一种提高胎儿血红蛋白表达的方法技术

提供一种基因编辑造血干细胞BCL11A的增强子位点的方法，包括通过基因编辑技术破坏BCL11A基因组CTTCCT区域。基因编辑后的造血干细胞具有正常细胞功能，能显著提高胎儿血红蛋白的表达，用于β

【技术实现步骤摘要】
一种提高胎儿血红蛋白表达的方法
[0001]本申请是申请号为201880069636.8、专利技术名称为“一种提高胎儿血红蛋白表达的方法”的中国专利申请的分案申请。
[0002]交叉引用
[0003]本申请要求享有2017年10月27日提交的中国专利申请2017110277086的优先权，该中国专利申请的公开内容以其整体通过引用并入本申请。


[0004]本专利技术涉及用于治疗地中海贫血和镰刀形红细胞贫血等贫血疾病的细胞治疗方案，其包含利用基因编辑技术，高效安全地基因修饰人的造血干细胞的BCL11A的增强子位点，尤其是通过基因编辑技术破坏造血干细胞中2号染色体上CTTCCT连续6个碱基的BCL11A基因组区域，上调γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达，实现治疗疾病的目的。

技术介绍

[0005]地中海贫血又称为珠蛋白生成障碍贫血或者海洋性贫血，是一组由于基因缺陷等遗传因素导致的溶血性贫血类疾病。遗传性基因缺陷致使血红蛋白中一种或几种珠蛋白肽链合成缺失或者不足，从而导致贫血或者溶血的病理状态。合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失会导致血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高人造血干细胞胎儿血红蛋白(HbF)表达的方法，包括：通过基因编辑技术破坏所述造血干细胞中2号染色体上从CTTCCT序列上游0
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15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0
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15个核苷酸的BCL11A基因组区域，其中该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间。2.权利要求1所述的方法，其中所述BCL11A基因组区域序列为CTTCCT。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述基因编辑技术为基于锌指核酸酶的基因编辑技术、TALEN基因编辑技术或CRISPR/Cas基因编辑技术。4.权利要求3所述的方法，其中所述基因编辑技术为CRISPR/Cas9基因编辑技术。5.权利要求1
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4任一权利要求所述的方法，包括向所述造血干细胞导入靶向所述BCL11A基因组区域的sgRNA以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。6.权利要求3
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5任一权利要求所述的方法，包括向所述造血干细胞导入包含选自SEQ ID NOs:3、4、8和33
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63任一序列的sgRNA以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。7.权利要求3
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6任一权利要求的方法，将包含SEQ ID NO：4的序列的sgRNA导入所述造血干细胞以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。8.权利要求5
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7任一权利要求的方法，其中所述sgRNA是经过2
’‑
O
‑
甲基类似物和/或核苷酸间3
’
硫代修饰的。9.权利要求8的方法，其中所述化学修饰为所述sgRNA的5
’
端前一个、二个和/或三个碱基和/或3
’
端的最后一个碱基的2
’‑
O
‑
甲基类似物修饰。10.权利要求4
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9任一权利要求的方法，其中将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。11.权利要求10的方法，其中通过电转方法将sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。12.权利要求11的方法，其中所述电转条件为200
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600V，0.5ms
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2ms。13.一种通过CRISPR/Cas9系统体外高效编辑造血干细胞的方法，包括将靶向从CTTCCT序列上游0
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15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0
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15个核苷酸的BCL11A基因组区域的sgRNA导入造血干细胞，其中该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间，其中该sgRNA是经过2
’‑
O
‑
甲基类似物和/或核苷酸间3
’
硫代修饰的。14.权利要求13的方法，包括将含有选自SEQ ID NO：4、8和33
‑
63任一序列的sgRNA导入造血干细胞，其中该sgRNA是经过2
’‑
O
‑
甲基类似物和/或核苷酸间3
’
硫代修饰的。15.权利要求13或14的方法，其中将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。16.权利要求15的方法，其中通过电转方法将sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。17.权利要求16的方法，其中所述电转条件为200
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600V，0.5ms
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2ms。18.通过权利要求1～17中任一权利要求所述的方法得到的造血干细胞。19.一种通过基因改造使胎儿血红蛋白(HbF)表达升高的人造血干细胞，其中该造血干细胞中第2号染色体上从CTTCCT序列上游0
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15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0
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15个核苷酸的BCL11A基因组区域的sgRNA导入造血干细胞，其中该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间。
20.通过分化培养权利要求18...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁鹏飞，方日国，于玲玲，夏鹏辉，王佳，梁福才，
申请(专利权)人：广州辑因医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：