特征图谱的建立方法及其应用。

技术介绍

[0002]颠茄为茄科植物颠茄Atropa belladonna L.的干燥全草。在开花至结果期内采挖，除去粗茎和泥沙，切段干燥。颠茄主要含有莨菪类生物碱，包括天仙子胺(莨菪碱)、东莨菪碱、山莨菪碱等。由于该类生物碱具有解痉、镇痛、镇静等作用，具有较高的药用价值，但是，这些成分也存在于曼陀罗、莨菪等植物中，在生产颠茄草类相关提取物及制剂产品时，存在混用的风险；《中国药典》2020年版一部“颠茄草”项下，对颠茄草的质量控制指标中，在化学显色鉴别、薄层色谱鉴别、含量测定中均以生物碱为检测对象，存在重复评价的问题；颠茄草中除了含有莨菪类生物碱外，还含有香豆素类、糖苷类、黄酮类成分，香豆素类如东莨菪内酯，药理作用显示其具有抗肿瘤、抗炎镇痛、保肝、降血压等作用，糖苷类如东莨菪苷、槲皮素
‑3‑
O
‑
半乳糖
‑
(6
→
1)鼠李糖
‑7‑
O
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葡萄糖苷、山柰素
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半乳糖
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(6
→
1)鼠李糖
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O
‑
葡萄糖苷等，黄酮类如芦丁，他们也具有镇痛抗炎等药理活性，另外，这些非生物碱成分的共同特点是在颠茄叶、花中含量较高，在颠茄草根、茎、果实中含量很低或者没有，而颠茄草是全草入药，在颠茄的收获期，有人为了单纯提高生物碱的含量，避免莨菪类生物碱含量不合格，使采收期延后，造成种子成熟较多，已基本无花，且叶子仅剩余少量顶部小叶，不符合颠茄草采收要求；同时，只剩顶部小叶，会引起上述除生物碱外其他活性成分较多的丧失，造成资源浪费。
[0003]目前，随着生活水平的提高，对健康需求的增加，医药市场不断繁荣发展，带动了颠茄提取物市场的繁荣扩大，国内种植颠茄草的地区越来越多，已从山东、湖南等主产区逐渐发展至黑龙江、陕西、新疆、江西、湖北、河南等地，由于颠茄草为外来引种植物，不存在“道地药材”之说，中国各地由于地理环境、土壤、种植水平等差异，导致各地的颠茄草在植物形态、生长周期、播种与成熟季节等方面存在较大差异，也可能会导致颠茄草中代表其植物特征的化学成分存在差异，进而影响药材的质量的均一稳定性，而国内至今未开展与颠茄草有关的特征成分研究。
[0004]为全面、合理地控制颠茄草的质量及合理利用颠茄草，有必要建立颠茄草的特征成分图谱，弥补颠茄草质量控制不足，使其更加完善、科学，指导颠茄草产业的健康发展，为药品的安全、有效、质量可靠提供技术支持。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种颠茄草药材特征图谱的建立方法及其应用，可有效解决颠茄草质量控制不足的问题，利用该图谱能明显区别颠茄草和其他药材，并能保证颠茄草药材的植物完整性，为药材内在质量的进一步控制提供参考依据，提升、完善颠茄草质量控制水平，规范、保障临床用药。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决的技术方案是，一种颠茄草药材特征图谱的建立方法，包括以下步骤：
[0007](1)、对照品溶液的制备：取东莨菪苷、绿原酸、槲皮素
‑3‑
O
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半乳糖
‑
(6
→
1)鼠李糖
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O
‑
葡萄糖苷、槲皮素
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葡萄糖
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→
1)鼠李糖
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葡萄糖苷、山柰素
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半乳糖
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1)鼠李糖
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O
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葡萄糖苷、山柰素
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葡萄糖
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→
1)鼠李糖
‑7‑
O
‑
葡萄糖苷、东莨菪内酯、芦丁和山奈酚
‑3‑
O
‑
鼠李糖半乳糖苷对照品，以体积浓度50％甲醇溶解，分别配成浓度为10.48μg
·
mL
‑1、10.12μg
·
mL
‑1、10.03μg
·
mL
‑1、10.56μg
·
mL
‑1、20.31μg
·
mL
‑1、10.12μg
·
mL
‑1、10.03μg
·
mL
‑1、10.62μg
·
mL
‑1和10.59μg
·
mL
‑1的溶液，过微孔滤膜，得对照品溶液；
[0008](2)、供试品溶液的制备：取颠茄草粉末2g，加入体积浓度50％甲醇25mL，在功率400W，频率60KHz条件下，超声处理30min，冷却至室温，用体积浓度50％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤得滤液，再过微孔滤膜，得供试品溶液；
[0009](3)、高效液相色谱分析：色谱条件为：Ultimate XB
‑
C
18
色谱柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：A为甲醇，B为质量浓度0.05％磷酸水溶液，梯度洗脱顺序为：0～5min，3％～15％A，97％～85％B；5～60min，15％～60％A，85％～40％B；体积流量0.8mL
·
min
‑1；检测波长344nm；柱温35℃；进样量10μL；
[0010](4)、测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，以山柰素
‑3‑
O
‑
半乳糖
‑
(6
→
1)鼠李糖
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O
‑
葡萄糖苷为特征图谱参照物，以山柰素
‑3‑
O
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半乳糖
‑
(6
→
1)鼠李糖
‑7‑
O
‑
葡萄糖苷色谱峰为参照物峰，测定生成16批颠茄草药材的指纹图谱，采用相对保留时间标定颠茄草的共有特征峰，得颠茄草药材特征图谱。
[0011]所述的颠茄草药材特征图谱共有特征峰有17个，其中8号峰为山柰素
‑3‑
O
‑
半乳糖
‑
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→
1)鼠李糖
‑7‑
O
‑
葡萄糖苷，以参照物峰相应的峰为S峰，所述17个共有特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.44
±
0.05；峰2：0.62
±...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种颠茄草药材特征图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、对照品溶液的制备：取东莨菪苷、绿原酸、槲皮素
‑3‑
O
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半乳糖
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→
1)鼠李糖
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O
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葡萄糖苷、槲皮素
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O
‑
葡萄糖
‑
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→
1)鼠李糖
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O
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葡萄糖苷、山柰素
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O
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半乳糖
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1)鼠李糖
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O
‑
葡萄糖苷、山柰素
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葡萄糖
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1)鼠李糖
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葡萄糖苷、东莨菪内酯、芦丁和山奈酚
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鼠李糖半乳糖苷对照品，以体积浓度50%甲醇溶解，分别配成浓度为10.48μg
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‑1、10.12μg
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‑1、10.12μg
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‑1、10.03μg
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‑1、10.62μg
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mL
‑1和10.59μg
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‑1的溶液，过微孔滤膜，得对照品溶液；（2）、供试品溶液的制备：取颠茄草粉末2g，加入体积浓度50%甲醇25mL，在功率400W，频率60KHz条件下，超声处理30min，冷却至室温，用体积浓度50%甲醇补足减失，摇匀，过滤得滤液，再过微孔滤膜，得供试品溶液；（3）、高效液相色谱分析：色谱条件为：Ultimate XB
‑
C
18
色谱柱；流动相：A为甲醇，B为质量浓度0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱顺序为：0～5 min，3%～15%A，97%～85%B；5～60 min，15%～60%A，85%～40%B；体积流量0.8 mL
·
min
‑1；检测波长344 nm；柱温35℃；进样量10 μL；（4）、测定：分别吸取对照品溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊伟，郭立，李磊，卢玉斌，张春霞，何梅，郭军霞，
申请(专利权)人：河南羚锐制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：