用CRISPR-Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用制造技术

本发明专利技术公开了用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
用CRISPR
‑
Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及用CRISPR技术敲除大肠杆菌海藻糖酶基因并用改造菌株生产磷脂酶D的方法。

技术介绍

[0002]磷脂酶D(EC 3.1.4.4，PLD)是一种能够作用于磷酸二酯键的酶，能够催化磷脂发生碱基交换反应或者水解反应。基于这一独特的反应位点，磷脂酶D有广泛的应用：以磷脂作为底物能获得各种稀有磷酯，如磷酯酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺等在医药及食品行业有重要应用的高附加值产品；对磷脂粗品进行纯化制备普通提纯工艺难以获得的高纯度磷脂；用于药物的开发，催化核苷类、多肽类和多糖类与磷脂连接制成脂质体，构建高效的药物递送系统。
[0003]目前工业上和实验室的研究中所采用的磷脂酶D主要来源于高等植物或者放线菌。经过一系列的研究表明，来源于放线菌特别是来源于链霉菌的磷脂酶D，有最高的转磷脂酰基活性。但由于链霉菌自身磷脂酶D的产量较少，不能满足工业生产的要求，越来越多的异源表达系统被用于表达磷脂酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海藻糖酶缺陷菌株，其特征在于：所述海藻糖酶缺陷菌株为E.coli BW25113
△
treA，E.coli BW25113
△
treA
△
treC或E.coli BW25113
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treA
△
treC
△
treF。2.根据权利要求1所述的海藻糖酶缺陷菌株，其特征在于：所述海藻糖酶缺陷菌株通过以下方法得到：利用CRISPR
‑
Cas9技术敲除E.coli BW25113的海藻糖酶基因treA、treC、treF，分别获得所述E.coli BW25113
△
treA、所述E.coli BW25113
△
treA
△
treC、所述E.coli BW25113
△
treA
△
treC
△
treF。3.一种磷脂酶D表达菌株，其特征在于：所述磷脂酶D表达菌株为海藻糖酶缺陷菌株E.coli BW25113
△
treA
...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌雪萍，陈少锋，卢英华，姚传义，陈翠雪，赵旭蕊，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：