一种体外刺激大肠杆菌生长的方法技术

本发明专利技术涉及体外培养技术与肠道菌群技术领域，具体涉及一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，包括如下步骤：获取氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液；获取无抗BL21和无抗DH5α菌液：牦牛奶制备：分组培养；pH值的测定。其具有以下有益效果：通过添加5mg/mL牦牛奶促进大氨苄青霉素抗性BL21、氨苄青霉素抗性DH5α、无抗BL21、无抗DH5α在LB培养基中增殖；通过添加5mg/mL牦牛奶使菌液的pH值降低。通过添加5mg/mL牦牛奶使菌液的pH值降低。通过添加5mg/mL牦牛奶使菌液的pH值降低。

【技术实现步骤摘要】
一种体外刺激大肠杆菌生长的方法


[0001]本专利技术涉及体外培养技术与肠道菌群
，具体涉及一种体外刺激大肠杆菌生长的方法。

技术介绍

[0002]牦牛奶营养丰富，富含脂肪、必需矿物质和健康的多不饱和脂肪酸，如共轭亚油酸和omega
‑
3脂肪酸。
[0003]现有技术中，肠道微生物与疾病关系取得了重要研究进展，人类肠道菌群与宿主健康有密切联系，大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)是人和动物肠道中的常见菌群，帮助宿主消化摄入的碳水化合物等食物，其在肠道中丰度的高低会影响宿主的健康。而大肠杆菌BL21和DH5α是实验室最常用的基因工程菌，具有迅速繁殖、生长，大规模培养的特点。因此，用体外培养的技术方法可以研究牦牛奶对大肠杆菌的生长影响，可为进一步研究牦牛奶对人体肠道微生态的影响提供前期数据。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在提供了一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，具体为通过牦牛奶在体外培养中促进大肠杆菌菌株氨苄青霉素抗性BL21、氨苄青霉素抗性DH5α、无抗BL21、无抗DH5α的生长，同时降低菌液的pH值。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0006]一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0007]步骤一、获取氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液；
[0008]步骤二、获取无抗BL21和无抗DH5α菌液：
[0009]步骤三、牦牛奶制备：r/>[0010]步骤四、分组培养；
[0011]步骤五：pH值的测定。
[0012]优选地，在步骤一中，所述氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液的获取，包括如下步骤：
[0013]步骤(1)、分别取1μL pcDNA3.1(+)质粒转化至100μL E.coli DH5α感受态细胞和100μL BL21感受态细胞，冰上静置30min，42℃水浴30
‑
90s后冰上静置2
‑
5min；
[0014]步骤(2)、在步骤(1)得到的菌液中加入900μL LB液体培养基，于37℃下，220r/min摇床复苏1h；
[0015]步骤(3)、取步骤(2)得到的100
‑
200μL菌液涂布于含抗生素的LB固体培养基，37℃恒温箱倒置培养16h；
[0016]步骤(4)、挑取步骤(3)得到的转化子接种于含4mL LB培养基的试管中，37℃、220r/min振荡培养12h，得到氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液。
[0017]所述含抗生素的LB固体培养基中的抗生素仅用氨苄青霉素，与培养基的添加比例
均为1：1000。
[0018]优选地，在步骤二中，取100μL E.coli DH5α感受态细胞和100μL BL21感受态细胞，分别加入900μL LB液体培养基，于37℃下，220r/min摇床活化12h，得到无抗BL21和无抗DH5α菌液。
[0019]优选地，在步骤三中，牦牛奶经冻干机冷冻成块，称取奶粉溶于纯水中，配得25mg/mL浓度的奶液，用0.22μm滤膜过滤后试验。
[0020]优选地，在步骤四中，分组为对照组、5mg/mL组和0.5mg/mL组。
[0021]所述对照组在试管中加入9.8mL LB液体培养基，再接种200μL活化好的新鲜菌液；
[0022]所述5mg/mL组在试管中添加7.8mL LB液体培养基，再添加2mL牦牛奶(25mg/mL)，接种200μL活化好的新鲜菌液，其中氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α两组使用含抗生素的LB培养基；
[0023]所述0.5mg/mL组在试管中添加7.8mL LB液体培养基，再添加2mL牦牛奶(2.5mg/mL)，接种200μL活化好的新鲜菌液，其中氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α两组使用含抗生素的LB培养基；
[0024]分别在37℃，220r/min下培养20h。
[0025]优选地，在步骤五中，每次测定前用无菌纯水清洗pH计探针，直接插入培养液体中测量pH值，每个样品测定三次取平均值。
[0026]本专利技术具有以下有益效果：
[0027]1、通过添加5mg/mL牦牛奶促进大氨苄青霉素抗性BL21、氨苄青霉素抗性DH5α、无抗BL21、无抗DH5α在LB培养基中增殖。
[0028]2、通过添加5mg/mL牦牛奶使菌液的pH值降低。
附图说明
[0029]图1是本专利技术中氨苄青霉素抗性BL21(A)、氨苄青霉素抗性DH5α(B)、无抗BL21(C)、无抗DH5α(D)在LB培养基中增殖情况图；
[0030]图2是本专利技术中培养20小时菌液pH值的比较图。
具体实施方式
[0031]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0032]实施例1
[0033]一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，包括如下步骤：
[0034]步骤一、获取氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液；
[0035]步骤二、获取无抗BL21和无抗DH5α菌液：
[0036]步骤三、牦牛奶制备：牦牛奶经冻干机冷冻成块，称取奶粉溶于纯水中，配得25mg/mL浓度的奶液，用0.22μm滤膜过滤后试验；
[0037]步骤四、分组培养；分组为对照组、5mg/mL组和0.5mg/mL组；
[0038]步骤五：pH值的测定；每次测定前用无菌纯水清洗pH计探针，直接插入培养液体中
测量pH值，每个样品测定三次取平均值。
[0039]优选地，在步骤一中，所述氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液的获取，包括如下步骤：
[0040]步骤(1)、分别取1μL pcDNA3.1(+)质粒转化至100μL E.coli DH5α感受态细胞和100μL BL21感受态细胞，冰上静置30min，42℃水浴60s后冰上静置3min；
[0041]步骤(2)、在步骤(1)得到的菌液中加入900μL LB液体培养基，于37℃下，220r/min摇床复苏1h；
[0042]步骤(3)、取步骤(2)得到的100μL菌液涂布于含抗生素的LB固体培养基，37℃恒温箱倒置培养16h；所述含抗生素的LB固体培养基中的抗生素仅用氨苄青霉素，与培养基的添加比例均为1：1000；
[0043]步骤(4)、挑取步骤(3)得到的转化子接种于含4mL LB培养基的试管中，37℃、220r/min振荡培养12h，得到氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液。
[0044]优选地，在步骤二中，取100μL E.coli DH5α感受态细胞和1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、获取氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液；步骤二、获取无抗BL21和无抗DH5α菌液：步骤三、牦牛奶制备：步骤四、分组培养；步骤五：pH值的测定。2.根据权利要求1所述的一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，其特征在于：在步骤一中，所述氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液的获取，包括如下步骤：步骤(1)、分别取1μL pcDNA3.1(+)质粒转化至100μL E.coli DH5α感受态细胞和100μL BL21感受态细胞，冰上静置30min，42℃水浴30
‑
90s后冰上静置2
‑
5min；步骤(2)、在步骤(1)得到的菌液中加入900μL LB液体培养基，于37℃下，220r/min摇床复苏1h；步骤(3)、取步骤(2)得到的100
‑
200μL菌液涂布于含抗生素的LB固体培养基，37℃恒温箱倒置培养16h；步骤(4)、挑取步骤(3)得到的转化子接种于含4mL LB培养基的试管中，37℃、220r/min振荡培养12h，得到氨苄青霉素抗性BL21和氨苄青霉素抗性DH5α菌液。3.根据权利要求2所述的一种体外刺激大肠杆菌生长的方法，其特征在于：所述含抗生素的LB固体培养基中的抗生素仅用氨苄青霉素，与培养基的添加比例均为1：1000。4.根据权利要求1所述的一种体外刺激大肠杆菌生长的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：马忠仁，粟雨芯，苏君鸿，李方琳，田晓静，乔自林，
申请(专利权)人：西北民族大学，
类型：发明
国别省市：